劉應(yīng)紅　田寅　胡少軍

【摘要】 目的：探討S100A13在乳腺良惡性組織中的表達(dá)以及臨床意義。方法：選取2015年9月-2017年9月來自佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的乳腺疾病患者108例作為研究對象，其中68例乳腺癌患者為乳腺癌組，40例乳腺纖維腺瘤患者為乳腺纖維腺瘤組。通過免疫組化染色SP法檢測S100A13在兩組中的表達(dá)結(jié)果。結(jié)果：在乳腺癌組中有39例S100A13表達(dá)陽性，陽性率為57.35%，在乳腺纖維瘤組中有15例S100A13表達(dá)陽性，陽性率為37.50%，S100A13在兩組中的表達(dá)情況比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=3.971，P<0.05）。S100A13的陽性表達(dá)率在乳腺癌患者的年齡和腫塊大小上比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。而S100A13的陽性表達(dá)率隨乳腺癌的臨床分期升高而升高，Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者的S100A13陽性表達(dá)率為78.57%，明顯高于Ⅰ+Ⅱ期的52.50%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的S100A13陽性表達(dá)率為63.04%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的36.36%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：關(guān)于S100A13的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系研究較少，本研究表明S100A13可能成為判斷乳腺腫物良惡性的又一有價值的輔助檢查指標(biāo)，并有可能為乳腺癌的預(yù)后提供有意義的參考，同時成為新的治療靶點。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌； S100A13； 免疫組化

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of S100A13 in benign and malignant breast tissues and its clinical significance.Method：A total of 118 patients with breast disease in the First Affiliated Hospital of Jiamusi University from September 2015 to September 2017 were selected as the study objects.68 cases breast cancer patients were set up as breast cancer group and 40 cases breast fibroadenoma patients were set up as breast fibroadenoma group.The expression of S100A13 in two groups was detected by immunohistochemical SP method.Result：In breast cancer group，39 cases were positive for S100A13，the positive rate was 57.35%；and in breast fibroadenoma group，15 cases were positive，the positive rate was 37.50%，the expression of S100A13 between the two groups was compared，the difference was statistically significant（字2=3.971，P<0.05）.The positive expression rates of S100A13 were not significantly different in age and tumor size of breast cancer patients（P>0.05）.The positive expression rate of S100A13 increased with the clinical stage of breast cancer，the positive expression rate of S100A13 in stage Ⅲ and Ⅳ breast cancer was 78.57%，which was significantly higher than 52.50% of stage Ⅰ and Ⅱ，the difference was statistically significant （P<0.05）.The positive rate of S100A13 in patients with lymph node metastasis from breast cancer was 63.04%，which was significantly higher than 36.36% without lymph node metastasis，the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion：There is little research on the relationship between the expression of S100A13 and the occurrence and development of breast cancer.This study shows that S100A13 may be another valuable auxiliary test to judge benign and malignant breast tumor and may provide a meaningful reference of prognosis for breast cancer，while becoming a new therapeutic target.

【Key words】 Breast cancer； S100A13； Immunohistochemistry

First-authors address：The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.22.028

