彭國(guó)霞，趙浩安，劉清清，張 穎，程 妮,2，曹 煒,2,*

酗酒是引發(fā)肝臟疾病的因素之一。近年來，由于飲酒頻率的增加及飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國(guó)酒精肝的發(fā)病率已經(jīng)明顯升高，成為除病毒性肝炎以外又一嚴(yán)重威脅人類健康的肝病[1]，引起了社會(huì)的高度重視。因此，尋找防治肝病的無副作用的天然藥物顯得尤為迫切。研究表明，許多天然食物具有保肝活性，蜂花粉就是其中的一類，如已經(jīng)被報(bào)道的油菜花粉和馬尾松花粉等[2-5]。

蜂花粉是蜜蜂從植物花藥上采集花粉并添加了少量唾液后加工而形成的餅狀物[6]，素有“天然營(yíng)養(yǎng)庫”之稱。已有研究表明蜂花粉中含有250多種物質(zhì)，包括脂質(zhì)（甘油三酯）、脂肪酸、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、酚類以及類黃酮等物質(zhì)[6-8]，具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎以及增強(qiáng)免疫力等功效[9]。因此，蜂花粉作為傳統(tǒng)藥物和保健食品已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用[10]。茶花粉是蜂花粉的一種，主產(chǎn)于中國(guó)，因其具有味甜可口、氣味清香等特點(diǎn)，深受消費(fèi)者的青睞。Kao等[11]的研究發(fā)現(xiàn)，茶花粉具有較強(qiáng)的抗氧化活性，并含有多種酚類及黃酮類化合物，如沒食子酸、阿魏酸、咖啡酸、兒茶素和蘆丁等。Yildiz等[12]證明天然食物中的多酚和黃酮類物質(zhì)與其保肝的活性有關(guān)，但是到目前為止，關(guān)于茶花粉保肝功效的研究鮮見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了5 個(gè)不同產(chǎn)地茶花粉中總酚和總黃酮的含量，采用體外法研究了茶花粉的抗氧化活性，在此基礎(chǔ)上，以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究了茶花粉對(duì)酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用，旨在為蜂花粉保肝功能性食品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

不同產(chǎn)地（湖南、安徽、浙江、四川、江西）茶花粉由當(dāng)?shù)胤滢r(nóng)提供；蘆丁、福林-酚試劑、沒食子酸、水溶性VE（Trolox）、2,4,6-三（2-吡啶基）三嗪（2,4,6-tri-2-pyridyl-s-triazin，TPTZ）、1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2,2’-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽（2,2’-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride granular，AAPH）美國(guó)Sigma-Aldrich公司；谷草轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase，AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，ALT）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、考馬斯亮藍(lán)試劑盒 南京建成生物工程研究所；所有其他試劑均為分析純。

昆明小鼠（SPF級(jí)，雄性，4 周齡，（20±2）g）購(gòu)于西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的管理規(guī)定（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK 2012-003）。飼養(yǎng)條件：室溫（25±2）℃，相對(duì)濕度（50±10）%。

1.2 儀器與設(shè)備

L5S紫外-可見分光光度計(jì) 上海儀電分析儀器有限公司；Infinite 200 PRO多功能讀板機(jī) 帝肯（上海）貿(mào)易有限公司；TGL16G離心機(jī) 上海化工機(jī)械廠有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品液的制備

稱取1.16 g粉碎后的茶花粉于圓底燒瓶中，加入20.0 mL乙醇，熱回流提取2 h，靜置一段時(shí)間后，取上清液用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 茶花粉中總酚含量的測(cè)定

參照Hinneburg等[13]的方法并略作修改。取400 μL的茶花粉提取液于10 mL棕色具塞試管內(nèi)，加入5.0 mL Na2CO3溶液（1 mol/L）和1.0 mL福林-酚顯色劑，加蒸餾水至刻度線，搖勻，暗室反應(yīng)1 h后在760 nm波長(zhǎng)處讀取吸光度。以沒食子酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y＝0.019+0.120x（R2＝0.995 7），沒食子酸在質(zhì)量濃度為0～5.0 μg/mL范圍之間呈良好的線性，以該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算茶花粉中的總酚含量，結(jié)果以每克茶花粉相當(dāng)于沒食子酸的質(zhì)量計(jì)（mg/g）。

