錢龍梁，薛 源，李 檸，李 強(qiáng)，曹福亮，2* ，汪貴斌，2

嫁接是無(wú)性繁殖的一種方式，是將接穗通過某種方法嫁接到砧木上，通過砧木和接穗的親和力來形成愈傷組織從而達(dá)到成活，產(chǎn)生嫁接苗木。因嫁接能保持和發(fā)展優(yōu)良種性，實(shí)現(xiàn)早期豐產(chǎn)，促使樹木矮化，能充分利用野生樹種資源，能對(duì)現(xiàn)有的樹種改良換優(yōu)、提高樹種的適應(yīng)性，因此無(wú)性繁殖是商業(yè)種植極有效的方法之一。人們利用接穗、環(huán)境條件對(duì)砧木的影響，來選育合適的繁殖材料。前人研究認(rèn)為，砧木是原始繁殖材料極其重要的一部分，砧木影響嫁接成活、接穗后期的生長(zhǎng)發(fā)育［1-4］、營(yíng)養(yǎng)吸收［5-6］、光合［7-9］、抗性［10-13］，與此同時(shí)也對(duì)苗木產(chǎn)量和品質(zhì)等產(chǎn)生一定的影響。葉用林的大面積種植中更多采用播種繁殖，而嫁接繁殖現(xiàn)象尚未引起人們的足夠重視［14］，另外在嫁接時(shí)候，人們更多考慮砧木對(duì)嫁接成活的影響，而對(duì)于接穗、環(huán)境條件及二者互相影響對(duì)嫁接成活的影響關(guān)注度不多。環(huán)境條件與接穗相互作用是嫁接成活中的一個(gè)潛在的問題。因此，本研究采用4個(gè)品種接穗嫁接在南方3個(gè)地方來研究接穗品種、環(huán)境條件以及二者共同作用對(duì)銀杏嫁接成活和接穗后期生長(zhǎng)的影響，以期篩選合適的接穗生長(zhǎng)在合適的地方，為銀杏果葉兼用林大面積種植提供繁殖材料。

1 研究區(qū)概況

試驗(yàn)地3個(gè)地點(diǎn)分別是廣東省云浮市前鋒鎮(zhèn)菜坑村、四川省達(dá)州市開江縣和云南省曲靖市沾益縣。前鋒鎮(zhèn)位于云浮市城區(qū)南面(112°05'E，22°49'N)，海拔754 m，屬南亞熱帶季風(fēng)氣候。累年平均氣溫21.3℃，降水量1 850 mm，霜日7 d。開江縣域介于107°42'－108°05'E、30°47'－31°15'N，平均海拔 700 m，屬于中亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候區(qū)，氣候溫和，熱量充足，四季分明，雨量豐沛，季風(fēng)氣候明顯，立體氣候突出，年均溫16.6℃，年降水 1 259.2 mm，年日照1 386.6 h，無(wú)霜期長(zhǎng)達(dá) 282.6 d。云南省曲靖市沾益區(qū)沾益縣(103°58'E，25°52'N)，海拔 2 100 m，全年氣候溫和，降水充沛，干濕季分明，屬低緯度高原季風(fēng)氣候。年平均氣溫16.3～18.6℃，極端最高溫33.1℃，極端最低溫－9.2℃，年日照時(shí)數(shù) 2 098 h，日照率47%，全年無(wú)霜期 255 d左右，年均降雨量1 002 mm，5－10月降水量占全年降水的89%。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2017年3月18日，從江蘇省邳州市陳樓鎮(zhèn)銀杏種質(zhì)資源圃選取4個(gè)品種的接穗，分別是古銀杏(葉豐)、泰興大佛指、27#(南京林業(yè)大學(xué)一品種)、57#(大花穗)，每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)都嫁接4個(gè)品種的接穗，同一個(gè)試驗(yàn)地點(diǎn)的砧木都是相同品種的3年生實(shí)生苗，每個(gè)品種的接穗都采自同一樹齡的銀杏樹上，3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)均由同一嫁接員采用劈接方法進(jìn)行嫁接，由于3個(gè)地點(diǎn)距離較遠(yuǎn)，故嫁接時(shí)間前后相差1～2 d，且同一品種的接穗長(zhǎng)短、粗細(xì)基本一致，接穗長(zhǎng)15 cm，直徑為5 mm，所有接穗均是雙芽。由于接穗數(shù)量有限，故在廣東嫁接古銀杏60株、泰興大佛指90株、27#和57#各120株;在云南嫁接古銀杏30株、泰興大佛指60株、27#和57#各120株;在四川嫁接古銀杏30株、泰興大佛指60株、27#和57#各120株。每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的每個(gè)品種均有3個(gè)重復(fù)，采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，嫁接后3個(gè)地方的水肥管理均按照嫁接員提供的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實(shí)施。

