, 2*

1. 貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550000； 2. 貴州師范大學(xué)喀斯特研究院，國(guó)家喀斯特石漠化防治技術(shù)研究中心，貴州 貴陽(yáng) 550000；3. 中國(guó)科學(xué)院心理研究所，中國(guó)科學(xué)院心理健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101

隨著當(dāng)今社會(huì)壓力上升，焦慮癥、抑郁癥等慢性應(yīng)激相關(guān)的精神障礙受到研究者的特別關(guān)注。抑郁癥是一種慢性的反復(fù)發(fā)作的精神疾病，臨床核心癥狀表現(xiàn)為快感缺失，患者甚至產(chǎn)生自殺傾向，社會(huì)危害性很大。由于抑郁癥的病理機(jī)制較為復(fù)雜，所以不同作用機(jī)制的藥物對(duì)抑郁癥的治療效果也不一樣[1-3]，故從不同作用機(jī)制出發(fā)，開發(fā)抗抑郁藥物，具有重要意義。

青陽(yáng)參(Cynanchumotophyllum)為蘿藦科鵝絨藤屬植物，是西南地區(qū)的重要的民族藥之一，具有抗癲癇[4-5]、抗抑郁[6]等藥理活性作用，研究發(fā)現(xiàn)青陽(yáng)參的抗抑郁活性成分為C21甾體苷類[7-8]。青陽(yáng)參總苷對(duì)強(qiáng)迫游泳和懸尾等絕望篩選模型[6]和慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型動(dòng)物[9]的抑郁具有顯著的調(diào)節(jié)作用。基于抑郁癥病理機(jī)制的多樣性，不同的篩選模型代表了不同病理機(jī)制下的抑郁癥表現(xiàn)。所以，本研究采用較強(qiáng)應(yīng)激的社會(huì)挫敗應(yīng)激模型，考察青陽(yáng)參總苷的抗抑郁作用。

1 材料

1.1 動(dòng)物 雄性SD大鼠60只，雄性Long-Evans大鼠30只，均為清潔級(jí)，體重(250±10)g。動(dòng)物購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證：SCXK(京)2016-0011。光周期8:00-20:00，溫度20～24 ℃，濕度40%～70%，自由飲水進(jìn)食。

1.2 藥品 氟西汀(批號(hào)：J20160029，禮來(lái)蘇州制藥有限公司)，分析純蔗糖(批號(hào)：20160106，北京化工廠)，青陽(yáng)參總苷(自制)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組 清潔級(jí)SD大鼠60只，根據(jù)應(yīng)激前糖水偏愛基線值對(duì)動(dòng)物進(jìn)行平均分組，分為6組，每組10只。分別為：對(duì)照組、模型組、青陽(yáng)參總苷低、中、高(5、15、45 mg/kg)劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組(氟西汀，1.8 mg/kg)。

2.2 藥物制備 QYS提取方法[8]，取青陽(yáng)參塊根10 kg，粉碎，80%乙醇提取3次，合并提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋，石油醚萃取3次，水層再用氯仿萃取3次，合并氯仿部分?；厥章确?，得淺黃色青陽(yáng)參總苷粉末230 g，得率為2.3%。

2.3 社會(huì)挫敗應(yīng)激模型的建立[11]將SD大鼠放入到Long-Evans大鼠的飼養(yǎng)盒中，Long-Evans大鼠作為居住者會(huì)主動(dòng)攻擊SD大鼠，每次打斗1 h，前30 min讓其任意打斗，后30 min在飼養(yǎng)盒中間放置一個(gè)鐵絲網(wǎng)制成的隔板，使兩只動(dòng)物無(wú)法直接接觸，但存在視覺、嗅覺、觸覺的接觸，1 h后SD大鼠回籠。此后隔天按照上述方法進(jìn)行應(yīng)激，共應(yīng)激10 d。

2.4 給藥方法 QYS和氟西汀粉末分別溶于蒸餾水，QYS低、中、高給藥劑量分別為5、15、45 mg/kg，陽(yáng)性對(duì)照組氟西汀劑量為1.8 mg/kg，應(yīng)激前1小時(shí)灌胃給藥。應(yīng)激第5天開始每隔一天，QYS灌胃給藥1次，共給藥6次，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照組大鼠每天灌胃給藥1次，對(duì)照組每天給蒸餾水。

2.5 糖水偏愛行為測(cè)試 按照文獻(xiàn)方法[10]，單籠大鼠進(jìn)行1周糖水適應(yīng)訓(xùn)練，第1天適應(yīng)雙瓶1%的蔗糖水，第2天后均換成一瓶清水和一瓶1%的蔗糖水，在第8天測(cè)試糖水偏愛基線值(糖水偏愛=糖水消耗量/(糖水消耗量+清水消耗量)×水消耗量×100%)，測(cè)試前限制飲水24h。應(yīng)激前糖水偏愛基線值作為應(yīng)激0天數(shù)據(jù)，然后以同樣方法在應(yīng)激第4、8、10天分別測(cè)試各組大鼠糖水偏愛值。

