（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部枸杞產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心，寧夏銀川750002）

藜麥為藜科藜屬的一年生草本植物[1]。研究表明，藜麥中蛋白質(zhì)含量豐富且各種氨基酸均衡，含有豐富的膳食纖維、礦物質(zhì)、不飽和脂肪酸、微量元素、維生素及多種植物化學(xué)物質(zhì)[2]，美國航空航天局將藜麥列為宇航員長期從事太空任務(wù)的理想食物之一[3]，被聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（Food and Agriculture Organization of the United Nations，F(xiàn)AO）確認(rèn)為惟一一種滿足人體基本營養(yǎng)需求的單體植物，并正式推薦為最適宜人類的完美“全營養(yǎng)食物”[4]。藜麥含多種維生素、不飽和脂肪酸、類黃酮、維生素E、維生素B、亞麻酸、亞油酸、DHA等物質(zhì)，對增強(qiáng)體內(nèi)細(xì)胞的抗氧化性、提高智力和記憶力具有一定的功效[5]。藜麥?zhǔn)呛芎玫木S生素來源[6]，每100 g藜麥含有葉酸和維生素B6的量能滿足兒童和成人每日所需，維生素E和維生素B2的含量可以滿足兒童每日所需量的80%及成人每日所需量的40%[7]。

B族維生素中的維生素B1和維生素B2是人體許多輔酶的組成部分，并有增進(jìn)食欲、促進(jìn)生長的功效[8]。若缺乏某種維生素時(shí)，則會(huì)引起物質(zhì)代謝障礙，出現(xiàn)相應(yīng)的維生素B1和維生素B2等缺乏癥，導(dǎo)致功能代謝的紊亂及相應(yīng)的疾病，影響人類的身體健康[9]。

目前，測定維生素B1和維生素B2的方法有熒光分光光度法[10]、高效液相色譜法[11]、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法[12]、多元線性分光光度法[13]、紫外分光光度法[14]等，其中熒光光譜法較繁瑣、費(fèi)時(shí)，檢測飼料樣品時(shí)抗干擾能力弱，有的需用到有毒試劑，對人體健康影響較大[15]。高效液相色譜法簡單快捷，因此筆者采用高效液相色譜法分析了寧夏10種不同藜麥品種中維生素B1和維生素B2的含量，以期為藜麥營養(yǎng)價(jià)值的評價(jià)及質(zhì)量控制提供理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試樣本

本研究中藜麥樣品均采自寧夏固原、隆德、彭陽地區(qū)種植品種。

1.1.2 化學(xué)試劑

維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞98%）、維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞98%）：中國藥品生物制品檢定所；木瓜蛋白酶[酶活力≥6 000/（USP-U/mg）]、淀粉酶（酶活力為1.2 U/mg～1.8 U/mg）、正丁醇、氫氧化鈉、鹽酸：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鐵氰化鉀、乙酸鈉：天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；甲醇：默克股份兩合公司。

1.1.3 儀器設(shè)備

Waters2696型高效液相色譜儀、Waters2475熒光檢測器：美國Waters公司；DNP-9272型恒溫培養(yǎng)箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；FE20型pH計(jì)、PL202-S型電子天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品配制

取干燥后的標(biāo)準(zhǔn)品，配制濃度為100 μg/mL儲(chǔ)備液，臨用前配制0.05 μg/mL工作液。

1.2.2 維生素B1樣品制備

參照文獻(xiàn)[16]方法制備，稱取5 g樣品于100 mL錐形瓶中，加60 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液，充分搖勻，塞上塞子，高壓滅菌鍋中121℃保持30 min。水解結(jié)束冷卻后取出，用2.0 mol/L乙酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0左右，加入2.0 mL混合酶溶液，搖勻后，置于培養(yǎng)箱中37℃過夜，將酶解液全部轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過濾，取濾液備用。

試液衍生：準(zhǔn)確移取維生素B1樣品濾液2.0 mL于10 mL試管中，加入1.0 mL堿性鐵氰化鉀溶液，渦旋混勻后，準(zhǔn)確加入2.0mL正丁醇，再次渦旋混勻1.5 min后靜置約10 min，待充分分層后，吸取正丁醇相（上層）經(jīng)0.45 μm有機(jī)微孔濾膜過濾，取濾液于棕色進(jìn)樣瓶，供分析用，標(biāo)準(zhǔn)溶液同法衍生。

1.2.3 維生素B2樣品制備

參照文獻(xiàn)[17]方法制備，稱取5 g樣品于100 mL錐形瓶中，加60 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液，充分搖勻，塞上塞子，高壓滅菌鍋中121℃保持30 min。水解結(jié)束冷卻后取出，用1.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0～6.5左右，加入2.0 mL混合酶溶液，搖勻后，置于培養(yǎng)箱中37℃過夜，將酶解液全部轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過濾，取濾液過0.45 μm水相濾膜過濾備用。同一操作方法做空白試驗(yàn)。

