劉偉

[摘要] 目的 探討反復(fù)上呼吸道感染（rURTIs）患兒血清25-羥維生素D3[25（OH）D3]、白介素-10（IL-10）和白介素-17（IL-17）水平及臨床意義。 方法 選取2016年8月～2017年8月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）兒科收治的rURTIs患兒60例作為感染組，選取同期我院健康體檢兒童60例作為對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平，觀察比較兩組中血清25（OH）D3、IL-10和IL-17的表達(dá)情況、三者相互關(guān)系及對(duì)rURTIs的影響。 結(jié)果 感染組患兒血清25（OH）D3、IL-10水平明顯低于對(duì)照組，IL-17水平明顯高于對(duì)照組，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；0～2歲rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10水平明顯低于>2～6歲患兒，IL-17水平明顯高于>2～6歲患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-10呈顯著正相關(guān)（r = 0.647，P = 0.000），rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)（r = -0.774，P = 0.000），rURTIs患兒血清IL-10與IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)（r = -0.467，P = 0.000）。經(jīng)COX多因素分析顯示，年齡、體重指數(shù)、25（OH）D3、IL-10、IL-17是rURTIs的獨(dú)立影響因素（P < 0.05）。 結(jié)論 rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10水平明顯降低，IL-17水平明顯升高，25（OH）D3缺乏可能是rURTIs患兒血清IL-10下調(diào)和IL-17表達(dá)上調(diào)的重要原因。

[關(guān)鍵詞] 反復(fù)上呼吸道感染；25-羥維生素D3；白介素-10；白介素-17；臨床意義

[中圖分類號(hào)] R725.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）06（c）-0080-04

[Abstract] Objective To investigate the levels and clinical significances of serum 25-hydroxyvitamin D3 [25（OH）D3]， interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17） in children with recurrent upper respiratory infection （rURTIs）. Methods A total of 60 children with rURTIs in Beijing Luhe Hospital， Capital Medical University from August 2016 to August 2017 were selected as the infection group， 60 healthy children during the same period were selected as control group. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect levels of serum 25（OH）D3， IL-10 and IL-17. The expression levels of serum 25（OH）D3， IL-10 and IL-17 in two groups were compared. The relationships among three indices and the clinical significances with rURTIs were observed. Results The levels of serum 25（OH）D3 and IL-10 in rURTIs in infected group were significantly lower than those in control group， while the level of IL-17 was significantly higher than that in the control group， the differences were all statistically significant （P < 0.01）； the levels of serum 25（OH）D3 and IL-10 of rURTIs in infected children of 0-2 years old were significantly lower than those of >2-6 years old ones， the level of IL-17 was significantly higher than that of >2-6 years old ones， and the differences were all statistically significant （P < 0.01）. Pearson correlation analysis showed that the serum 25（OH）D3 was positively correlated with IL-10 in children with rURTIs （r = 0.647， P = 0.000）， and had significant negative correlation between serum 25（OH）D3 and IL-17 in children with rURTIs （r = -0.774， P = 0.000）， and had significant negative correlation between serum IL-10 and IL-17 in children with rURTIs （r = -0.467， P = 0.000）. Multivariate analysis of COX showed that age， BMI， 25（OH）D3， IL-10 and IL-17 were independent influnce factors to rURTIs （P < 0.05）. Conclusion The levels of serum 25（OH）D3 and IL-10 decrease， while the level of IL-17 increase significantly in children with rURTIs. 25（OH）D3 deficiency may be an important reason for the down-regulation of serum IL-10 and the up-regulation of IL-17 in children with rURTIs.

[Key words] Repeated upper respiratory tract infection； 25-hydroxyvitamin D3； Interleukin-10； Interleukin-17； Clinical significance

