魏 璐，田建華，王巨成，史 鵬，賀義才，郭學(xué)斌

(山西省林業(yè)科學(xué)研究院,山西 太原 030012)

沙棘(HippophaerhamnoidesLinn.)為胡頹子科沙棘屬落葉灌木，在中國主要分布于西北、華北、東北及西南等地區(qū)。山西省是中國沙棘資源大省，沙棘林總面積達(dá)23.33×104hm2以上，主要分布在岢嵐、五寨、右玉等地。沙棘根、莖、葉、果實(shí)及種子內(nèi)均含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性成分，尤其是沙棘葉，產(chǎn)量大且富含黃酮類化合物?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，沙棘黃酮具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、緩解心絞痛、抗衰老等作用，在保健品、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)報(bào)道，沙棘黃酮受沙棘種群、生境、部位、雌雄及生長(zhǎng)發(fā)育等因素影響，各地沙棘葉的黃酮含量有較大差異。筆者采用《中國藥典》方法測(cè)定沙棘葉總黃酮含量，并對(duì)影響沙棘葉總黃酮含量的因素進(jìn)行比對(duì)分析，以期為評(píng)價(jià)和利用沙棘葉提供一定的參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

試材：沙棘葉，分別采自山西省右玉縣、岢嵐縣、關(guān)帝山。

試劑：蘆丁對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院)；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇等均為市售國產(chǎn)分析純。

儀器：UV-3100PC紫外-可見分光光度計(jì)(上海美譜達(dá))、HH數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇金城國勝)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 材料預(yù)處理

將沙棘葉樣品于50 ℃恒溫干燥箱中干燥3 h，取出，自然冷卻后粉碎，過40目篩，備用。

2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照《中國藥典》(2015年版，一部)配置蘆丁對(duì)照品溶液，濃度為0.2 mg/mL.

精確量取蘆丁對(duì)照品溶液0 mL，2 mL，4 mL，6 mL，8mL，10 mL，分別置于25 mL容量瓶中，各加30%乙醇至10 mL.然后依次加入5%亞硝酸鈉溶液和10%硝酸鋁溶液各1 mL，并依次搖勻，放置6 min.再加氫氧化鈉溶液10 mL，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，放置反應(yīng)15 min.照紫外-可見分光光度計(jì)，在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱定沙棘葉樣品粗粉約2 g，加30 mL 60%乙醇，于70℃下冷凝回流2 h，放冷，濾過。殘?jiān)?5 mL 60%乙醇加熱回流2次，每次1 h，濾過。合并濾液置于100 mL容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻。再從中精密量取25 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

2.4 總黃酮含量的測(cè)定

量取上述各供試品溶液3 mL，置于25 mL量瓶中，加3 mL 30%乙醇，按照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“加亞硝酸鈉溶液1 mL”起測(cè)定吸光度。同時(shí)取供試品溶液3 mL，除不加氫氧化鈉試液外，其余同上操作，作為空白對(duì)照，測(cè)定吸光度。

2.5 結(jié)果計(jì)算

沙棘葉總黃酮以蘆丁計(jì)，按下式計(jì)算。

式中：X——總黃酮的含量，%；

c——由直線回歸方程求出的樣品中蘆丁濃度，mg/mL;

v——溶液的體積，mL；

W——樣品的質(zhì)量,g;

d——稀釋比例。

3 結(jié)果與討論

3.1 蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制過程中選擇6個(gè)測(cè)量樣點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A500=10.017 0CRT-0.002 9.其中，橫坐標(biāo)(CRT)代表蘆丁濃度，縱坐標(biāo)(A)代表吸光度，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9.表明試驗(yàn)數(shù)據(jù)與擬合函數(shù)之間的吻合程度較高，可作為沙棘葉總黃酮含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.2 不同產(chǎn)地沙棘葉總黃酮含量對(duì)比

6月至8月，不同產(chǎn)地沙棘葉的總黃酮含量見圖2至圖4.