1.3.3 茶花粉中總黃酮含量的測(cè)定

參照孫麗萍等[14]報(bào)道的方法。取1.0 mL茶花粉提取液于盛有聚酰胺粉的蒸發(fā)皿中，通過水浴加熱（50 ℃）除去乙醇，將該聚酰胺粉轉(zhuǎn)至層析柱。先用20.0 mL苯液進(jìn)行洗脫除去雜質(zhì)，再用20.0 mL甲醇洗脫，收集洗脫液并定容至25.0 mL，在360 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。以蘆丁作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y＝－0.000 9+0.033 4x（R2＝0.997 2），蘆丁在0～25.0 μg/mL之間呈良好的線性，以該回歸方程計(jì)算茶花粉中的總黃酮含量，結(jié)果以每克花粉相當(dāng)于蘆丁的質(zhì)量計(jì)（mg/g）。

1.3.4 茶花粉的DPPH自由基清除活性

參照Cheng Ni等[15]的方法進(jìn)行測(cè)定。取5.0 mL DPPH甲醇溶液（0.04 mg/mL）于10 mL棕色具塞試管內(nèi)，分別加入600 μL不同質(zhì)量濃度（0.2～0.6 mg/mL）的茶花粉提取液，加甲醇至刻度線，搖勻。暗室反應(yīng)1 h后在波長(zhǎng)517 nm處讀取吸光度A樣品，以加入600 μL甲醇試劑的溶液作為空白對(duì)照讀取吸光度A空白。DPPH自由基清除率按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算。

1.3.5 茶花粉的FRAP測(cè)定

Fe3+總還原力（ferric reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）的測(cè)定參考Benzie等[16]的方法并稍作改進(jìn)。配制300 mmol/L的醋酸鈉緩沖液、10 mmol/L的TPTZ溶液、20 mmol/L的FeCl3溶液，將上述溶液按照10∶1∶1（V/V）的比例混合為工作液，避光保存。移取200 μL質(zhì)量濃度為10 mg/mL的花粉提取液于10 mL容量瓶?jī)?nèi)，加入2.8 mL的工作液，蒸餾水定容，反應(yīng)10 min后在593 nm波長(zhǎng)處讀取吸光度。以Trolox做標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而評(píng)估茶花粉的FRAP，結(jié)果以每克茶花粉相當(dāng)于Trolox的質(zhì)量計(jì)（mg /g）。

1.3.6 酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷模型。

將65 只體質(zhì)量為18～22 g的昆明小鼠（雄鼠）隨機(jī)分為5 組（表1），正常組、模型組、高劑量組各15 只，低劑量組和陽性對(duì)照組各10 只。連續(xù)灌胃7 周，每日2 次。第50天灌胃酒精造成急性肝損傷，酒精劑量為5.0 g/kg，空腹（禁食不禁水）16 h后稱質(zhì)量，并在眼球取血后處死，同時(shí)收集血液及肝臟組織備用。若模型組小鼠血清中AST和ALT活力顯著高于正常組小鼠，說明建模成功[17]。

表1 小鼠分組情況Table 1 Grouping of mice

1.3.7 茶花粉對(duì)小鼠血清ORAC的影響

茶花粉對(duì)小鼠血清氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）的測(cè)定參照Wang Yuan等[18]的方法進(jìn)行。用75 mmol/L pH 7.0的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）配制78 nmol/L的熒光素二鈉溶液（fluorescein disodium salt，F(xiàn)L）和221 mmol/L的AAPH溶液。在1.3.6節(jié)中的小鼠灌胃第45天后通過眼球取血的方法分別取5 只正常組小鼠和5 只高劑量組小鼠的血清備用，并且在實(shí)驗(yàn)前稀釋150 倍。在黑色96 孔板中，陰性對(duì)照組每孔加入50 μL FL+50 μL PBS；正常組加入50 μL FL+50 μL正常組小鼠血清；高劑量花粉組加入50 μL FL+50 μL高劑量組小鼠血清，37 ℃溫育15 min后，各組均加入25 μL AAPH溶液并搖勻。在激發(fā)波長(zhǎng)為485 nm、發(fā)射波長(zhǎng)為535 nm的條件下測(cè)定熒光強(qiáng)度，每5 min測(cè)定一次，直到熒光強(qiáng)度達(dá)到初始熒光強(qiáng)度的5%，從而得到熒光衰減曲線。通過曲線下面積來評(píng)估茶花粉對(duì)小鼠血清ORAC的影響。