反復(fù)上呼吸道感染（recurrent upper respiratory tract infections，rURTIs）是臨床上兒科常見(jiàn)呼吸系統(tǒng)疾病，多見(jiàn)于嬰幼兒，臨床主要特征為反復(fù)呼吸道感染、扁桃體炎及咽炎等癥狀[1]。rURTIs病因較為復(fù)雜，且反復(fù)發(fā)作率高，長(zhǎng)期反復(fù)感染會(huì)引起患兒體重下降、營(yíng)養(yǎng)不良、貧血等，甚至引起肺炎、支氣管哮喘，且缺乏特殊的治療方法，嚴(yán)重影響兒童健康及生活質(zhì)量[2]。而25-羥維生素D3[25（OH）D3]是機(jī)體維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況的檢測(cè)指標(biāo)，可直接反映機(jī)體維生素D是否缺乏，而有研究顯示血清25（OH）D3與反復(fù)呼吸道感染（recurrent respiratory tract infections，RRTI）患兒的免疫力有關(guān)[3]。現(xiàn)在普遍認(rèn)為rURTIs的發(fā)病機(jī)制與機(jī)體免疫防御功能異常有直接關(guān)系，而白介素-10（IL-10）和白介素-17（IL-17）分別是由輔助性T細(xì)胞2（Th2）和輔助性T細(xì)胞17（Th17）細(xì)胞分泌，與多種呼吸道感染疾病有關(guān)，在呼吸道感染時(shí)可產(chǎn)生多種相應(yīng)分子，對(duì)呼吸道感染疾病的發(fā)生發(fā)展起重要作用[4-5]。而關(guān)于血清25（OH）D3、IL-10和IL-17在rURTIs中的表達(dá)水平及相關(guān)性研究較少，三者對(duì)rURTIs發(fā)病是否有影響仍不明確。因此，本研究意在探討rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年8月～2017年8月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）兒科收治的rURTIs患兒60例作為感染組，選取同期我院健康體檢兒童60例作為對(duì)照組。感染組男39例，女21例；年齡0～5歲，平均（2.19±0.52）歲，其中0～2歲者41例，>2～6歲者19例。對(duì)照組男36例，女24例；年齡0～5歲，平均（2.35±0.42）歲，其中0～2歲者38例，>2～6歲者22例。兩組受試者性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合rURTIs診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②年齡≤6歲；③受試者及家屬對(duì)本研究有詳細(xì)了解，并簽署知情同意書(shū)；④經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并支氣管哮喘等下呼吸道疾病者；②近期有維生素D服用史者；③近3個(gè)月內(nèi)使用過(guò)免疫抑制劑或免疫增強(qiáng)劑者；④有過(guò)敏反應(yīng)性家族史者；⑤有自身免疫性疾病或免疫缺陷者；⑥患者及家屬依從性差者；⑦拒絕參與本研究相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)者。

1.2 rURTIs診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]

0～2歲兒童，每年發(fā)作rURTIs次數(shù)>7次；>3～5歲兒童，每年發(fā)作rURTIs次數(shù)>6次；兩次發(fā)病間隔>7 d。

1.3 樣本采集

所有受試者均在入院后24 h內(nèi)清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL于含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-k2）抗凝管中，3000 r/min離心5 min，分離上層血清，置于-80℃冷凍保存?zhèn)溆?，待測(cè)血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平。

1.4 檢測(cè)方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測(cè)血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平，25（OH）D3試劑盒購(gòu)自英國(guó)IDS公司，IL-10和IL-17檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京四正柏生物科技有限公司。血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平檢測(cè)：①加樣：加血清樣本與標(biāo)準(zhǔn)液混勻；②孵育：37℃溫箱孵育2 h（IL-10、IL-17孵育40 min）；③水洗：反復(fù)3次洗滌液沖洗，紙上拍干；④加一抗（除空白孔）：加一抗工作液100 μL，振蕩器混勻；⑤孵育：37℃溫箱孵育1 h（IL-10和IL-17孵育20 min）；⑥水洗：洗滌液沖洗3次，吸水紙上拍干；⑦加酶標(biāo)抗體：每孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素工作液100 μL；⑧孵育：37℃溫箱孵育30 min（IL-10和IL-17孵育10 min）；⑨水洗：洗滌液沖洗3次，吸水紙上拍干；⑩加底物：每孔加底物工作液100 μL混勻，避光，37℃溫箱孵育15 min；{11}終止：加終止液100 μL；{12}測(cè)定OD值：45 nm波長(zhǎng)測(cè)定。操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析；采用COX回歸分析進(jìn)行多因素分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平比較

rURTIs感染組患兒血清25（OH）D3和IL-10水平明顯低于對(duì)照組，IL-17水平顯著高于對(duì)照組，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 不同年齡段rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平比較

0～2歲rURTIs患兒血清25（OH）D3和IL-10水平明顯低于>2～6歲患兒，IL-17水平明顯高于>2～6歲患兒，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平相關(guān)性分析

通過(guò)Pearson相關(guān)性分析顯示，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-10呈顯著正相關(guān)（r = 0.647，P = 0.000）。見(jiàn)圖1；rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)（r = -0.774，P = 0.000）。見(jiàn)圖2；rURTIs患兒血清IL-10與IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)（r = -0.467，P = 0.000）。見(jiàn)圖3。