1.2.4 儀器色譜條件

色譜柱：C18反相色譜柱；流動(dòng)相：0.05 mol/L乙酸鈉溶液-甲醇（65∶35，體積比）；流速：1 mL/min；維生素B1激發(fā)波長375 nm，發(fā)射波長435 nm；維生素B2激發(fā)波長462 nm，發(fā)射波長522 nm。

2 結(jié)果分析

2.1 維生素標(biāo)準(zhǔn)品色譜分析

采用等度洗脫模式，按照儀器色譜條件，吸取0.05 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液上機(jī)分析，得到色譜分析圖，圖1為維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖，圖2為維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。結(jié)果表明，維生素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液在3.647 min出現(xiàn)目標(biāo)峰，且峰型較好，維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液在3.667 min出現(xiàn)目標(biāo)峰。

圖1 維生素B1標(biāo)準(zhǔn)對照品HPLC圖Fig.1 HPLC of standard reference substances of vitamin B1

2.2 樣品中維生素B1和維生素B2色譜分析

按照儀器色譜條件，將樣品處理液上機(jī)分析測定，圖3為藜麥中維生素B1色譜圖，圖4為藜麥中維生素B2空白色譜圖，圖5為藜麥中維生素B2色譜圖。結(jié)果表明，樣品中含有維生素B1和維生素B2，且在對應(yīng)的時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)目標(biāo)峰。

圖2 維生素B2標(biāo)準(zhǔn)對照品HPLC圖Fig.2 HPLC of standard reference substances of vitamin B2

圖3 藜麥中維生素B1HPLC圖Fig.3 HPLC of vitamin B1in quiona

圖4 藜麥中維生素B2空白HPLC圖Fig.4 Blank HPLC of vitamin B2in quiona

圖5 藜麥中維生素B2HPLC圖Fig.5 HPLC of vitamin B2in quiona

2.3 含量計(jì)算

2.4 藜麥中維生素B1含量分析

對供試的10種藜麥樣品維生素B1含量進(jìn)行測定，每個(gè)樣品平行測定2次，測定結(jié)果取平均值，得到結(jié)果見表1。

表1 藜麥中維生素B1含量Table 1 The contents of vitamin B1in quiona

由表1數(shù)據(jù)可知，各樣品中均含有維生素B1，含量差異明顯，在0.090 mg/100 g～0.252 mg/100 g之間，平均0.183 mg/100 g，10個(gè)品種里3號(hào)樣含量最高，9號(hào)樣含量最低。

2.5 藜麥中維生素B2含量分析

對供試的10種藜麥樣品維生素B2含量進(jìn)行測定，每個(gè)樣品平行測定2次，測定結(jié)果取平均值，得到結(jié)果見表2。

表2 藜麥中維生素B2含量Table 2 The contents of vitamin B2in quiona

由表2數(shù)據(jù)可知，各樣品中均含有維生素B2，含量差異明顯，在0.044 mg/100 g～0.118 mg/100 g之間，平均0.077 mg/100 g，4號(hào)樣品含量最高，9號(hào)樣品含量最低。

2.6 精密度試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)工作液連續(xù)5次進(jìn)樣，測得維生素B1峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值為3.02%，保留時(shí)間的RSD值小于0.5%，測得維生素B2峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值為3.55%，保留時(shí)間的RSD值小于0.8%，表明其具有較好的精密度。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在相同色譜條件下，制備5份9號(hào)樣品提取液，分析其維生素B1和維生素B2含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品中含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值均小于3.9%，表明該方法具有良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。

3 結(jié)論

1）通過本試驗(yàn)的結(jié)論可看出，高效液相色譜法比熒光光度法測定維生素B1和維生素B2的含量，時(shí)間縮短，省去凈化過柱流程，提高了效率，且準(zhǔn)確度高。

2）我國對于藜麥的種植及產(chǎn)品的開發(fā)仍然處在初級階段，現(xiàn)已在河北、河南、山西、甘肅、青海、吉林、內(nèi)蒙古、四川、浙江等省份[18-19]，以及西北的大部分高海拔地區(qū)都開始試種植，寧夏從2014年也全面開展試種。在寧夏中衛(wèi)香山、彭陽、張易、固原、隆德、大武口等地試種植，種植品種有白色、紅色、黑色3個(gè)品種藜麥，目前寧夏對藜麥的種植發(fā)展越來越重視[20]。人們對藜麥的關(guān)注度越來越高，研究的人員也較多，本文初次對寧夏固原、隆德、彭陽地區(qū)種植的藜麥進(jìn)行維生素B1和維生素B2含量的測定分析，以期為開發(fā)種植藜麥提供理論依據(jù)，從研究結(jié)果看，每個(gè)樣品的含量差異不大，與其他文獻(xiàn)[21]報(bào)道相比，含量偏低，且維生素B2和維生素B1在品種間的變化無一致的規(guī)律性。