1.3.8 茶花粉對(duì)Cu2+誘導(dǎo)的小鼠血清氧化損傷的影響

參照Hodgson等[19]的測(cè)定方法。制備濃度為2×10－4mol/L的CuSO4溶液，取1.3.7節(jié)中的血清并稀釋200 倍后備用，在96 孔板中，正常組每孔加入250 μL正常組小鼠血清+16 μL CuSO4溶液，高劑量茶花粉組加入250 μL高劑量組小鼠血清+16 μL CuSO4溶液，37 ℃溫育，每10 min讀取一次吸光度，直到吸光度不再發(fā)生變化。根據(jù)曲線下面積S評(píng)估茶花粉對(duì)Cu2+誘導(dǎo)的小鼠血清氧化損傷的影響，結(jié)果以抑制率表示。抑制率按照公式（2）進(jìn)行計(jì)算。

1.3.9 茶花粉對(duì)小鼠血清中AST和ALT活力的影響

將1.3.6節(jié)中采集的血液置于1.5 mL離心管中，4 ℃ 3 500 r/min離心10 min獲得小鼠血清，用AST和ALT試劑盒測(cè)定血清中轉(zhuǎn)氨酶的活力。

1.3.10 茶花粉對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

將1.3.6節(jié)中收集的肝臟組織用預(yù)先冷卻的生理鹽水清洗以除去血液，濾紙吸干并稱質(zhì)量。肝臟指數(shù)按式（3）計(jì)算。

1.3.11 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中MDA含量的影響

取1.3.6節(jié)中收集的肝組織0.5 g于玻璃勻漿管內(nèi)，加入4.5 mL生理鹽水，研磨至組織勻漿化，得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的肝勻漿用于測(cè)定MDA含量。本實(shí)驗(yàn)采用MDA試劑盒測(cè)定，結(jié)果以nmol/mg計(jì)。

1.3.12 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中SOD活力的影響

用生理鹽水將1.3.11節(jié)中的肝勻漿稀釋至質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%，通過SOD試劑盒測(cè)定SOD活力，結(jié)果以U/mg計(jì)，其中每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)到50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)SOD活力單位（U）。

1.3.13 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中GSH-Px活力的影響

用生理鹽水將1.3.11節(jié)中的肝勻漿稀釋至質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.25%，通過GSH-Px試劑盒測(cè)定，結(jié)果以U/mg計(jì)，規(guī)定每毫克蛋白每分鐘扣除非酶反應(yīng)的作用，使反應(yīng)體系中還原型谷胱甘肽濃度降低1 μmol/L為1 個(gè)酶活力單位（U）。

1.3.14 肝臟組織病理學(xué)染色觀察

取肝臟的左小葉保存在體積分?jǐn)?shù)10%的甲醛溶液中24 h，經(jīng)過酒精脫水和石蠟包埋后用病理切片機(jī)進(jìn)行切片，厚度為5 μm。將該切片再次經(jīng)過脫水、脫蠟后用蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

本研究采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析方法，兩兩比較采用Tukey’s檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)均以 ±s表示，P＜0.05時(shí)認(rèn)為存在顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地茶花粉總酚和總黃酮的含量

圖1 不同產(chǎn)地茶花粉總酚和總黃酮的含量Fig. 1 Total polyphenolic and total flavonoid contents of C. japonica bee pollen from five geographical origins in China

本研究測(cè)定了不同產(chǎn)地茶花粉的總酚和總黃酮含量。由圖1可知，不同產(chǎn)地茶花粉的總酚含量沒有顯著性差異（P＞0.05），但產(chǎn)自浙江的茶花粉的總黃酮含量最高并且顯著高于湖南、安徽和四川3 個(gè)省份（P＜0.05），總黃酮含量依次為：浙江＞江西＞湖南＞安徽＞四川。結(jié)果表明產(chǎn)地不同，茶花粉的總黃酮含量也不同。由于多酚和黃酮類化合物的含量與天然食物的抗氧化活性相關(guān)[20]，因此，本實(shí)驗(yàn)以浙江茶花粉為原料，進(jìn)一步研究茶花粉的體外抗氧化活性。

2.2 茶花粉的DPPH自由基清除能力

圖2 茶花粉的DPPH自由基清除自由基能力Fig. 2 DPPH radical scavenging capacity of C. japonica bee pollen

