李業(yè)山

前列腺癌是臨床中老年男性最常見(jiàn)的疾病之一，血清PSA作為診斷依據(jù)時(shí)易與其它良性或惡性前列腺組織疾病的診斷發(fā)生重合，因此找到1種特異性強(qiáng)，靈敏度高的腫瘤標(biāo)記物對(duì)于前列腺癌的診斷和預(yù)后治療有重要意義。本研究通過(guò)對(duì)血清B2M(β2-微球蛋白)在前列腺癌患者內(nèi)分泌治療前后表達(dá)差異性及與血清PSA原相關(guān)性分析來(lái)探討B(tài)2M與前列腺癌臨床治療之間的關(guān)系，為前列腺癌發(fā)展進(jìn)程的診斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月至2017年5月間在本院確診治療的前列腺癌患者35例，年齡65～85歲，平均(75±6.4)歲。根據(jù)Gleason評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將患者分為高分化組11例(評(píng)分為2～4分)、中分化組12例(評(píng)分為5～7分)、低分化組12例(評(píng)分為8～10分)。收集體檢健康的人和前列腺增生患者血清各35例，年齡65～85歲。三組研究對(duì)象基本資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡65～85歲；②知情并同意參與本研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡<65或>85歲；②患有其它前列腺疾病或影響本次研究的疾病的患者；③家長(zhǎng)或本人不愿參與本次研究的患者。

1.3 治療方法

首先對(duì)患者的病情進(jìn)行診斷，根據(jù)患者的病情采用不同的內(nèi)分泌治療方法，內(nèi)分泌治療方法主要有藥物去勢(shì)治療、最大限度雄激素阻斷治療、雙側(cè)睪丸切除術(shù)(LHRH-A聯(lián)合應(yīng)用抗雄激素藥物氟他胺或比卡魯胺)，用藥策略：服用比卡魯胺50 mg 1次/d聯(lián)合注射達(dá)菲林3.75 mg 1次/月，或服用氟他胺250 mg 3次/天。

1.4 研究方法

1.4.1 樣品采集方法 對(duì)前列腺癌患者分別在內(nèi)分泌治療前及治療后1月、3月、6月采集血清標(biāo)本。對(duì)參與本次研究的受試者于次日清晨空腹抽取靜脈血5 ml加入試管,室溫放置30 min,3 000轉(zhuǎn)/分離心血清[1-2]。取1 ml上清液于消毒的EP管中,置于-20 ℃冰箱保存。

1.4.2 血清B2M檢測(cè)方法 應(yīng)用B2M檢測(cè)試劑盒，血清B2M抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的血清B2M與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的血清B2M抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清B2M呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值)，計(jì)算樣品濃度[3]。

1.4.3 血清PSA檢測(cè)方法 應(yīng)用試劑盒，包被有PSA單克隆抗體固相載體上的標(biāo)記抗體分別與待測(cè)樣品的不同位點(diǎn)結(jié)合形成三層夾心,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可計(jì)算樣品中血清PSA的含量，包被載體的值與待測(cè)樣品中的含量成正比[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，運(yùn)用pearson對(duì)血清B2M和血清PSA進(jìn)行相關(guān)性分析，P<0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌患者治療前后血清B2M與血清PSA的檢測(cè)結(jié)果與相關(guān)性分析

患者治療前血清B2M與血清PSA水平均較高。在治療1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月后血清B2M與血清PSA水平逐漸降低。治療效果較好的患者在治療6個(gè)月后血清B2M與血清PSA基本降至正常水平。對(duì)患者治療前，治療1個(gè)月，治療3個(gè)月的血清B2M與血清PSA數(shù)據(jù)采用pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)兩者呈正相關(guān)(P<0.05)。在治療3個(gè)月和治療6個(gè)月后患者血清B2M水平未發(fā)生較大變化，可能與患者病情好轉(zhuǎn)有關(guān)。部分癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者血清B2M水平出現(xiàn)升高現(xiàn)象，血清PSA水平無(wú)明顯變化，見(jiàn)表1。

