圖蓀古麗·托合提 萬傳星

(新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木盆地生物資源保護(hù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 新疆 阿拉爾 843300)

1 前言

紅景天(Rodiolarosea)是景天科(Crassulaceae)紅景天屬(Rodiola)植物，在我國(guó)共計(jì)有80多種、7變種、2亞種，主要分布在西南、東北及華北地區(qū)，尤以四川、云南以及西藏高寒地區(qū)種類最多，在新疆資源豐富，多以根莖入藥，屬于珍稀藥用植物。紅景天有活血止血、清肺止咳的功效，臨床上用于治療咳血、冠心病、腦血管疾病，呼吸系統(tǒng)疾病，還有提高缺氧耐受力等功效[1]。紅景天活性成分包括黃酮類、多糖類、苷類、有機(jī)酸類、鞣質(zhì)類和甾醇類化合物[2]。楊連梅等[3]從紅景天根乙醇提取物中分離鑒定了11個(gè)化合物；趙娜等[4]從紅景天根乙醇提取乙酸乙酯萃取物中分到鑒定了17個(gè)化合物；婁紅祥等[5]從紅景天根莖的石油醚提取物中分離鑒定了3個(gè)三萜類化合物；王方宇等[6]從紅景天30%乙醇提取物中分離了7個(gè)黃酮類化合物；何成輝等[7]從紅景天水提取物正丁醇萃取相和氯仿萃取相中分離鑒定了12個(gè)具有抗氧化活性的黃酮類和苷類化合物；Jeong等[8]從紅景天根莖95%甲醇提取物中分離到14個(gè)黃酮類化合物。為了進(jìn)一步明確紅景天中大極性部位化學(xué)成分結(jié)構(gòu)，本實(shí)驗(yàn)以紅景天根莖為實(shí)驗(yàn)材料，采用現(xiàn)代色譜分離和波譜鑒定方法，分離并鑒定了10個(gè)化合物，其中2個(gè)化合物首次從該屬植物中分離得到，豐富了紅景天化學(xué)成分庫(kù)，同時(shí)也為明確該植物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用植物材料紅景天根莖于2017年2月采購(gòu)于新疆阿克蘇市。

2.2 儀器與試劑

大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(LR20，Heidolph，德國(guó))；LC-20AT高效液相色譜儀(含LC-20 AT二元高壓梯度泵，SPD-M20A紫外檢測(cè)器，LabSolutions色譜工作站，日本島津公司)；Agilent HPLC色譜柱(4. 6×250 mm，5 μm，美國(guó)Agilent 公司)；核磁共振儀500 MHz(瑞士Bruker公司)；Waters制備液相色譜儀(Waters2489紫外檢測(cè)器，Waters2545二元高壓梯度泵，美國(guó)Waters公司)；D101大孔樹脂(天津浩聚公司)；色譜級(jí)甲醇(Dikma公司)；分析純?cè)噭┘状迹掖?，丙酮，二氯甲烷均?天津福晨化學(xué)試劑長(zhǎng)廠)；碘顯色劑。

2.3 提取與分離方法

將紅景天根莖1. 0 kg，粉碎后用75%乙醇80 ℃下回流提取兩次，合并濾液后減壓濃縮得浸膏213 g，乙醇浸膏用水溶解，經(jīng)D101大孔吸附樹脂柱層析，以20%，60%，95%乙醇-水梯度洗脫，得到三個(gè)組分，其中大孔樹脂20%甲醇-水洗脫部位(15. 5 g)經(jīng)ODS反相柱層析，以20%, 40%, 60%，95%甲醇-水梯度洗脫，其中ODS 20%甲醇-水洗脫部位(5. 0 g)經(jīng)甲醇溶解，通過pHPLC(20%甲醇-水，λ= 330 nm，45 min)得化合物1 (10 mg, pRT=26. 60 min), 化合物2 (10 mg, pRT=26. 60 min), 化合物3 (7 mg, pRT=34. 60 min)。大孔樹脂60%甲醇-水洗脫部位(26 g)經(jīng)ODS柱色譜(40%, 80% 甲醇-水，60 min)洗脫，ODS 40%甲醇-水洗脫部通過pHPLC(20%～80% 甲醇-水，λ=334 nm，60 min)得化合物4 (25 mg，pRT=18. 60 min)，化合物5 (6 mg，pRT=38. 60 min)，化合物6 (7 mg，pRT=37. 20 min)，化合物7 (7. 2 mg，pRT=45. 05 min)。大孔樹脂洗脫之前不溶于水的部分，依次用丙酮，甲醇溶解后，經(jīng)再次過pHPLC(40%～80% 甲醇-水，λ=275 nm，40 min)，得到化合物8 (7. 4 mg, pRT=18. 85 min)，化合物9 (8. 1 mg, pRT=21. 87 min) 和化合物10(22 mg，pRT=14. 28 min)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