中國腫瘤登記中心根據(jù)我國在2016年收集上報的關(guān)于惡性腫瘤全國各登記處的資料來估計我國2013年惡性腫瘤的發(fā)病與死亡情況的最新數(shù)據(jù)顯示，女性惡性腫瘤的發(fā)病首位仍然是乳腺癌，而且每年新發(fā)的病例大約27.9萬[1]。作為臨床上女性最常見惡性腫瘤的乳腺癌不僅給女性患者的身心健康和生活質(zhì)量帶來嚴(yán)重的威脅，而且還給患者和家庭帶來了巨大精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此對乳腺癌展開研究，讓乳腺癌患者能夠及時診斷并通過綜合有效的治療來提高生存率和降低死亡率具有重要的意義。有多項研究表明鈣結(jié)合蛋白S100（S100 calcium binding protein）家族與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移及判斷腫瘤預(yù)后等有密切的聯(lián)系[2-3]。S100A13是由21個成員組成的鈣結(jié)合蛋白家族S100中較新的一個，S100A13與家族成員之間既有相同之處也有其獨特之處，相同之處在于其結(jié)構(gòu)上大致相似，功能上主要是通過對鈣離子的代謝調(diào)節(jié)和與靶蛋白結(jié)合來發(fā)揮多種生物學(xué)的作用。但同時又有研究表明S100A13在組織分布、細(xì)胞定位及生理作用等方面又有不同于其他S100蛋白家族的地方，這表明S100A13可能具有獨特的生物學(xué)功能，有其研究的意義。Pierce等[4]在一個體外細(xì)胞的試驗中發(fā)現(xiàn)，高侵襲性的肺癌細(xì)胞中S100A13含量較高，而利用RNA干預(yù)消耗S100A13mRNA后肺癌細(xì)胞的侵襲性明顯下降，因此認(rèn)為S100A13可能與肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。劉暢等[5]在甲狀腺組織中采用免疫組織化學(xué)法檢測S100A13的表達(dá)，其表達(dá)陽性率在甲狀腺癌為91.1%、甲狀腺腺瘤為66.7%、甲狀腺正常組織為64.3%，S100A13在甲狀腺癌組織中的強陽性率，提示其對甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展和淋巴轉(zhuǎn)移起重要作用。張鵬等[6]在肝癌組織、癌旁組織、正常肝組織中采用原位RT-PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)法檢測中S100A13 mRNA的表達(dá)及S100A13蛋白的表達(dá)的研究表明S100A13在肝癌組織、癌旁及正常組織中都有一定程度的表達(dá)，但肝癌組織中的表達(dá)率及表達(dá)量均明顯高于癌旁及正常組織且S100A13表達(dá)與肝癌患者的性別、年齡及其病理分級無統(tǒng)計相關(guān)性。甲狀腺癌與乳腺癌的流行病學(xué)資料顯示患病對象主要為女性，且兩者均受調(diào)于下丘腦-垂體-腺體軸，在碘的吸收、TH、性激素方面，甲狀腺癌和乳腺癌存在著或多或少的共通點[7]。有研究表明部分乳腺癌患者并發(fā)甲狀腺形態(tài)、功能甚至病理上的改變。有關(guān)S100A13報道多與甲狀腺癌有關(guān)，而在乳腺癌研究中，對于S100A13的表達(dá)情況研究及報道較少。因此，本研究旨在通過免疫組化方法檢測S100A13在乳腺良惡性疾病中的表達(dá)情況，并初步探討S100A13對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移的影響為臨床上乳腺癌患者的臨床治療及預(yù)后評估提供一定的實驗依據(jù)及新思路，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年9月-2017年9月來自佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的乳腺疾病患者108例作為研究對象，其中68例乳腺癌患者為乳腺癌組，40例乳腺纖維腺瘤患者為乳腺纖維腺瘤組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均為女性；手術(shù)前未經(jīng)過乳腺良惡性疾病的任何相關(guān)治療并未合并身體其他部位良惡性腫瘤；均已經(jīng)外科手術(shù)切除后送至本院病理科確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往已行乳腺纖維腺瘤切除術(shù)；乳腺癌術(shù)前已行放、化療；合并其他乳腺良惡性病變。在68例乳腺癌患者中，按WHO分期標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期26例，Ⅲ期22例，Ⅳ期6例；組織學(xué)分級：組織學(xué)分級Ⅰ級（高分化）16例，Ⅱ級（中分化）30例，Ⅲ級（低分化）22例?；颊吣挲g24～65歲，中位數(shù)45歲。所有患者均知曉本次研究并簽署知情同意書。該研究已經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 所有收集的病理標(biāo)本均經(jīng)4%多聚甲醛磷酸液固定然后脫水，透明后使用石蠟包埋，并制作成6.0 ?m厚的連續(xù)切片，然后行S100A13蛋白免疫組化檢測。實驗材料準(zhǔn)備：福州邁新公司購買SP試劑盒，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司購買兔抗人S100A13抗體，其余所需試劑及材料均由佳木斯附屬第一醫(yī)院病理科提供，嚴(yán)格參照試劑說明書進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)與判斷標(biāo)準(zhǔn) S100A13表達(dá)用細(xì)胞陽性百分率及細(xì)胞染色的強度兩項得分合計來進(jìn)行判定，總分<3分為陰性，>3分為陽性。隨機選擇5個高倍鏡視野（×400）進(jìn)行判斷：細(xì)胞陽性率0～5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～100%計3分。細(xì)胞染色強度與背景色相比，無色為0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 S100A13在兩組中的表達(dá)情況比較 在乳腺癌組中有39例S100A13表達(dá)陽性，陽性率為57.35%，在乳腺纖維瘤組中有15例S100A13表達(dá)陽性，陽性率為37.50%，S100A13在兩組中的表達(dá)情況比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=3.971，P<0.05），見表1。