圖2 6月份不同產(chǎn)地沙棘葉黃銅含量

圖3 7月份不同產(chǎn)地沙棘葉黃銅含量

圖4 8月份不同產(chǎn)地沙棘葉黃銅含量

由圖2，3，4可以看出，6月至8月沙棘葉總黃酮含量均為岢嵐略高于右玉和關(guān)帝山，后兩者沙棘葉總黃酮含量相差不大。經(jīng)計(jì)算，關(guān)帝山、右玉、岢嵐3地沙棘葉平均總黃酮含量分別為4.56%，4.80%，4.88%.右玉和岢嵐同屬晉西北地區(qū)，而關(guān)帝山處于呂梁山中段，氣候、降水、地理環(huán)境等有著較為明顯的差異。這些差異是否是影響沙棘葉總黃酮含量的因子，還需進(jìn)一步深入研究。

3.3 不同采摘期沙棘葉總黃酮含量的變化

筆者測(cè)定了右玉縣4個(gè)優(yōu)選單株沙棘(編號(hào)分別為優(yōu)1，優(yōu)2，優(yōu)3，優(yōu)4)葉總黃酮含量隨月份的變化情況，見圖5.

圖5 不同月份沙棘葉總黃酮含量變化情況

從圖5可以看出，除優(yōu)4外，其余優(yōu)選單株沙棘葉總黃酮含量變化趨勢(shì)一致，均呈現(xiàn)雙峰曲線。5月份沙棘葉中總黃酮含量迅速上升，6月份達(dá)到第1次高峰；至7月份出現(xiàn)低值，8月份總黃酮含量達(dá)到第2次峰值；后迅速下降，9月份降至最低。4個(gè)優(yōu)選單株沙棘葉總黃酮含量最高時(shí)期均為6月份。不同采摘時(shí)間的沙棘葉中總黃酮含量不同，原因可能是不同月份沙棘生長(zhǎng)環(huán)境發(fā)生變化，使得沙棘葉中總黃酮含量處于一個(gè)動(dòng)態(tài)的變化過程中。此外，在5月至7月份，優(yōu)4單株沙棘葉總黃酮含量高于其它優(yōu)選單株，但并未表現(xiàn)出雙峰趨勢(shì)，在6月份含量達(dá)到頂點(diǎn)后開始逐漸下降，8月總黃酮含量開始陡降，9月份降至最低，體現(xiàn)了明顯的株型差異。

3.4 雌雄沙棘葉總黃酮含量對(duì)比

6月、7月、8月，關(guān)帝山、右玉、岢嵐3地雌雄沙棘葉總黃酮含量對(duì)比見圖6至圖8.

由圖6，7，8可以看出，在6月、7月時(shí)，3地所采摘沙棘葉的總黃酮含量均為雌株低于雄株。而8月份3地雌雄沙棘葉黃酮含量出現(xiàn)分化，關(guān)帝山雄株沙棘葉總黃酮含量仍高于雌株，而右玉和岢嵐相反。沙棘雌雄是影響沙棘葉總黃酮含量的因素之一，原因可能是總黃酮在沙棘生長(zhǎng)過程中具有組織發(fā)育特異性，雌株沙棘葉或許為沙棘花果的生長(zhǎng)輸送了更多的養(yǎng)分。

圖6 6月份雌雄沙棘葉總黃酮含量

圖7 7月份雌雄沙棘葉總黃酮含量

圖8 8月份雌雄沙棘葉總黃酮含量

4 結(jié)論

筆者就山西沙棘主產(chǎn)區(qū)岢嵐縣、右玉縣、關(guān)帝山的沙棘葉總黃酮含量做了對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)岢嵐縣沙棘葉總黃酮含量最高，右玉次之，關(guān)帝山最低。同時(shí)對(duì)不同采摘期的沙棘葉總黃酮含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)總黃酮含量在6月、8月含量較高，7月次之，5月份和9月份含量較低。因此，建議于6月至8月對(duì)沙棘葉進(jìn)行采摘和利用。此外，通過比較雌雄株沙棘葉總黃酮的含量，發(fā)現(xiàn)雌株的沙棘葉總黃酮含量普遍低于雄株?？紤]到沙棘葉來源廣泛，價(jià)格低廉，葉產(chǎn)量約是果產(chǎn)量的1.3倍～2.0倍，且葉片是沙棘總黃酮含量最高的部位。因此，加大對(duì)沙棘葉總黃酮的研究可為沙棘葉的深度利用提供科學(xué)依據(jù)，為加快推進(jìn)山西省沙棘產(chǎn)業(yè)精準(zhǔn)扶貧創(chuàng)造有利條件。