1.遵義市食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563002；2.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550001

白及為蘭科植物白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.干燥的塊莖[1]，具有收斂止血、消腫生肌功效、用于咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒。知母為為百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.干燥的塊莖，白及和知母藥材外形極為相似，特別炮制為飲片后，由于白及與知母在價(jià)格上有極大的差異，在民間人們用知母冒充白及藥材和白及飲片銷(xiāo)售的例子越來(lái)越多。筆者采用白及對(duì)照藥材作為參照，建立HPLC指紋圖譜共有模式，為白及藥材快速識(shí)別提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent LC-1260高效液相色譜議(包括四元泵，DAD，柱溫箱，自動(dòng)進(jìn)樣器，工作站)，AB204-S型梅特勒電子天平，KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與材料 乙睛色譜純，娃哈哈純凈水，硅膠G薄層板(購(gòu)于青島海洋化工有限公司)，其它試劑均為分析純，白及對(duì)照藥材(批號(hào)：121262-201405，中國(guó)食品藥品檢檢驗(yàn)研究院)。白及和知母藥材，采集于貴州省遵義各地區(qū)，白及經(jīng)遵義市食品藥品檢驗(yàn)所鄧順超副主任中藥師鑒定為蘭科植物白及(Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.干燥的塊莖，知母為為百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.干燥的塊莖，樣品來(lái)源見(jiàn)表1。

2 方法和結(jié)果

2.1 指紋圖譜建立[3-6]

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Aglent C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)進(jìn)行線性梯度洗脫，0～10 min，5%A～10% A，10～15 min，10%A～20%A，15～35 min，20%A～30% A，35～45 min，30%A～10% A；45～50 min，10%A～5% A，體積流量：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；運(yùn)行時(shí)間：50 min；進(jìn)樣量為10 μL。所有組分在50 min內(nèi)出峰完畢。

表1 樣品來(lái)源

2.1.2 對(duì)照藥材溶液制備 取對(duì)照藥材約1.0 g，精密稱定，加甲醇20 mL，稱其重量，超聲處理50 min，取出，放置室溫，用甲醇補(bǔ)足重量，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取白及藥材粉末(過(guò)2號(hào)篩)1.0 g，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，即得。

2.1.4 方法學(xué)考察

2.1.4.1 精密度 取同一供試品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得各共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為1.0%，結(jié)果表明儀器精密度好。

2.1.4.2 重復(fù)性 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，以對(duì)照藥材為參照，共有特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為1.8%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.1.4.3 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，測(cè)得各共有特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為1.3%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5 共有指紋圖譜峰的標(biāo)定 根據(jù)11批白及供試品溶液和1批對(duì)照藥材溶液和3批混淆品知母溶液的HPLC法測(cè)定結(jié)果，以白及對(duì)照藥材為參照，比較其色譜圖(見(jiàn)圖2、圖3、圖4)，以對(duì)照藥材為參照，共有峰的保留時(shí)間和共有峰面積標(biāo)定共有峰13個(gè)，結(jié)果表明共有峰的保留時(shí)間RSD小于1.0%，符合指紋圖譜的要求。HPLC指紋圖譜13個(gè)共有峰保留時(shí)間和峰面積，見(jiàn)表2。

表2 白及共有峰保留時(shí)間和峰面積

3.6 相似度計(jì)算 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件2004年A版計(jì)算出10批次的白及與1批對(duì)照藥材和3批知母HPLC指紋圖譜的相似度，與共有模式相比較，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 10批不同產(chǎn)地白及和1批對(duì)照藥材和3批知母HPLC指紋圖譜的相似度

樣品號(hào)相似度S10.995S20.993S30.990S40.991S50.977S60.962S70.964S80.980S90.975S100.971S110.969S120.125S130.134S140.146

3 討論

通過(guò)建立該指紋圖譜，對(duì)10批白及和1批對(duì)照藥材和3批混淆品知母藥材HPLC圖譜進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10批白及藥材HPLC圖譜的共有峰保留時(shí)間、相對(duì)峰面積非常吻合，與對(duì)照藥材共有模式R比較，相似度均大于0.95。由此可以確定這10批見(jiàn)白及藥材質(zhì)量較為一致，這與藥材來(lái)源相吻合。共有峰峰面積相差較大外，這可能是藥材生長(zhǎng)環(huán)境因素影響，而3批知母藥材相似度均小于0.20。

本法簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度高，特征性強(qiáng)等特點(diǎn)，可用于白及藥材的質(zhì)量控制和識(shí)別，同時(shí)為遵義白及藥材和混淆品知母藥材鑒別和質(zhì)控制提供科學(xué)依據(jù)。