祝雯雯 吳畏畏 孫傳武 畢俊 杜陽光 童晶

2015年6月徐州市接連發(fā)生兩起呼吸道感染的暴發(fā)疫情,14日云龍區(qū)云興小學三年級某班級58名學生中有32名學生相繼出現(xiàn)發(fā)熱、咽痛和咳嗽等癥狀。21日沛縣魏廟房村小學二年級某班級學生也陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽患者,部分病例伴有頭痛、流鼻涕、打噴嚏等流感樣癥狀。所有患者均有不同程度的咳嗽,伴有打噴嚏、全身酸痛、流鼻涕癥狀。兩所學校所在的縣區(qū)疾病預防控制中心分別組織流行病學和檢驗專業(yè)人員前往調查處置。

1 材料與方法

1.1 標本采集 根據病例的臨床特點,制定診斷標準,凡符合腋下體溫≥38℃伴咳嗽、咽痛、頭痛等癥狀或扁桃體紅腫發(fā)炎、眼結膜充血等體征,血常規(guī)WBC正?；蛏?、X線檢查肺紋理增粗等輔助檢查結果均作為臨床診斷病例上報。臨床診斷病例均由疾病預防控制中心專業(yè)人員進行流行病學個案調查,分別采集云興小學5名和房村小學10名現(xiàn)癥患病學生病例咽拭子,立即放入3～4 ml病毒采樣液中,在4℃條件下,24 h內運送至徐州市疾病預防控制中心實驗室進行病原學檢測。

1.2 標本病毒核酸提取 采用QIAamp viral DNA mini kit試劑盒,按照說明書,提取咽拭子標本的病毒核酸,用于病毒核酸檢測。

1.3 病毒Real-time PCR檢測 腺病毒熒光定量PCR的引物和探針參照童晶等［1］2013年的研究。

1.4 病毒核酸序列分析 針對Real-time PCR陽性核酸擴增腺病毒六鄰體蛋白(hexon)基因,引物序列信息和反應條件見參考文獻［2］設計的AD52與ADSD。擴增片段位于基因組L3基因內,產物長度約為970 bp。PCR陽性產物送到青島擎科梓熙生物技術有限公司進行測序。測序結果在GenBank中進行BLAST對比分析。

2 結果

2.1 臨床癥狀 兩次暴發(fā)的患病學生多有發(fā)熱癥狀(高熱多見),咽痛癥狀明顯,均伴有不同程度的咳嗽、打噴嚏、全身酸痛、流鼻涕癥狀。大部分患者體征檢查顯示咽部充血、咽部濾泡,部分并發(fā)扁桃體腫大、炎癥等,普遍全身癥狀較輕；并發(fā)癥少見,少數(shù)發(fā)生輕度腦炎。

2.2 時間分布 兩起疫情總體上呈現(xiàn)明顯的單峰分布特點,首例病例出現(xiàn)開始后第3天出現(xiàn)發(fā)病高峰,之后開始持續(xù)下降,2～3 d后沒有新發(fā)病例報告,病程5 d左右,預后良好,無死亡病例。

2.3 人群分布 兩所學校的暴發(fā)疫情均發(fā)生在同一班級班內,呈現(xiàn)明顯的班級聚集性。流行病學調查中,云興小學32名患病學生中,男生17人,女生15人,男女患病學生之比為1.26∶1。房村小學12名患者中,男生8人,女生4人,男女患病學生之比為2∶1。

2.4 病原學檢測 提取15份咽拭子標本病毒核酸,Real-time PCR檢測有12例腺病毒陽性。將陽性核酸針對腺病毒六鄰體蛋白基因進行PCR擴增,9份標本出現(xiàn)特異性目的條帶。測序結果進行BLAST比對分析,發(fā)現(xiàn)引起本次暴發(fā)流行的腺病毒型別為AdV14型,分析所得9份核苷酸序列完全一致,同源性為100%。

收集2013—2015年徐州市兒童醫(yī)院就診的急性呼吸道感染疾病標本,共檢測出5例腺病毒14型的病例,比較分析六鄰體蛋白基因核苷酸序列與此次暴發(fā)檢出的序列完全一致,同源性為100%。另選取2013年檢出的腺病毒7型和55型病例各1株和GenBank上得到1株參考株,進行遺傳進化分析,結果見圖1。