DPPH自由基清除能力是評(píng)價(jià)天然產(chǎn)物抗氧化活性的常用指標(biāo)，DPPH溶于甲醇后呈紫色，當(dāng)樣品中存在抗氧化劑時(shí)可與其反應(yīng)生成聯(lián)苯-苦味肼，紫色褪去，因此可以根據(jù)紫色褪去的程度來評(píng)價(jià)抗氧化劑對(duì)自由基的清除能力[21]。由圖2可知，茶花粉的DPPH自由基清除率與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，其回歸方程為y＝94.936x+2.646（R2＝0.992 2），并且通過計(jì)算得出其半抑制濃度為0.50 mg/mL。結(jié)果表明茶花粉具有較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力。

2.3 茶花粉的FRAP

FRAP是一種評(píng)價(jià)抗氧化劑還原力的常用方法。當(dāng)樣品中存在還原劑時(shí)，鐵離子轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的亞鐵形式，可以通過對(duì)該亞鐵離子絡(luò)合物進(jìn)行定量分析計(jì)算茶花粉的還原力。在本研究中，當(dāng)Trolox的質(zhì)量濃度在0.6～3.0 μg/mL時(shí)，對(duì)應(yīng)的回歸方程為y＝0.135 2x+0.080 1（R2＝0.995 0），把實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶入該方程得出，1 g茶花粉的FRAP相當(dāng)于（5.37±0.53）mg Trolox。

2.4 茶花粉對(duì)小鼠血清ORAC的影響

圖3 茶花粉對(duì)小鼠血清ORAC的影響Fig. 3 Effect of C. japonica bee pollen on serum ORAC

在含氧的溶液中，F(xiàn)L會(huì)與AAPH產(chǎn)生的過氧自由基（ROO?）發(fā)生反應(yīng)，使FL發(fā)生熒光猝滅。當(dāng)溶液中存在抗氧化劑時(shí)，AAPH產(chǎn)生的ROO?與抗氧化劑提供的氫原子結(jié)合而被清除，從而抑制了熒光的猝滅，熒光衰減速率越慢表明樣品的抗氧化能力越強(qiáng)[22]。從圖3可以看出，與陰性對(duì)照組相比，正常組和高劑量花粉組均能抑制熒光的衰減速率，說明小鼠血清本身具有一定的抗氧化能力。灌胃高劑量的茶花粉后小鼠血清的抑制熒光衰減速率效果明顯高于正常組，表明長(zhǎng)期給小鼠灌胃茶花粉能夠增強(qiáng)小鼠血清的抗氧化能力。

2.5 茶花粉對(duì)Cu2+誘導(dǎo)的小鼠血清氧化損傷的影響

圖4 茶花粉對(duì)Cu2＋誘導(dǎo)的小鼠血清氧化損傷的影響Fig. 4 Effect of C. japonica bee pollen on Cu2+-induced oxidative damage in serum

在中性環(huán)境下，過渡金屬Cu2+對(duì)血清脂蛋白有氧化修飾作用，加入抗氧化劑后可以抑制血清脂蛋白的氧化修飾作用。本研究通過在234 nm波長(zhǎng)處監(jiān)測(cè)4 h內(nèi)氧化產(chǎn)物的生成量來評(píng)估茶花粉的抗氧化能力，結(jié)果如圖4所示。相比于正常組，高劑量組的曲線下面積明顯減小。表明長(zhǎng)期灌胃茶花粉能夠顯著抑制Cu2+對(duì)小鼠血清脂蛋白的氧化修飾作用，抑制率為36.58%。

2.6 茶花粉對(duì)小鼠血清中AST和ALT活力的影響

AST和ALT活力是評(píng)價(jià)肝損傷的敏感生化指標(biāo)。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生損傷時(shí)，肝臟中的AST和ALT滲入到血液中，使其含量超出正常范圍[23]。如圖5所示，與正常組小鼠相比，模型組小鼠血清中AST和ALT的活力急劇上升，分別達(dá)到54.65、51.54 U/L，是正常組的2.30 倍和2.94 倍。在給小鼠灌胃茶花粉后，與模型組相比，高劑量組和低劑量組小鼠血清中AST及ALT的活力均顯著降低（P＜0.05），并且高劑量組AST及ALT活力分別降低了47.47%和45.83%。結(jié)果表明茶花粉有明顯的保肝功效。

圖5 茶花粉對(duì)小鼠血清AST（A）、ALT（B）活力的影響Fig. 5 Effect of C. japonica bee pollen on the activity of AST (A) and ALT (B) in serum

