王佳佳 蔣業(yè)林 王芬 程云生 侯冠軍 季索菲 鄭露 李翔 張曄 吳育春 蘇友風

摘 要：為了解中華鱉胚胎的發(fā)育及稚鱉雌雄分化的性狀特征，通過監(jiān)測胚胎重隨著孵化時間、質量和稚鱉外形形態(tài)的變化，采用相關分析和通徑分析法，分析了胚胎性狀與質量的關系，建立回歸方程。在胚胎生長發(fā)育過程中對稚鱉的背甲長、寬和頭長等部位生長數(shù)據(jù)進行了測量統(tǒng)計，結果表明，背甲長、寬和頭長與胚胎重呈顯著正相關關系；從外觀觀察稚鱉性別差異明顯，根據(jù)外觀性狀參數(shù)進行驗證分析，正確率達89.5%。

關鍵詞：中華鱉；胚胎發(fā)育；稚鱉；雌雄分化

中圖分類號 Q954.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）12-0100-3

Development of Embryos in Juvenile Soft-shelled Turtles and Observation of Their Male and Female Differentiation

Wang Jiajia1，2 et al.

（1 Fishery institute，Anhui Academy of Agricultural Sciences，Hefei 230031，China；2 Anhui Engineering Research Center for turtle Farming Technology，Bengbu 233000，China）

Abstract：In order to know racteristics of the embryo development and the male and female differentiation of the juvenile soft shelled turtle， the relationship between the embryo character and the quality of the juvenile soft shelled turtle was analyzed by monitoring the changes of the quality of the embryo weight and the shape of the juvenile soft shelled turtle， and the regression equation was established by the correlation analysis and the path analysis. The growth data of the back length and head length of the juvenile soft shelled turtle were measured and analyzed. The results showed that the length and width of the back length， and the head length had a significant positive correlation with the weight of the embryo. From the appearance， the sex differences of juvenile soft shelled turtle were obvious， and the accuracy rate was 89.5% according to the appearance parameters.

Key words：Embryo；Embryonic development；Juvenile soft shelled turtle；Male and female differentiation

中華鱉（Embryo），又名甲魚、團魚等，卵生兩棲爬行動物，具有重要的研究價值，廣泛分布于東南亞各國。在我國，除新疆、西藏、青海外，其它各省均有分布。自然條件下鱉卵孵化率低，人工孵化可提高其成活率。孵化過程中，蛋殼向胚胎提供多種無機鹽，卵黃提供有機物和無機物，當胚胎生長速度或者孵化期長時，孵化出殼后，剩余的可利用卵黃很少，卵黃是中華鱉開口之前的能源，卵黃剩余多，有助于提高存活率。溫度除了能夠影響中華鱉性腺發(fā)育，還能影響發(fā)育過程中的能耗，溫度過高，導致胚胎發(fā)育能耗過高；溫度過低，孵化期長，總能耗增加[1]。朱阿莉等還發(fā)現(xiàn)，在低溫下孵化出的稚鱉活動力較弱，放入水中后，需要多次用手觸碰驅趕才會游動，而且游泳能力較弱，易死亡[2]。中華鱉卵能夠適應一定的溫度變化，最適宜溫度是28～32℃，溫度過高或者過低都會導致胚胎死亡。但是自然環(huán)境下很難模擬中華鱉的適宜溫度，本文將在變溫條件下，研究中華鱉的胚胎發(fā)育過程，以期為中華鱉的孵化形態(tài)學方面的研究提供參考。

本研究的主要內(nèi)容：（1）中華鱉卵在孵化過程中的胚胎質量與性狀之間的關系；（2）稚鱉性狀與性別之間的關系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗所用鱉卵均取自安徽省喜佳農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，質量在2.9～4.5g，均重3.7g。游標卡尺為長城精工數(shù)顯游標卡尺，精確到0.01mm。電子秤為上海越平科學儀器，精確到0.01g。

1.2 實驗方法 以蛭石為孵化介質，室溫下孵化，溫度變化范圍23～30℃，濕度范圍70%～80%。測量方法根據(jù)行業(yè)標準SC/T 1108-2011，頭寬為頭部最寬處，背甲長為背甲前緣至后緣的直線距離，背甲寬為背甲左右兩側的直線距離。自觀察到胚胎之日起，每隔2d解剖觀察，直至孵化出殼。胚胎發(fā)育過程采用體式顯微鏡進行觀察，數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進行分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理 對所有統(tǒng)計量進行獨立樣本的T檢驗、Duncan多重比較、表型相關分析、數(shù)量性狀對活體質量的通徑分析以及決定系數(shù)的計算，建立數(shù)量性狀與活體質量的最優(yōu)回歸方程。