2.4 影響rURTIs患兒多因素分析

經(jīng)COX多因素分析顯示，年齡、體重指數(shù)（BMI）、25（OH）D3、IL-10、IL-17是rURTIs的獨(dú)立影響因素（P < 0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

rURTIs是指單位時(shí)間內(nèi)上呼吸道感染反復(fù)發(fā)作，超過(guò)規(guī)定次數(shù)的一種臨床綜合征，多種病原微生物如流感病毒、副流感病毒、腺病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒等都可引發(fā)該病，且在病毒感染后還可繼發(fā)細(xì)菌感染，使病情遷延[7]。rURTIs發(fā)病與環(huán)境、微量元素、維生素缺乏和濫用抗生素等外部因素及營(yíng)養(yǎng)不良、自身免疫力等內(nèi)在因素有密切關(guān)系[8]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，采用維生素D治療RRTI具有較好療效，維生素D缺乏的兒童易發(fā)生RRTI，且自身免疫防御功能低的兒童發(fā)病率高[9]。

維生素D是人體必需的脂溶性維生素之一，可從食物中攝取，但大部分來(lái)自于皮膚經(jīng)中波紫外線照射后在肝臟、腎臟中合成。25（OH）D3在人體內(nèi)濃度較高，且含量穩(wěn)定，半衰期長(zhǎng)，能夠較準(zhǔn)確反映體內(nèi)維生素D水平，一般可作為檢測(cè)患者體內(nèi)維生素D水平指標(biāo)。維生素D還具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠提高RRTI患兒免疫水平[10]，而IL-10和IL-17是重要的免疫細(xì)胞因子，有研究顯示IL-10和IL-17表達(dá)水平與RRTI發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)系[11]。IL-10是一種具有廣泛免疫效應(yīng)的抗炎細(xì)胞因子，可由T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、B細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞等分泌，但主要由Th2產(chǎn)生，具有抗炎作用[12]。IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌，在呼吸道感染時(shí)IL-17能夠促進(jìn)機(jī)體分泌增加促進(jìn)上皮細(xì)胞防御素釋放，直接摧毀病原體，同時(shí)還能夠起到趨化因子作用，增強(qiáng)中性粒細(xì)胞趨化并促使炎性介質(zhì)釋放，發(fā)揮抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，rURTIs感染組患兒血清25（OH）D3和IL-10水平明顯低于對(duì)照組，IL-17水平顯著高于對(duì)照組，這與李春等[14]研究結(jié)果基本相一致。說(shuō)明rURTIs感染患兒存在維生素D缺乏及免疫水平低現(xiàn)象。這可能Th1/Th2在正常情況下是維持平衡狀態(tài)，而維生素D及其受體對(duì)其具有雙相調(diào)節(jié)作用，當(dāng)機(jī)體維生素D缺乏時(shí)，使Th1/Th2平衡遭到破壞，降低Th2分泌，引起IL-10分泌減少；維生素D還能影響Th17發(fā)育成熟，減少IL-17分泌，當(dāng)維生素D缺乏時(shí)，可促進(jìn)IL-17分泌[15-16]。本研究結(jié)果還顯示，0～2歲rURTIs患兒血清25（OH）D3和IL-10水平顯著低于>2～6歲患兒，IL-17水平明顯高于 >2～6歲患兒，提示患兒年齡越小維生素D缺乏越嚴(yán)重，25（OH）D3、IL-10和IL-17可能參與rURTIs發(fā)病過(guò)程。通過(guò)Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-10呈顯著正相關(guān)，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)，rURTIs患兒血清IL-10與IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)，提示rURTIs患兒補(bǔ)充維生素D能促進(jìn)IL-10分泌，提高患兒免疫力。王莉莉等[17]和陸春云等[18]研究顯示哮喘患兒血清25（OH）D3與IL-10呈正相關(guān)，25（OH）D3能夠通過(guò)促進(jìn)IL-10分泌和產(chǎn)生，降低哮喘患兒氣管炎性反應(yīng)，抑制哮喘發(fā)生。車向郁等[19]研究表明支氣管哮喘兒童血清25（OH）D3與IL-17呈負(fù)相關(guān)。侯善群等[20]研究顯示哮喘大鼠IL-10與IL-17呈負(fù)相關(guān)。經(jīng)COX多因素分析顯示，年齡、BMI、25（OH）D3、IL-10、IL-17是影響rURTIs的獨(dú)立因素，提示嬰幼兒提高維生素D補(bǔ)充量，可能對(duì)rURTIs的發(fā)病具有一定的預(yù)防作用。

綜上所述，25（OH）D3、IL-10和IL-17可能參與了rURTIs病理過(guò)程，25（OH）D3缺乏可能是rURTIs患兒血清IL-10下調(diào)和IL-17表達(dá)上調(diào)的重要原因，可以通過(guò)嬰幼兒補(bǔ)充維生素D的方法預(yù)防rURTIs發(fā)生。

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