2.6 曠場(chǎng)行為測(cè)試 曠場(chǎng)測(cè)試箱規(guī)格：100 cm×60 cm×50 cm。QYS給藥結(jié)束后用陌生情境曠場(chǎng)箱測(cè)試動(dòng)物的新穎尋求行為，記錄10 min內(nèi)大鼠在曠場(chǎng)中僵直行為時(shí)間、不動(dòng)時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離行為指標(biāo)。

2.7 驚跳反射行為測(cè)試 測(cè)試前大鼠放入驚跳反射箱的透明束縛盒進(jìn)行環(huán)境適應(yīng)，第2天將大鼠全部放入箱內(nèi)，箱內(nèi)持續(xù)65 dB白噪音直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，適應(yīng) 300 s 后，給予90 dB、100 dB、110 dB，50 ms的白噪音刺激各 10 次，刺激順序隨機(jī)，刺激間隔10～50 s。記錄小鼠在聲音刺激開始前200 ms至聲音結(jié)束后 1000 ms 的驚跳反射幅值，考察QYS能否抑制應(yīng)激引發(fā)的驚跳反射增強(qiáng)現(xiàn)象。

2.8 前脈沖抑制行為測(cè)試 前脈沖抑制(PPI)指在驚嚇刺激之前給予輕微刺激(前脈沖)可以抑制動(dòng)物對(duì)刺激反應(yīng)的現(xiàn)象，而強(qiáng)應(yīng)激后動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)PPI缺失行為。驚跳反射行為測(cè)試3 h后，動(dòng)物在驚跳反射箱進(jìn)行前脈沖抑制測(cè)試，首先給予30 dB前刺激，記錄在68 dB、71 dB 和77 dB聲音刺激下的驚跳反射幅值[13]，其他程序參數(shù)與驚跳反射行為測(cè)試一致?？疾霶YS對(duì)應(yīng)激后動(dòng)物的PPI行為的影響。

3 結(jié)果

3.1 青陽(yáng)參總苷對(duì)社會(huì)挫敗應(yīng)激大鼠糖水偏愛的影響 由表1可知，隨應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，社會(huì)挫敗應(yīng)激誘發(fā)大鼠糖水偏愛值下降。在應(yīng)激8 d，與對(duì)照組相比，模型組糖水偏愛值顯著下降(P<0.001)，QYS低、中、高劑量均能夠逆轉(zhuǎn)糖水偏愛值下降(P<0.01，P<0.001，P<0.001)，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系，氟西汀同樣能反轉(zhuǎn)應(yīng)激后大鼠糖水偏愛下降(P<0.001)。應(yīng)激第10天，與模型組相比，對(duì)照組和QYS給藥組糖水偏愛值均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

組別劑量(mg/kg)0d4d8d10d對(duì)照組-90.56±2.6888.64±4.6388.31±5.72***86.95±6.10模型組-90.48±2.1085.84±6.0272.80±15.3777.72±8.72QYS低劑量組588.83±4.8985.37±7.7980.78±6.20**86.89±7.14QYS中劑量組1587.06±4.9786.24±11.3382.88±8.44***86.26±6.35QYS高劑量組4587.04±7.0287.79±12.3988.56±4.95***87.27±10.40陽(yáng)性對(duì)照組1.888.02±2.2487.72±8.2788.44±6.35***86.88±5.82

注：與模型組比較，**P<0.01，***P<0.001。

3.2 青陽(yáng)參總苷對(duì)社會(huì)挫敗應(yīng)激大鼠曠場(chǎng)行為的影響 由表2可知，曠場(chǎng)行為結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僵直時(shí)間、不動(dòng)時(shí)間及活動(dòng)距離3個(gè)指標(biāo)，對(duì)照組與模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而QYS高劑量組大鼠僵直時(shí)間增加(P<0.01)，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠僵直時(shí)間也出現(xiàn)增加(P<0.01)。

組別劑量/mg/kg僵直時(shí)間/s不動(dòng)時(shí)間/s活動(dòng)距離/mm對(duì)照組-49.2±18.6455.0±110.333406.3±12048.4模型組-25.7±17.7422.2±136.637209.6±15315.5QYS低劑量組533.8±28.0430.3±119.733675.4±12421.5QYS低劑量組1546.7±20.7479.0±104.033936.6±11385.5QYS低劑量組4568.7±22.7**472.3±105.227291.5±11360.6陽(yáng)性對(duì)照組1.864.7±16.0**476.7±138.930822.9±15041.3