圖1 2016年暴發(fā)腺病毒14型與2013～2015年徐州地區(qū)散發(fā)腺病毒六鄰體基因進化樹BF:Samples from the outbreaks in 2016；△:AdV14 sporadic samples from 2013-2015；▲:Sequences of reference strains Fig.1 Phylogenetic tree of the hexon gene of human adenovirus samples from the outbreak of type14 and sporadic samples from 2013-2015 in Xuzhou

3 討論

腺病毒是一群分布十分廣泛的DNA病毒,能引起人類呼吸道、胃腸道、泌尿系統(tǒng)及眼部疾病。腺病毒感染主要以呼吸道感染癥狀為主［3］。呼吸道腺病毒感染主要通過空氣飛沫傳播、密切接觸等途徑傳播,暴發(fā)主要集中在高度密集、擁擠和潮濕的環(huán)境,如入伍新兵營、寄宿制學校、養(yǎng)老院等［4］。近幾年來,國內外報道了多起由腺病毒引起的呼吸道感染疾病在學校內的暴發(fā)流行［5］,根據患者的臨床表現(xiàn)和流行病學調查,結合實驗室檢測結果,本研究初步判定6月份發(fā)生在徐州市的兩起暴發(fā)均為腺病毒引起上呼吸道感染疫情?；疾W生主要集中在一個班級內部,并沒有向外擴散,室內相對密閉空間和相互接觸頻繁可能是此次暴發(fā)的主要原因。建議暴發(fā)疫情所在班級停課1周,課間減少同其他班級同學的交流,不參加大教室上課,學校近期停止舉行大規(guī)模的集體性室內活。提倡學生保持個人衛(wèi)生,積極參加戶外活動,增強體質,同時做好個人防護工作。

目前研究普遍認為腺病毒是引起嬰幼兒呼吸道感染的主要致病因素［6-7］。我國不同地區(qū)研究報道引起呼吸道感染的腺病毒血清型主要有1、2、3、4和7型等［8］,其中3型和7型腺病毒所導致的下呼吸道感染占所有腺病毒導致感染的50%［9］。通過對2011—2012年在徐州市兒童醫(yī)院就診的急性呼吸道患兒進行病原學檢測,顯示腺病毒型別以B亞組的3和7型及C亞組2型為主。六鄰體基因是腺病毒的主要抗原蛋白,含有大量的抗原表位,不同型別的六鄰體有很高的保守(78% ～95%),這些保守的區(qū)域,可作為病毒型別鑒別依據［10］。本次暴發(fā)疫情腺病毒檢測針對六鄰體蛋白基因,對陽性PCR產物進行序列測定,BLAST分析顯示為腺病毒14型,9份六鄰體基因核苷酸序列完全一致,同源性為100%。說明此次暴發(fā)可能為同一傳染源引起。

1955年首先在荷蘭發(fā)現(xiàn)了腺病毒14型,其暴發(fā)首先于2005年發(fā)生在美國俄勒岡州,2007年成為優(yōu)勢流行毒株,先后在紐約、俄勒岡、華盛頓和德州等4個州出現(xiàn)AdV14型變異株引起的急性呼吸道疾病暴發(fā)。大型暴發(fā)感染得報道僅限于美國和中國,感染涉及各個年齡組,死亡率低。此次疫情是徐州市首次報道以腺病毒14型引起的呼吸道疾病的暴發(fā),與2011年甘肅首例報道的學校內暴發(fā)腺病毒14型的六鄰體核苷酸序列基因序列(GenBank序列號JX310315.1)同源性高達100%［11］。在徐州市收集的兒童呼吸道疾病監(jiān)測病例中腺病毒14型零星出現(xiàn),2013—2015年的共發(fā)現(xiàn)5例AdV14型,比較分析六鄰體蛋白基因核苷酸序列與此次暴發(fā)序列完全一致,同源性為100%。由于檢測方法局限于腺病毒六鄰體蛋白基因,未發(fā)現(xiàn)核苷酸序列變異,還需要進一步檢測E1A、Fiber等基因,以及是全基因組序列,以確定徐州市發(fā)生的腺病毒14型是否發(fā)生變異。鑒于腺病毒本身的特性,其生存能力很強,能夠抵抗環(huán)境的變化；它們能在人際間直接傳播,也能間接從環(huán)境傳播至人。相當一部分AdV14型暴發(fā)感染事件發(fā)生在一個團體內(如學校和軍營),提示密切接觸是一個重要因素。

利益沖突 無