2.2 S100A13的表達(dá)與乳腺癌組織臨床病理參數(shù)的關(guān)系 在68例乳腺癌患者中，S100A13的陽性表達(dá)與乳腺癌患者的年齡和腫塊大小無關(guān)，與乳腺癌的臨床分期與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，即S100A13的陽性表達(dá)率在乳腺癌患者≤45歲中為53.85%與>45歲中的59.52%比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；S100A13的陽性表達(dá)率在乳腺癌腫塊大小≤2 cm為57.14%，2～5 cm為58.54%，>5 cm為53.85%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。而S100A13的陽性表達(dá)率隨乳腺癌的臨床分期升高而升高，Ⅲ+Ⅳ期的乳腺癌患者S100A13陽性表達(dá)率為78.57%，明顯高于Ⅰ+Ⅱ期的52.50%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者S100A13的陽性表達(dá)率為63.04%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的36.36%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

目前多個實驗研究提示可以把S100A13作為腫瘤的預(yù)后標(biāo)志以及治療的靶點之一，人類S100A13基因定位于穩(wěn)定性差的1號染色體長臂2區(qū)1帶（1q21），其表達(dá)產(chǎn)物S100A13蛋白為酸性蛋白，其分子量為11 kD，作為一個二聚體存在的S100A13，每個單體中包含了四個α螺旋，并與兩個Ca2+結(jié)合，兩個EF手型結(jié)構(gòu)組成其立體結(jié)構(gòu)，一個EF手型由結(jié)合鈣離子的螺旋-環(huán)-螺旋配基組成，兩端為疏水區(qū)，中央為鉸鏈區(qū)，這與傳統(tǒng)的S100是一致的，而與傳統(tǒng)的S100不同之處在于，另一個EF手型的結(jié)構(gòu)域中含有一個獨特的賴氨酸殘基而且羧基端含有八個堿性氨基酸，這個獨特結(jié)構(gòu)可能影響其與Ca2+與其他蛋白結(jié)合而發(fā)揮重要的生物學(xué)效應(yīng)[8-10]。目前對S100A13的臨床研究較少，其功能的研究也主要集中在S100A13介導(dǎo)Cu2+依賴性的成纖維細(xì)胞生長因子1（fibroblast growth factor-1，F(xiàn)GF-1）和白介素-1α（interleukin-1 alpha，IL-1α）跨膜釋放上。S100A13憑借其獨特的結(jié)構(gòu)，作為一種信號肽與FGF-1和IL-1α相結(jié)合，實現(xiàn)FGF-1由胞內(nèi)向胞外的轉(zhuǎn)運，從而實現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)外的信號傳遞，這種跨膜轉(zhuǎn)運方式與傳統(tǒng)的信號肽參與的蛋白跨膜轉(zhuǎn)運不同，因此被稱為FGF-1的非經(jīng)典分泌途徑[11-12]。多研究表明S100A13是通過介導(dǎo)FGF-1的非經(jīng)典分泌途徑來增強FGF-1的表達(dá)和功能發(fā)揮作用的。有研究表明FGF-1通過讓細(xì)胞加速有絲分裂，讓內(nèi)皮細(xì)胞分泌膠原酶和蛋白水解酶來使膠原水解和沉積形成管腔樣的結(jié)構(gòu)，讓血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞發(fā)生增生遷移來形成新生血管，以此來促進(jìn)癌的轉(zhuǎn)移[13]。此外，還有研究表明S100A13能引起細(xì)胞的過度增值，主要是通過啟動其他蛋白質(zhì)的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄來發(fā)揮作用，S100A13和FGF-1能與多種酸性磷脂結(jié)合，結(jié)合后不僅提高了蛋白復(fù)合體穿過細(xì)胞膜的速度，而且蛋白復(fù)合體經(jīng)磷酸化修飾后再結(jié)合于DNA的特定增強子上，從而引起細(xì)胞過度增殖[14]。Brewer等[15]利用了Cu2+的螯合劑四硫鉬酸鹽（Tetrathiomolybdate，TM）治療第Ⅳ期的乳腺癌，研究發(fā)現(xiàn)使用TM后不僅乳腺癌腫內(nèi)的FGF-1和IL-1α的表達(dá)明顯下降而且乳腺癌腫的生長速度以及其淋巴轉(zhuǎn)移都有所減慢。探究TM治療乳腺癌的作用可能是通過螯合Cu2+后阻止了其所介導(dǎo)的FGF-1和IL-1α的釋放所發(fā)揮的。已經(jīng)證實S100A13的在促進(jìn)的FGF1和IL-1α的釋放方面的作用，這在腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移中有重要意義，同時也提示S100A13可能是乳腺癌治療的一個新靶點，F(xiàn)GF-1釋放顯著降低后，腫瘤新生的血管可能會被阻斷，那么癌腫大小將逐漸縮小，為外科手術(shù)提供很多可行性。