表1 前列腺癌患者治療前后血清B2M與血清PSA的檢測(cè)結(jié)果

2.2 治療前三組受試者血清B2M與血清PSA檢測(cè)結(jié)果及分析

前列腺增生組血清B2M水平與正常人無(wú)明顯差異，前列腺癌組血清B2M水平明顯高于正常人組和前列腺增生組。三組受試者的血清PSA水平存在較大差異，其中前列腺癌組的血清PSA水平明顯高于正常人組和前列腺增生組，前列腺增生組的血清PSA水平為(5.28±1.22)ng/ml，高于正常人(1.24±0.68)ng/ml。其中前列腺癌組血清B2M與血清PSA水平呈正相關(guān)，前列腺增生組與正常人組無(wú)此現(xiàn)象，見(jiàn)表2。

3 討論

前列腺癌是男性?；嫉拿谀蛳到y(tǒng)疾病之一，尤其多發(fā)于老年男性。由于區(qū)域差別等原因，歐美國(guó)家的發(fā)病率尤其高，甚至超過(guò)了肺癌等高發(fā)病率疾病。我國(guó)的發(fā)病率雖然低于歐美國(guó)家，但就近幾年的觀察來(lái)看，我國(guó)的發(fā)病率正處于逐年增長(zhǎng)的狀態(tài)[5]。前列腺癌的早期診斷和預(yù)后判斷一直是臨床醫(yī)生關(guān)心的重點(diǎn)。準(zhǔn)確診斷前列腺癌的發(fā)展進(jìn)程對(duì)于治療方案的選取和病情的治療都有重要意義。目前對(duì)前列腺癌臨床診斷主要以血清PSA的檢測(cè)結(jié)果作為診斷依據(jù)[6-8]。雖然血清PSA的檢測(cè)對(duì)早期沒(méi)有癥狀的前列腺癌的診斷具有重要意義，但由于血清PSA產(chǎn)生于前列腺上皮細(xì)胞而進(jìn)入血液循環(huán)，血清PSA的檢測(cè)易受到各種因素的影響。同時(shí)前列腺增生和前列腺癌的PSA水平在4～10 ng/ml時(shí)有較大部分重疊，在這個(gè)所謂灰色區(qū)域難以根據(jù)PSA水平來(lái)區(qū)分前列腺增生和前列腺癌，對(duì)前列腺癌的準(zhǔn)確診斷產(chǎn)生了較大影響。因此找到一種特異性強(qiáng)，靈敏度高的診斷指標(biāo)對(duì)前列腺癌的治療有重大影響。本課題通過(guò)對(duì)血清β2-微球蛋白在前列腺癌患者內(nèi)分泌治療前后表達(dá)差異性研究及與血清前列腺特異抗原相關(guān)性分析，為前列腺癌早期診斷及預(yù)后治療提供依據(jù)[9]。

表2 治療前三組受試者血清B2M與血清PSA檢測(cè)結(jié)果

在本研究中，通過(guò)對(duì)比分析前列腺癌患者治療前和治療1個(gè)月，治療3個(gè)月，治療6個(gè)月的血清B2M與血清PSA檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)。治療前血清B2M與血清PSA均處于高水平狀態(tài)。隨著治療進(jìn)程的推進(jìn)，患者病情好轉(zhuǎn)，血清B2M與血清PSA水平逐漸降低。運(yùn)用pearson相關(guān)分析數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)血清B2M與血清PSA水平在各時(shí)期呈正相關(guān)。其中有5例患者癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移，病情加重。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，5例患者的血清B2M水平升高，但血清PSA水平出現(xiàn)正?，F(xiàn)象。將治療前前列腺癌患者的血清B2M與血清PSA數(shù)據(jù)與正常人和前列腺增生患者的數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，前列腺癌患者和前列腺增生患者的血清PSA水平均高于正常人。前列腺癌患者的血清B2M水平高于前列腺增生患者和正常人，前列腺增生患者的血清B2M水平與正常人無(wú)明顯差別[10-11]。

綜上所述，血清B2M與血清PSA在患者進(jìn)行內(nèi)分泌治療后在血液中的濃度逐漸降低。兩者的檢測(cè)結(jié)果呈明顯的正相關(guān)，因此血清B2M與血清PSA均可作為前列腺癌的初期診斷標(biāo)準(zhǔn)和預(yù)判標(biāo)準(zhǔn)。治療后期，患者病情加重時(shí)，血清B2M水平升高，而血清PSA出現(xiàn)正?，F(xiàn)象。血清PSA作為前列腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)易與前列腺增生發(fā)生重疊，因而血清B2M與血清PSA相比，在前列腺癌的診斷過(guò)程中具有更高的特異性。