2.7 茶花粉對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

圖6 茶花粉對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響Fig. 6 Effect of C. japonica bee pollen on liver index

大量攝入酒精會(huì)引起肝損傷，導(dǎo)致肝臟腫大，從而使得肝臟的質(zhì)量增加。如圖6所示，相比于正常組小鼠，模型組小鼠的肝指數(shù)顯著增大（P＜0.05）。在給小鼠連續(xù)灌胃7 周水飛薊素和茶花粉以后，相比于模型組小鼠，水飛薊素組和茶花粉組的肝臟指數(shù)均顯著降低（P＜0.05），表明水飛薊素和茶花粉均能緩解酒精對(duì)小鼠肝臟造成的損傷。

2.8 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中MDA含量的影響

圖7 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中MDA含量的影響Fig. 7 Effect of C. japonica bee pollen on MDA content in liver

MDA作為脂質(zhì)過氧化作用的產(chǎn)物，是評(píng)價(jià)肝損傷的重要生化指標(biāo)，因此本研究通過測(cè)定小鼠肝臟組織中MDA的含量來評(píng)估酒精造成的肝損傷程度。如圖7所示，相比于正常組，模型組小鼠肝臟組織中的MDA的含量顯著升高（P＜0.05），給小鼠灌胃水飛薊素和高劑量茶花粉均能夠顯著抑制MDA的形成（P＜0.05），且高劑量組的抑制率為26.93%。表明長(zhǎng)期給小鼠灌胃茶花粉能夠增強(qiáng)小鼠體內(nèi)的抗氧化防御系統(tǒng)，從而預(yù)防酒精對(duì)肝臟造成的氧化損傷。

2.9 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中SOD和GSH-Px活力的影響

圖8 茶花粉對(duì)小鼠肝臟中GSH-Px（A）和SOD（B）活力的影響Fig. 8 Effect of C. japonica bee pollen on the activity of GSH-Px (A) and SOD (B) in liver

SOD是機(jī)體內(nèi)的一種酶促抗氧化劑，它能夠與GSH-Px共同作用清除機(jī)體內(nèi)的超氧自由基，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷[18]。本研究通過測(cè)定小鼠肝臟中的SOD和GSH-Px活力研究茶花粉的保肝作用，結(jié)果如圖8所示。模型組小鼠肝臟組織中的SOD和GSH-Px的活力均顯著低于正常組小鼠（P＜0.05），表明過量攝入酒精會(huì)降低肝細(xì)胞中SOD和GSH-Px的活力，這與Wang Mingchun等[24]的研究結(jié)果一致。在給小鼠連續(xù)灌胃7 周高劑量的茶花粉和水飛薊素后，與模型組相比，陽性對(duì)照組和高劑量組小鼠肝臟組織中的SOD和GSH-Px活力均顯著提高（P＜0.05）。在低劑量組中，小鼠肝臟組織中SOD的活力亦顯著提高（P＜0.05）。結(jié)果表明，茶花粉能夠增強(qiáng)小鼠肝臟組織中SOD和GSH-Px的活力。

2.10 肝臟組織病理學(xué)染色觀察

圖9 小鼠肝臟切片組織病理學(xué)染色觀察（×200）Fig. 9 Effect of C. japonica bee pollen on hepatic morphological analysis (× 200)

如圖9a所示，正常組觀察到規(guī)則性的肝細(xì)胞形態(tài)。在模型組中，可以觀察到肝細(xì)胞有明顯的炎癥浸潤(rùn)和氣球樣變性，并且出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死（圖9b），表明酒精對(duì)肝細(xì)胞造成明顯的損傷。與模型組相比，高劑量組中肝組織的炎癥因子明顯減少，肝損傷明顯減輕，但仍見輕微的氣球樣變（圖9c）。相比于模型組，在低劑量組中可以觀察到肝組織的氣球樣變性明顯減輕，但是仍然有大量炎癥浸潤(rùn)（圖9d）。在陽性對(duì)照組中，可以觀察到肝細(xì)胞排列整齊，僅有少量炎癥因子出現(xiàn)，無明顯肝損傷（圖9e）。