本實(shí)驗(yàn)采用D101大孔樹脂洗脫，ODS柱層析，高效液相色譜(HPLC)分析法，制備液相色譜(pHPLC)等分離技術(shù)手段和1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC等波譜鑒定方法從紅景天根莖乙醇提取物中分離鑒定了10個(gè)化合物，分別為酪醇(1)、1,1-二甲基烯丙醇-β-D-葡萄糖苷(2)、紅景天苷(3)、草質(zhì)素-7-O-(3′′-O-β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷(4)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)、山奈酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(6)、1,2,3,4,6-五-O-沒食子?；咸烟?7)、山奈酚(8)、rhodiolin(9)、草質(zhì)素-7-O-α-L-鼠李糖苷(10)。結(jié)構(gòu)見圖1：

圖1 化合物1-10的結(jié)構(gòu)式

化合物1：白色粉末，1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ∶7.05 (2H, d,J=7. 5 Hz ,H-2,6), 6.73(2H, d,J=7. 5 Hz, H-3,5), 3.71 (2H, m, H-β), 2.73 (2H, m, H-α );13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ∶129.5 (C-1), 129.6 (C-2, 6), 114.8 (C-3, 5), 155.3 (C-4), 38.0(C-α), 63.3 (C-β)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)對(duì)照基本一致[9]，因此確定化合物1為酪醇。

化合物2：白色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶6.07(1H, dd,J=7. 8 Hz, H-2'), 5.12 (1H, dd,J=7. 2 Hz,H-3), 4.36 (1H, d,J=7. 6 Hz,H-1'), 1.36 (2H, s,H-CH3-2);13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ∶ 77.7 (C-1), 143.9 (C-2), 113.1 (C-3), 26.5 (CH3-1), 25.3 (CH3-2), 98.2 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.7 (C-3′), 70.3 (C-4′), 76.2 (C-5′), 61.3(C-6′)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)對(duì)照基本一致[10]，因此確定化合物2為1,1-二甲基烯丙醇-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3：白色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶7.08 (2 H, d,J=8. 5 Hz, H-3,5), 6.73 (2 H, d ,J=8. 4 Hz, H-2, 6), 4.34 (2H, d,J=7. 5 Hz, H-1′), 4.05 (2H, m, H-β), 2.85 (2H, m, H-α);13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ∶129,4 (C-1), 129.6 (C-2,6), 114.8 (C-3,5), 155.3 (C-4), 35.0 (C-α), 70.7 (C-β), 102.8 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.6 (C-3′), 70.1 (C-4′), 76.4 (C-5′), 61.4 (C-6′)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)對(duì)照基本一致[11]，因此確定化合物3為紅景天苷。

化合物4：黃色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶8.22 (2H, d,J=8. 0 Hz, H-2′,6′), 6.93 (2 H, d,J=8. 0 Hz, H-3′,5′), 6.66 (1H, s, H-2), 5.56 (2H, d,J=7. 5 Hz), 4.71 (2H, d,J=7. 5 Hz, H-10), 4.46 (1H, s);13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ∶147.3 (C-2), 135.9 (C-3), 176.4 (C-4), 149.5 (C-5), 99.5 (C-6), 152.4 (C-7), 127.1 (C-8), 144.1 (C-9), 104.7 (C-10), 122.3 (C-1′), 129.7 (C-2′, 6), 114.8 (C-3′, 5′), 159.3 (C-4′), 99.1 (C-1′′), 69.6 (C-2′′), 81.0 (C-3′′), 71.1 (C-4′′), 69.8 (C-5′′), 16.7 (C-6′′), 104.3 (C-1′′′), 74.0 (C-2′′′), 76.5 (C-3′′′), 69.4 (C-4′′′), 76.1 (C-5′′′), 61.0 (C-6′′′)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致[12]，因此確定化合物4為草質(zhì)素-7-O-(3′′-O-β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷。

化合物5：黃色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶7.83 (1H, d,J=8. 0 Hz, H-2′,6′), 7.0 (1H, d,J=8. 0 Hz, H-3′,5′'), 6.42 (1H, s, H-8), 6.24 (1H, s, H-6), 5.42 (1H, s , H-1′′), 4.52 (1H , d,J=7. 5 Hz);13C-NMR (125MHz, CD3OD) δ∶157.1 (C-2), 134.5 (C-3), 178.1 (C-4), 161.9 (C-5), 98.5 (C-6), 164.5 (C-7), 93.33 (C-8), 157.8 (C-9), 104.5 (C-10), 121.1 (C-1′), 130.6 (C-2′, 6′), 115.3 (C-3′, 5′), 160.3 (C-4′), 101.7 (C-1′′), 70.6 (C-2′′), 69.7 (C-3′′), 81.4 (C-4′′), 69.6.4(C-5′′), 16.4 (C-6′′), 104.5 (C-1′′′), 74.1 (C-2′′′), 76.4 (C-3′′′), 70.5 (C-4′′′), 76.3 (C-5′′′), 60.7 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，因此確定化合物5為山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1→4)-α-L-鼠李糖苷。