2.2 指標(biāo)測(cè)定及方法

2.2.1 生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定 2017年5月份分別統(tǒng)計(jì)3個(gè)地方的嫁接存活率，8月和9月初分別測(cè)定在與砧木接合點(diǎn)上方10 cm處有效芽抽出來的接穗一級(jí)分枝的基徑D、新枝長(zhǎng)H。并從測(cè)量的接穗一級(jí)分枝的上、中、下3個(gè)部位采取3～5葉，所有葉樣均采用干冰保存帶回后放入－193℃的超低溫冰箱保存，用于后期測(cè)可溶性糖和蛋白。

2.2.2 可容性蛋白質(zhì)測(cè)定 采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測(cè)定［15］。稱取鮮葉樣0.5 g，用 5 mL蒸餾水或者緩沖液研磨成勻漿后，10 000 r·min－1離心10 min，上清液即為粗酶提取液。吸取樣品1 mL(視蛋白質(zhì)含量適當(dāng)稀釋)，放入試管中(設(shè)3個(gè)重復(fù)管)，加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，充分混合，放置2 min后在595 nm下比色，記錄吸光度值，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)含量。帶入公式計(jì)算:

式中，C為查標(biāo)準(zhǔn)曲線值(μg·mL－1);VT為提取液總量(mL);WF為樣品鮮重(g);V為測(cè)定時(shí)加樣量(mL)。

2.3.3 可溶性糖的測(cè)定 采用蒽酮比色法測(cè)定［15］。采取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10～0.30 g，共3 份，或干材料。分別放入3 支刻度試管中，加入5～10 mL蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min(提取2次)，提取液過濾入25 mL容量瓶中，反復(fù)漂洗試管及殘?jiān)ㄈ葜量潭?。吸取樣品提取?.5 mL于20 mL刻度試管中(重復(fù)3次)，加蒸餾水 1.5 mL，再向試管中加入 0.5 mL 蒽酮乙酸乙酯試劑和5 mL濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準(zhǔn)確保溫1 min，取出后自然冷卻至室溫，在630 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度值，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得可溶性糖含量。帶入公式計(jì)算:

2.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，用SPSS 19.0軟件中Duncan法對(duì)差異顯著指標(biāo)進(jìn)行方差分析［16］。

3 結(jié)果與分析

3.1 接穗、試驗(yàn)地點(diǎn)對(duì)嫁接存活的影響

同一品種在不同地方嫁接成活率差異顯著，而同一地點(diǎn)不同品種間差異不顯著。總體表現(xiàn)為4種接穗在四川的嫁接存活率最高(表1)，其中泰興大佛指、57#、27#在云南嫁接存活率均高達(dá)90%多，這3個(gè)品種在廣東接穗嫁接存活率均不高，分別為69.0%、59.7%、38.7%，古銀杏在云南的嫁接存活率為76.0%;四川為 85.0%;廣東最低為 44.7%，另外古銀杏、27#這2個(gè)品種接穗在云南、四川的嫁接存活率均超過50%，而在廣東嫁接存活率均不超過50%。4種接穗在云南、四川嫁接存活率幾乎一致，而在廣東則差距很大，這可能與廣東氣候、地理?xiàng)l件及砧木情況有關(guān)。

3.2 接穗、試驗(yàn)地點(diǎn)對(duì)接穗一級(jí)分枝的影響

不同品種嫁接在同一地方接穗一級(jí)分枝的基莖在8月表現(xiàn)為品種間差異不顯著，新枝長(zhǎng)在廣東、四川均表現(xiàn)為品種間差異不顯著，在云南，泰興大佛指、27#、57#間未出現(xiàn)顯著性差異，27#、57#均與古銀杏差異顯著，大佛指與古銀杏間差異不顯著。而9月則表現(xiàn)為，新枝長(zhǎng)在云南、四川品種間差異不顯著，在廣東，泰興大佛指與古銀杏差異顯著，與其他2個(gè)品種差異不顯著，古銀杏、27#、57#這3個(gè)品種均未出現(xiàn)顯著差異。在廣東、四川嫁接后的4個(gè)品種間的基莖均未出現(xiàn)顯著性差異，而在云南，古銀杏、27#、57#這3個(gè)品種間的基莖無(wú)顯著差異，古銀杏與大佛指的基莖出現(xiàn)顯著差異，而27#、57#均與泰興大佛指的基莖差異不顯著(表2)。

表1 不同接穗、地方對(duì)銀杏嫁接存活率的影響Table 1 Survival rates of 4 Ginkgo varieties in 3 sites %