3 討 論

蜂花粉因其含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥用價(jià)值而聞名。近年來，對(duì)蜂花粉的功能性研究越來越多，其因具有降血脂、降血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化、治療前列腺等功能而受到廣泛關(guān)注。茶花粉作為蜂花粉的一種，在我國(guó)產(chǎn)量大，具有潛在的開發(fā)價(jià)值，但是到目前為止，關(guān)于茶花粉的功能性研究較少。在本研究中，通過一次性給小鼠灌胃酒精（5.0 g/kg）來建立急性酒精肝損傷模型，探究茶花粉的保肝功能，為茶花粉成為一種新型的保健食品提供理論依據(jù)。

多酚和黃酮類化合物是廣泛存在于植物中的一類抗氧化劑[25]，對(duì)天然食物的抗氧化活性起著重要的作用。本研究選取了浙江、安徽、江西、四川、湖南5 個(gè)地方的茶花粉測(cè)定其總酚和總黃酮含量，結(jié)果分別為8.41～8.97、2.23～3.01 mg/g，這與任乃艷[26]報(bào)道的茶花粉的總酚和總黃酮含量的結(jié)果（8.49、2.33 mg/g）幾乎一致。DPPH自由基清除能力和FRAP體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，茶花粉具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，對(duì)人體健康有著非常重要的作用[27]。此外，本研究發(fā)現(xiàn)茶花粉能夠提高小鼠的體內(nèi)抗氧化能力，ORAC實(shí)驗(yàn)中，高劑量組小鼠血清對(duì)熒光猝滅的抑制效果高于正常組證明了這一點(diǎn)。同樣，在Cu2+誘導(dǎo)的小鼠血清氧化損傷實(shí)驗(yàn)中，相比于正常組，高劑量組能夠明顯降低血清中脂蛋白氧化產(chǎn)物的形成，進(jìn)一步表明茶花粉能夠增強(qiáng)小鼠血清的抗氧化能力。

酒精在肝臟中的分解代謝會(huì)促進(jìn)活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生，并且ROS在體內(nèi)過度累積會(huì)引發(fā)肝細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化而損傷肝細(xì)胞[28-29]。AST和ALT是存在于肝細(xì)胞中的轉(zhuǎn)氨酶，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生損傷時(shí)，AST與ALT會(huì)被釋放到血液中[23]。在本研究中，相比于正常組，模型組小鼠血清中的AST和ALT活力顯著升高（P＜0.05），但是在灌胃不同劑量（2.0、6.0 g/kg）的茶花粉后其活力均顯著降低（P＜0.05）。這可能與茶花粉中含有的蘆丁等黃酮類物質(zhì)具有降低肝損傷小鼠血清中AST和ALT活力的功能有關(guān)[30]。

SOD是機(jī)體內(nèi)一種重要的清除ROS的酶，它能夠促使體內(nèi)的超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化成過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶和GSH-Px的作用下進(jìn)一步分解成水。此外，MDA作為脂質(zhì)過氧化和DNA氧化損傷的產(chǎn)物，也可以間接反映出肝細(xì)胞損傷的程度。本研究發(fā)現(xiàn)模型組中小鼠血清中SOD和GSH-Px的活力顯著降低，MDA含量顯著升高，表明給小鼠灌胃酒精會(huì)顯著損傷機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)，導(dǎo)致ROS的積累從而引發(fā)脂質(zhì)過氧化。給小鼠灌胃茶花粉后，小鼠體內(nèi)SOD和GSH-Px的活力顯著增強(qiáng)，MDA含量顯著降低，表明茶花粉能夠提高小鼠體內(nèi)抵御ROS攻擊生物膜和生物大分子的氧化損傷的能力，這可能與茶花粉中的沒食子酸和咖啡酸可以緩解氧化應(yīng)激引起的炎癥、增強(qiáng)小鼠體內(nèi)SOD和GSH-Px的活力有關(guān)[31-32]。此外，組織病理學(xué)染色觀察表明，茶花粉能夠減輕酒精引起的肝細(xì)胞炎癥浸潤(rùn)及肝細(xì)胞死亡。

綜上所述，茶花粉中總酚和總黃酮含量豐富，具有較強(qiáng)的抗氧化活性。此外，小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，茶花粉能夠降低小鼠血清中AST和ALT的活力，增強(qiáng)小鼠體內(nèi)SOD和GSH-Px的活力，并降低脂質(zhì)過氧化物MDA的含量。研究結(jié)果表明茶花粉對(duì)酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷具有保護(hù)作用，因此，茶花粉既能成為一種新型的抗氧化食品，又可以作為一種制造保肝功能性食品的原料。但是本研究對(duì)茶花粉的活性成分和保肝的具體分子機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步深入研究。