化合物6：黃色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶8.14 (1H, d,J=8. 4 Hz, H-2′,6′), 6.94 (1H, d,J=8. 4 Hz, H-3′,5′), 6.79 (1H, s, H-8), 6.47 (1H, s, H- 6), 5.59 (1H, s, H-1′′), 1.26 (3H, d,J=5. 0 Hz);13C-NMR (125MHz, CD3OD) δ∶147.4 (C-2), 136.2 (C-3), 176.2 (C-4), 161.9 (C-5), 98.47 (C-6), 160.9 (C-7), 94. 0 (C-8), 156.4 (C-9), 104.8 (C-10), 122.2 (C-1′), 129.5 (C-2′, 6′), 115.0 (C-3′, 5′), 159.4 (C-4′), 98.6 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.7 (C-3′′), 72.3 (C-4′′), 69.8 (C-5′′), 16.6(C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致[14]，因此確定化合物6為山奈酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖糖苷。

化合物7：白色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶6.28 (2H, d,J=8. 5 Hz, H-1), 5.62 (2H, dd,J=8. 5 Hz, H-3′, 5′), 5.65 (1H, d,J=7. 5 Hz, 3-OGlc H-1′′), 4.53 (1H, s, 6′′-ORha H-1′′′), 1.15 (3H, d,J=6. 5 Hz, 6′′-ORha H-6′′′)；13C-NMR (125MHz, CD3OD) δ∶92.4 (C-1), 70.81 (C-2), 72.7 (C-3), 68.4 (C-4), 73.1 (C-5), 61.7 (C-6), 118.3 (C-1′), 109.24 (C-2′), 145.2 (C-3′), 139.4 (C-4′), 164.8 (C-7'), 118.8 (C-1′′), 109.1 (C-2′,6′′), 145.1 (C-3′′,5′′), 139.0 (C-4′′), 165.6 (C-7′′), 118.9 (C-1′′′), 109.0 (C-2′′′,6′′′), 144.9 (C-3′′′,5′′′), 138.8 (C-4′′′), 165.6 (C-1′′′′),109.1 (C-2′′′′,6′′′′), 145.0 (C-3′′′′,5′′′′), 139.0 (C-4′′′), 165.9 (C-7′′′′), 119.7(C-1′′′′′), 109.0 (C-2′′′′′,6′′′′′), 145.1 (C-3′′′′′5′′′′′), 138.6 (C-4′′′′′), 166.6 (C-7′′′′′)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，因此確定化合物7為1,2,3,4,6-五-O-沒食子酰基葡萄糖。

化合物8：黃色粉末，1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ∶8.12 (2H, d,J=8. 5 Hz, H-2′,6′), 6.94 (2H, d,J=8. 5 Hz, H-3′,5′), 6.43 (1H, d,J=1. 5 Hz), 6.21 (1H, d,J=1. 5 Hz, H-6);13C-NMR (125MHz, CD3OD) δ∶146.7 (C-2), 135.8 (C-3), 176.0 (C-4), 156.9 (C-5), 97.9(C-6), 164.2 (C-7), 93.1 (C-8), 161.1 (C-9), 103.1 (C-10), 122.3 (C-1′), 129.3 (C-2′, 6′), 115.0(C-3′, 5′), 159.2 (C-4′)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，因此確定化合物8為山奈酚。

化合物9：黃色粉末，1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ∶8.12 (2H, d,J= 8. 5 Hz, H-2′,6′), 7.05 (1H, d,J=2. 0 Hz, H-2′′), 6.95 (2H, d,J=8. 5 Hz, H-3′,5′), 6.38 (1H, s, H-6), 4.28 (1H, m, H-8′′), 3.67 (1H, m, H-9′′);13C-NMR (125MHz, DMSO-d6) δ∶147.5 (C-2), 136.6 (C-3), 176.6 (C-4), 152.7 (C-5), 98.5 (C-6), 149.2 (C-7), 124.8 (C-8), 144.0 (C-9), 104.6 (C-10), 122.1 (C-1′), 130.1 (C-2′,6′), 116.1 (C-3′,5′), 159.8 (C-4′), 127.2 (C-1′′), 112.3 (C-2′′), 148.1 (C-3′′), 147.7 (C-4′′), 115.8 (C-5′′), 121.1 (C-6′′), 77.5 (C-7′′), 78.1 (C-8′′), 60.5 (C-9′′) 。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，因此確定化合物9為rhodiolin。

化合物10：淡黃色粉末，1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ∶8.16 (2H, d,J=8. 0 Hz, H-2′,6′), 6.95 (2H, d,J=8. 0 Hz, H-3′,5′), 5.49 (1H, s, H-1′′)；13C-NMR (125MHz, DMSO-d6) δ∶147.9 (C-2), 136.3 (C-3), 176.9 (C-4), 150.6 (C-5), 98.8 (C-6), 152.1 (C-7), 127.6 (C-8), 145.0 (C-9), 104.9 (C-10), 122.3 (C-1′), 130.3 (2′,6′), 115.9 (C-3′,5′), 159.8 (C-4′), 99.9 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 69.9 (C-3′′), 72.2 (C-4′′), 70.4 (C-5′′), 18.3 (C-6′′)。以上1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，因此確定化合物10為草質(zhì)素-7-O-α-L-鼠李糖苷。