3.3 接穗、試驗(yàn)地點(diǎn)對(duì)可溶性糖含量的影響

不同品種接穗嫁接在同一個(gè)地方對(duì)銀杏中可溶性糖含量的影響表現(xiàn)出顯著性差異。8月4種接穗在云南嫁接后表現(xiàn)為:27#、泰興大佛指均與古銀杏、57#呈顯著差異，兩者之間未出現(xiàn)顯著性差異，其中含量最高的是27#，為4.31%，含量最低的是古銀杏為2.70%。在廣東表現(xiàn)為:27#與其他3個(gè)品種的均呈顯著差異，古銀杏、泰興大佛指、57#三者之間無(wú)明顯差異，在該試驗(yàn)點(diǎn)可溶性糖含量最高是27#為5.82%，含量最低的是57#為3.49%。在四川則表現(xiàn)為:57#與古銀杏、泰興大佛指呈顯著差異，與27#無(wú)明顯差異，27#與泰興大佛指無(wú)明顯差異，與古銀杏出現(xiàn)顯著性差異，泰興大佛指與古銀杏呈顯著性差異。9月4種接穗在云南嫁接后表現(xiàn)為:27#、57#兩者間無(wú)明顯差異，但均與古銀杏、泰興大佛指呈顯著差異，古銀杏與泰興大佛指也呈顯著差異。在廣東地區(qū)四者之間均未出現(xiàn)顯著性差異。在四川則表現(xiàn)為:57#與其他3個(gè)品種均呈顯著性差異，古銀杏、泰興大佛指、27#三者之間無(wú)明顯差異(表3)。

3.4 接穗、試驗(yàn)地點(diǎn)對(duì)可溶性蛋白含量的影響

不同品種接穗嫁接在同一個(gè)地方對(duì)銀杏中可溶性蛋白含量的影響表現(xiàn)出顯著性差異。8月4種接穗在四川嫁接后表現(xiàn)為:57#、泰興大佛指、古銀杏均與27#呈顯著差異，但三者之間未出現(xiàn)顯著性差異，其中含量最高的是古銀杏為1.27 mg·g－1;含量最低的是 27#為 0.73 mg·g－1。在云南表現(xiàn)為:27#、泰興大佛指、古銀杏3個(gè)品種的均未出現(xiàn)顯著性差異，其中古銀杏、泰興大佛指與57#均出現(xiàn)顯著差異，但27#與57#兩者間未出現(xiàn)顯著性差異。可溶性蛋白含量最高的是古銀杏為0.86 mg·g－1，最低的是 57#為 0.37 mg·g－1。在廣東則表現(xiàn)為:古銀杏、泰興大佛指、57#三者間未呈顯著差異，泰興大佛指、57#均與27#無(wú)明顯差異，27#與古銀杏出現(xiàn)顯著性差異，其中含量最高的是古銀杏為1.59 mg·g－1，最低的是27#為1.01 mg·g－1。9 月4 種接穗在云南嫁接后銀杏中可溶性蛋白含量均為出現(xiàn)顯著性差異，4個(gè)品種的可溶性蛋白的含量幾乎接近。在四川地區(qū)古銀杏、27#、57#三者之間均未出現(xiàn)顯著性差異，但都與泰興大佛指之間呈顯著差異。可溶性蛋白含量最高的是古銀杏為 0.97 mg·g－1，最低的是 27#為 0.74 mg·g－1。在廣東則表現(xiàn)為:27#、57#與其他 2 個(gè)品種均呈顯著性差異，且27#與57#之間呈顯著差異，古銀杏、泰興大佛指二者之間無(wú)明顯差異(表4)。

表2 不同品種嫁接在同一地方對(duì)接穗一級(jí)分枝的影響Table 2 Impact of the site on the growth of primary shoot cm

表3 不同品種嫁接在同一地方對(duì)銀杏中可溶性糖含量的影響Table 3 Impacts of variety on the soluble sugar content

表4 不同品種嫁接在同一地方對(duì)銀杏中可溶性蛋白含量的影響Table 4 Impacts of variety on the soluble protein content

4 結(jié)論與討論

相同品種接穗在不同地方嫁接后對(duì)銀杏接穗的一級(jí)分枝的新枝長(zhǎng)、基莖影響很大，相同地方不同品種接穗間差異也很大。合適的接穗嫁接在合適的地點(diǎn)對(duì)嫁接成活以及后期苗木生長(zhǎng)十分重要。

此外，環(huán)境條件差(雨水、雜草過多，土壤輕度板結(jié))的地方嫁接成活后的銀杏中可溶性蛋白含量高，但其可溶性糖的含量則相對(duì)于環(huán)境條件好(雨水適中，沙壤土)的地方有所降低?？扇苄缘鞍椎暮恐苯佑绊懼参飳?duì)重金屬污染的抵抗能力，可溶性糖的含量對(duì)植物能量的需求和代謝中間體方面有著直接影響，對(duì)苗木結(jié)構(gòu)發(fā)育也有著不同程度的間接影響。