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        四君子湯對急性放射性腸炎大鼠腸道功能、 血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達的影響

        2018-09-20 07:29:16張琨康純嘉
        中醫(yī)藥信息 2018年5期
        關(guān)鍵詞:四君子湯白介素腸炎

        張琨,康純嘉

        (1.河南醫(yī)學高等專科學校,河南 鄭州 451191;2.鄭州大學第一附屬醫(yī)院,河南 鄭州 450000)

        放射性腸炎是盆腔、腹腔或腹膜后惡性腫瘤放療后的主要并發(fā)癥,為非特異性炎癥,表現(xiàn)為腹痛、膿液膿血便、腹瀉等,病變累及小腸、結(jié)腸、直腸黏膜及黏膜下層,迄今為止其發(fā)病機制尚未完全闡明[1-2]。隨著生活方式及飲食結(jié)構(gòu)改變,西醫(yī)臨床主要采用手術(shù)、營養(yǎng)支持療法及對癥處理,療效均不佳[3-4]。急性放射性腸炎大鼠模型為該病的防治和發(fā)病機制研究提供了重要參考,該動物模型可以很好的模擬免疫功能失衡的放射性腸炎,但在腸道無菌環(huán)境下不發(fā)生腸道炎性反應(yīng)[5]。放射性腸炎屬中醫(yī)“痢疾”“便血”等范疇,氣機不暢、氣血瘀滯以及濕熱內(nèi)蘊為其發(fā)病機制,四君子湯為益氣健脾的經(jīng)典方劑,對放射性腸炎具有較好的療效,但其作用機制尚不明確[6-7]。本研究采用X線直線加速器全腹照射建立急性放射性腸炎大鼠模型,探討四君子湯對小腸功能、血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達的影響。

        1 資料與方法

        1.1 動物與試藥

        1.1.1 實驗動物

        30只健康清潔級SD大鼠,北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供(SCXK(京)2011-0011),雌雄各半,體質(zhì)量(250±20)g。自然光線,以標準飼料和無菌蒸餾水喂養(yǎng)。

        1.1.2 試藥

        水合氯醛(國藥集團化學試劑有限公司);HE染色液(Sigma公司);血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33試劑盒(南京建成生物科技有限公司)。四君子湯藥物組成:人參10 g、白術(shù)9 g、茯苓6 g、甘草6 g,藥材均為本院中藥房提供,并制成1 g/mL的濃縮液。

        1.1.3 儀器

        Primus直線加速器(西門子);NI500顯微鏡(日本尼康公司);RM2125切片機和TPIIZO全自動封閉式組織脫水機(德國徠卡公司);Y6-6LF生物組織包埋機(湖北亞光易用電子技術(shù)有限公司);Biotek aQuant型酶標儀(上海坤肯生物化工有限公司)。

        1.2 動物模型及分組

        20只健康SD大鼠分籠飼養(yǎng),自然光照,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實驗,水合氯醛麻醉后,X線直線加速器全腹照射(DT9.0Gy)建立急性放射性腸炎大鼠模型[8-9],隨機分為模型組和試驗組。試驗組給予四君子湯灌胃,4.5 ml/kg,每天1次,模型組給予生理鹽水灌胃,4.5 ml/kg,每天1次。另取10只清潔級SD大鼠0.25 ml生理鹽水灌腸,同時生理鹽水灌胃,4.5 ml/kg,每天1次,為對照組。分別灌胃14天,14天后處死大鼠進行觀察。

        1.3 觀察指標

        觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進水、排便情況、體質(zhì)量等一般情況,精神狀態(tài)、飲食進水、排便情況分為好、較好、一般、較差、很差,分別為0分、1分、2分、3分和4分,評分越高,一般情況越差[10]。處死后各組大鼠,剖取大鼠小腸組織組織,洗凈內(nèi)容物,濾紙吸取多余水分,生理鹽水清洗后,10%甲醛固定液固定48 h后,二甲苯脫脂,酒精脫水,石蠟包埋,切片,HE染色,觀察各組大鼠的結(jié)腸組織病理。眼球取血,3 000 r/min離心15 min,分離血清后-80℃保存。采用ELISA法檢測血清血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達水平,嚴格按照說明書操作。

        1.4 統(tǒng)計學方法

        2 結(jié)果

        2.1 大鼠一般情況比較

        模型組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進水、排便情況評分高于對照組,而試驗組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進水、排便情況低于模型組,但高于對照組,模型組大鼠的體質(zhì)量低于對照組,試驗組高于模型組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