2 結果與分析

2.1 鱉卵外觀的變化 剛產(chǎn)下的卵為白色球形，直徑在2.5～4cm，產(chǎn)后20h左右，在一端呈現(xiàn)白色圓形的受精斑，稱為動物極，而未受精的鱉卵則無該現(xiàn)象出現(xiàn)，這與其他大部分的龜鱉卵的發(fā)育相似。趙偉華等認為該現(xiàn)象主要是由于胚盤上行到殼下膜的原因[3]，本文在實驗過程中亦發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象。發(fā)育初期，網(wǎng)狀的血管從胚體輻射出來，逐漸觀察到胚胎呈月牙形首尾相連，能明顯觀察到胚胎的跳動。隨著胚胎的發(fā)育，顏色逐漸加深，至孵化后期，卵已經(jīng)不能透光，可以明顯地看出尿囊動脈和尿囊靜脈的血管系統(tǒng)，與胚胎循環(huán)相連接。由于尿囊緊貼在多孔的殼膜下面，為正在發(fā)育著的胚胎提供O2和排除CO2。中華鱉卵屬多黃卵型，蛋白含量少，卵中無蛋白系帶，所以在胚胎發(fā)育過程中，盡量不要翻動，以保證動物朝向上方，便于獲得O2。

2.2 質量隨孵化天數(shù)的變化曲線 每天稱重20顆卵，相對于孵化開始時的質量，卵質量減少5.4%（0.054±0.027）。

以胚胎重和卵重的比值為變量x，以孵化時間為因變量Y，擬合二者之間的關系，如表1所示，擬合的曲線類型中相關系數(shù)R2均大于0.8，回歸關系均達到極顯著水平（p<0.001），說明時間對胚胎和質量比值具有決定性的作用，因在孵化過程中質量變化較少，表明時間對胚胎的質量起主要作用。根據(jù)表1中擬合的6種類型，發(fā)現(xiàn)三次曲線模型的R2最大，但是三次函數(shù)的系數(shù)較小，可忽略不計。故選用二次曲線模型：Y=-2.139+0.111x-0.001x2。

從表2可以看出，背甲長、寬和頭長、寬與胚胎重均正相關，其中背甲寬對胚胎重的影響最為明顯，相關性均達到極顯著水平（Pearson相關系數(shù)最大，p<0.01）。

2.3.2 通徑分析 采用Kolmogorov-Smirnov Test 和Shapiro-Wilk Test對胚胎重進行正態(tài)性檢驗，Kolmogorov-Smirnov Test適用于大樣本的檢測，Shapiro-Wilk Test適用于小樣本檢測，本研究的樣本量為15個，因此對胚胎重進行Shapiro-Wilk Test檢驗。如表4所示，Shapiro-Wilk的統(tǒng)計量為0.879，顯著性水平0.154>0.05，符合正態(tài)分布，可進行回歸分析。

使用SPSS建立胚胎重與表型參數(shù)的回歸方程

Y=-7.422-89.343PSL/CL+20.232CW/CL，對各系數(shù)進行顯著性檢驗，PSL/CL和CW/CL對胚胎重的影響均達到顯著性水平（P<0.05），達到極顯著水平。

2.4 性別判定 如圖1所示，雌雄稚鱉在外觀上最明顯的差異為尾巴的長短，雄性尾部超出裙邊，尾巴尖而長，雌性尾巴較短，不漏出裙邊，尾巴短而軟。實體生物顯微鏡下可觀察到，最初的生殖腺位于腹腔后部脊柱兩旁，腎臟的腹方前外側，腸道的背方，呈短細管狀，表面光滑，無色膠狀透明。外形上早期的精巢和卵巢無區(qū)別， 隨著胚胎的逐步發(fā)育，生殖導管在實體顯微鏡下清晰可辨，精巢向后與附睪延伸形成的輸精管直接相連，輸卵管在卵巢的外側呈細管狀且明顯。這與朱道玉觀察的一致[4]。

3 結論

中華鱉的受精卵為白色球形，孵化初期，一端呈現(xiàn)白色圓形的動物極，胚胎發(fā)育過程中，顏色不斷加深，動物極需朝上保證O2供給。研究結果表明，胚胎重和卵重的比值與孵化時間的關系符合二次曲線模型：Y=-2.139+0.111x-0.001x2。稚鱉的吻突、背甲長、寬對胚胎重的影響均達到均顯著性水平。出殼后的稚鱉雄性尾部超出裙邊，雌性尾巴較短，不漏出裙邊。通過性狀參數(shù)對性別進行判別，89.5%的分類正確。

參考文獻

[1]杜衛(wèi)國，計翔.孵化溫度對中華鱉胚胎物質和能量利用的影響[J].動物學報，2001（05）：512-517.

[2]朱阿莉，史燕，朱新平，等.溫度對中華鱉胚胎發(fā)育和初生幼體形態(tài)特征及活動能力的影響[J].基因組學與應用生物學，2013，32（03）：303-307.

[3]趙偉華，朱新平，魏成清，等.黃喉擬水龜胚胎發(fā)育的觀察[J].水生生物學報，2008（05）：649-656.

[4]朱道玉.中華鱉性腺的發(fā)生與發(fā)育研究[J].水生生物學報，2009，33（05）：924-930.

（責編：王慧晴）