注：與模型組比較，**P<0.01。

3.3 青陽(yáng)參總苷對(duì)社會(huì)挫敗應(yīng)激大鼠驚跳反射的影響 由表3可知，模型組與對(duì)照組相比，對(duì)3個(gè)不同強(qiáng)度聲音刺激誘發(fā)的驚跳反射無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但QYS高劑量組對(duì)105 dB中等刺激誘發(fā)驚跳反射有一定的抑制作用(P<0.05)，青陽(yáng)參總苷給藥組對(duì)95 dB、115 dB聲音刺激誘發(fā)驚跳反射沒有影響。

組別劑量/mg/kg95dB105dB115dB對(duì)照組-134.2±48.8329.6±167.5418.8±196.4模型組-122.5±108.7372.7±247.2404.0±280.9QYS低劑量組5102.8±71.6258.8±211.1348.5±233.8QYS低劑量組15 54.3±23.0175.3±121.2342.8±227.1QYS低劑量組45 79.7±62.4110.2±98.1*295.6±148.8陽(yáng)性對(duì)照組1.8 85.4±39.0255.0±122.13555.4±122.8

注：與模型組比較，*P<0.05。

3.4 青陽(yáng)參總苷對(duì)社會(huì)挫敗應(yīng)激大鼠前脈沖抑制的影響 由表2可知，68 dB、71 dB、77dB 刺激下的PPI，各實(shí)驗(yàn)處理組間沒有顯著變化，模型組與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

組別劑量/mg/kg68dB71dB 77dB 對(duì)照組-50.3±17.948.9±15.966.9±15.5模型組-39.8±17.345.4±18.451.3±16.5QYS低劑量組548.7±15.155.3±13.562.1±22.9QYS低劑量組1552.5±19.762.6±10.274.4±9.7QYS低劑量組4546.9±17.358.6±9.556.8±17.9陽(yáng)性對(duì)照組1.848.4±12.954.8±11.569.7±11.4

4 討論

抑郁樣行為反應(yīng)包括快感缺失、自發(fā)活動(dòng)減少、行為絕望或習(xí)得性無(wú)助等[14-15]。社會(huì)挫敗模型中，利用有較強(qiáng)的領(lǐng)地或食物爭(zhēng)奪意識(shí)的Long-Evans大鼠，誘導(dǎo)動(dòng)物之間發(fā)生激烈爭(zhēng)斗，反復(fù)應(yīng)激導(dǎo)致 SD大鼠屈服出現(xiàn)抑郁樣行為，與人在社會(huì)中經(jīng)常受到挫敗而導(dǎo)致的抑郁行為的誘因類似。社會(huì)挫敗包括軀體和心理上雙重應(yīng)激，易誘發(fā)抑郁樣行為。該應(yīng)激范式能更好地模擬抑郁個(gè)體的情緒特征，可避免反復(fù)應(yīng)激導(dǎo)致動(dòng)物的適應(yīng)性，抑郁樣行為可持久保持，因此該模型對(duì)抗抑郁藥物研究具有重要作用[11, 16]

研究中發(fā)現(xiàn)，社會(huì)挫敗應(yīng)激8 d可導(dǎo)致大鼠糖水偏愛值下降，而與模型組相比QYS組和陽(yáng)性對(duì)照組能顯著恢復(fù)應(yīng)激后的糖水偏愛，說(shuō)明QYS著抑制社會(huì)挫敗應(yīng)激導(dǎo)致的快感缺失癥狀，而10 d糖水偏愛值反彈，可能是由于應(yīng)激時(shí)間短、次數(shù)少不足以維持穩(wěn)定的抑郁樣行為。曠場(chǎng)結(jié)果中，模型組大鼠的自主活動(dòng)性沒有顯著變化。與模型組相比，QYS高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組增加大鼠曠場(chǎng)中的僵直時(shí)間，這與高劑量QYS給藥半小時(shí)后動(dòng)物易現(xiàn)鎮(zhèn)定行為符合，可能與大劑量QYS對(duì)動(dòng)物活動(dòng)的抑制作用有關(guān)。除此之外，考慮到該社會(huì)挫敗應(yīng)激屬于較強(qiáng)烈應(yīng)激，因此對(duì)應(yīng)激后的驚跳反射增強(qiáng)及PPI缺失行為進(jìn)行考察。驚跳反射和PPI測(cè)試發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組與模型組沒有顯著差異，這也說(shuō)明該社會(huì)挫敗應(yīng)激未達(dá)到急性應(yīng)激的強(qiáng)度，不足以誘發(fā)應(yīng)激后驚跳反射增強(qiáng)和PPI缺失行為。但與模型組相比，QYS高劑量組能顯著抑制大鼠105dB驚跳反射幅值，說(shuō)明青陽(yáng)參總苷對(duì)較弱刺激誘發(fā)的驚跳反射行為具有一定抑制作用，提示青陽(yáng)參可能對(duì)驚跳反射有一定抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，QYS具有逆轉(zhuǎn)快感缺失、抑制驚跳反射增強(qiáng)作用，具有一定抗抑郁活性。