        表1 各組大鼠一般情況比較(分,

        注:與對照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05

        2.2 小腸組織病理學比較

        對照組大鼠小腸黏膜完整,各層結(jié)構(gòu)清晰,未見充血水腫;模型組大鼠小腸絨毛稀疏,高度降低,炎性細胞浸潤明顯,部分上皮細胞脫落,腺體變形萎縮;試驗組大鼠小腸絨毛均較完整,未見明顯潰瘍和炎性滲出物,絨毛高度和隱窩深度較大,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)果見圖1。

        圖1 各組大鼠結(jié)腸黏膜組織病理改變比較(HE染色,200×)

        2.3 血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達比較

        試驗組大鼠的血清血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達顯著低于模型組,且高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

        表2 各組大鼠血清血管內(nèi)皮細胞生長因子和 白介素-33表達比較

        注:與對照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05

        3 討論

        放射性腸炎嚴重影響患者生活質(zhì)量,但目前臨床療效欠佳[11-12]。放射性腸炎易引起患者的氧化應(yīng)激,炎癥介質(zhì)刺激腸黏膜,加重疾病,血管活性物質(zhì)可調(diào)節(jié)腸道平滑肌的舒張,促進胃腸道腺體分泌,抑制腸道蠕動,與放射性腸炎病情密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細胞生長因子維持血管正常狀態(tài)和完整性,提高血管通透性,促進血管生成和內(nèi)皮細胞增殖,在組織修復(fù)、血管再生方面具有重要作用[13]。白介素-33是近年來新發(fā)現(xiàn)的白介素家族的新成員,表達于多種類型細胞,如炎性細胞、上皮細胞和間葉細胞,可作為機體炎性反應(yīng)和組織破壞的信號分子,高表達可促進炎癥反應(yīng),與腸炎疾病具有密切關(guān)系[14]。腸道細菌在放射性腸炎的發(fā)病機制中起重要作用,參與放射性腸炎致病的始動和持續(xù)因素,急性放射性腸炎在腸道無菌環(huán)境下不發(fā)生腸道炎性反應(yīng),但在恢復(fù)正常腸道菌群狀態(tài)時則出現(xiàn)腸道炎性反應(yīng)。中醫(yī)學認為,放射性腸炎主要病機是脾氣虧虛,濕熱余邪內(nèi)蘊,瘀血阻滯腸絡(luò),濕熱蘊久影響脾胃運化功能,脾失健運,正氣難復(fù),遂出現(xiàn)血瘀,致使本病纏綿難愈[7,15]。本研究旨在探討四君子湯對急性放射性腸炎大鼠腸道功能、血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達的影響,更好指導臨床治療。

        本研究發(fā)現(xiàn),試驗組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進水、排便情況、體質(zhì)量等一般情況與模型組比較均有所改善,差異有統(tǒng)計學意義,說明四君子湯可保護急性放射性腸炎大鼠腸道功能。與四君子湯能夠調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡,促進受損腸上皮細胞的再生和重建,修復(fù)腸黏膜屏障有關(guān)。與模型組比較,試驗組大鼠小腸絨毛均較完整,未見明顯潰瘍和炎性滲出物,絨毛高度和隱窩深度較大,說明四君子湯對急性放射性腸炎大鼠具有較好的治療作用。

        四君子湯方中人參補中益氣為君藥,白術(shù)健脾燥濕為臣藥,茯苓健脾滲濕為佐藥,甘草和中緩急,調(diào)和諸藥為使藥,四藥合用,可共奏健脾益氣之功[16]。四君子湯可針對放射性腸炎氣機郁滯,瘀血內(nèi)阻病因病機,標本兼治。試驗組大鼠的血清血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達顯著低于模型組,且高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義。說明四君子湯可降低急性放射性腸炎大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達水平。這與四君子湯抑制結(jié)腸γ-氨基丁酸受體的表達,改善上皮細胞修復(fù),抗氧自由基損傷及改變白細胞介素水平,腸黏膜受損屏障和精密鏈接蛋白,改善腸黏膜滲透性,控制腸炎炎性反應(yīng)等有關(guān)[17-18]。

        綜上所述,急性放射性腸炎大鼠精神狀態(tài)、飲食進水、排便情況、體質(zhì)量較差,小腸受損,血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達水平升高,四君子湯可保護急性放射性腸炎大鼠小腸功能,降低血管內(nèi)皮細胞生長因子和白介素-33表達水平。

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