綜上所述，本研究表明S100A13的在良惡性乳腺腫物判斷有難度時，可能會提供有價值的實驗室檢測指標(biāo)，同時表明S100A13與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)系，對判斷乳腺癌的生物學(xué)行為，惡性程度和預(yù)后具有一定的作用，可能為預(yù)測乳腺癌患者病情發(fā)展及指導(dǎo)臨床治療提供新指標(biāo)及新思路。

參考文獻(xiàn)

[1]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等.2013年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國腫瘤，2017，26（1）：1-7.

[2] Bresnick A R，Weber D J，Zimmer D B.S100 proteins incancer[J].Nat Rev Cancer，2015，15（2）：96-109.

[3] Nasser M W，Elbae M，Ahirrwa D K，et al.Conditioning solid tumor microenvironment through inflammatory chemokines and S100 family proteins[J].Cancer Lett，2015，365（1）：11-22.

[4] Pierce A，Barron N，Linehan R，et al.Identification of a novel，functional role for S100A13 in invasive lung cancer cell lines[J].Eur J Cancer，2008，44（1）：151-159.

[5]劉暢，曹仁賢，鐘警，等.甲狀腺癌組織中S100A13、FGF-1表達(dá)及意義[J].實用癌癥雜志，2009，24（1）：19-21，25.

[6]張鵬，黃朋，郭先文，等.鈣結(jié)合蛋白S100A13在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國腫瘤生物治療雜志，2011，18（2）：206-210.

[7]陳劍.甲狀腺癌與乳腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國癌癥雜志，2011，21（2）：148-152.

[8] Ridinger K，Schafer B W，Durussel I，et al.S100A13：Biochemical characterization and subcellular localization in different cell lines[J].

J Biol Chem，2000，275（12）：8686-8694.

[9] Imai F L，Nagata K，Yonezawa N，et al.Structure of calcium-bound human S100A13 at pH 7.5 at 1.8 A resolution[J].Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun，2008，64（Pt2）：70-76.

[10] Donato R.S100：a multigenic family of calcium-modulated proteins of the EF-hand type with intracellular andextracellular functional roles[J].Int J Biochem Cell Biol，2001，33（7）：637-668.

[11]楊靖，曹仁賢，文格波.鈣結(jié)合蛋白S100A13的研究進(jìn)展[J].臨床與病理雜志，2005，25（2）：156-158.

[12]王奕平，周家華.鈣結(jié)合蛋白S100A13與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].東南大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2017，36（4）：670-673.

[13] Billottet C，Janji B，Thiery J P，et al.Rapid tumor development and potent vascularization are independent events in carcinoma producing FGF-1 or FGF-2[J].Oncogene，2002，21（53）：8128-8139.

[14] Matsunaga H，Ueda H.Voltage-dependent N-type Ca2+ channel activity regulatesthe interaction between FGF-1 and S100A13 forstress-induced non-vesicular release[J].Cell Mol Neurobiol，2006，26（3）：237-246.

[15] Brewer G J.Copper control as an antiangiogenic anticancer therapy：lessons from treating Wilsons diseases[J].Exp Bio Med，2001，226（7）：665-673.

（收稿日期：2018-02-07） （本文編輯：李瑩瑩）