楊錦旺 田榮華 薛明月 周維華

肺癌是1種發(fā)病率和死亡率增長迅速且對人類健康和生命都產(chǎn)生了極大威脅的惡性腫瘤。臨床上通常把Ki-67和p53作為腫瘤的標記物。但目前的臨床研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67和p53作為腫瘤的診斷依據(jù)仍存在一定爭議[1]。因此找到1種腫瘤評估效果更穩(wěn)定，能夠協(xié)助早期腫瘤診斷的標記物對患者的治療將會產(chǎn)生重大意義。本研究通過對非小細胞肺癌患者PBK/TOPK與Ki-67及p53在癌細胞中的表達進行檢測，分析探討PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中表達相關性及預后意義，為非小細胞肺癌的臨床診斷和預后治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月至2016年12月間于本院確診并接受手術切除治療的非小細胞肺癌患者88例，其中腺癌患者29例、鱗癌患者30例，大細胞癌患者29例，收集患者原發(fā)灶組織的手術切除樣本?；颊吣挲g35～55歲，平均(46.5±4.6歲)。其中男性患者51例，女性患者37例。肺癌細胞低分化患者54例，中至高分化患者34例。

1.2 納入及排除標準

納入標準：①年齡在35～55歲；②患有非小細胞肺癌；③知情并且同意參與研究。

排除標準：①年齡<35或>55歲；②患有其它影響PBK/TOPK、Ki-67、p53表達的癌癥患者；③家長或本人不愿參與本次研究的患者。

1.3 研究方法

1.3.1 免疫組織化學染色法步驟 ①將石蠟切片用二甲苯脫蠟，酒精脫水；②用0.3%H2O2室溫下處理切片10～30 min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性；③PBS溶液洗滌切片5 min；④滴加稀釋比例為1∶100的的一抗，室溫下孵育2～3 h。用PBS溶液沖洗5次，每次3 min；⑤滴加用生物素標記的二抗，室溫孵育30 min；⑥用PBS溶液沖洗5次，每次3 min；⑦顯色劑顯色5 min(DAB等)；⑧用自來水充分沖洗顯色后的切片，除去顯色劑；⑨不復染用于定量測試的切片，選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?；⑩用非一抗作為陰性對照組，用已知的非小細胞肺癌組織PBK/TOPK、Ki-67、p53陽性表達的切片作陽性對照[2-3]。

1.3.2 檢測結果評判方法 陽性：表現(xiàn)為棕黃色顆?；蚝贮S色顆粒；陰性：表現(xiàn)為淡黃色細顆粒。將PBK/TOPK、Ki-67、p53陽性細胞百分比分別≥15%、≥40%、≥25%的檢測結果定義為高表達[4]。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析，并用spearson進行相關性分析，對患者術后5年生存率的記錄和比較結果比較用卡方進行檢驗。P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中表達的檢測結果及相關性分析

根據(jù)檢測結果可以觀測到肺癌細胞細胞核中有棕黃色顆?；蚝贮S色顆粒，Ki-67和p53陽性表達于肺癌細胞細胞核，PBK/TOPK陽性表達于胞質(zhì)，胞質(zhì)中可以觀測到棕黃色顆?；蚝贮S色顆粒。PBK/TOPK、Ki-67、p53高表達率分別為47.7%、69.3%、62.5%。采用spearson進行相關性分析發(fā)現(xiàn)，PBK/TOPK與Ki-67和p53的表達呈正相關。P<0.05差異有統(tǒng)計學意義，見表1、表2。

表1 PBK/TOPK、Ki-67在非小細胞肺癌中的表達結果及相關性分析(例，%)

表2 PBK/TOPK、p53在非小細胞肺癌中的表達結果及相關性分析(例，%)

2.2 PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中的表達與患者預后的關系

根據(jù)患者的跟蹤記錄結果可以發(fā)現(xiàn)，患者的中位生存期與PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中的表達有關。PBK/TOPK、Ki-67、p53低表達患者中位生存期明顯長于高表達的患者(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。PBK/TOPK、Ki-67、p53表達與患者中位生存期有關。PBK/TOPK表達低Ki-67表達低的患者中位生存期高于PBK/TOPK表達高Ki-67表達低、PBK/TOPK表達低Ki-67表達高以及PBK/TOPK表達高Ki-67表達高的患者。PBK/TOPK表達高Ki-67表達低、PBK/TOPK表達低Ki-67表達高的患者的中位生存期高于PBK/TOPK表達高Ki-67表達高的患者。PBK/TOPK、p53表達相關性對患者中位生存期的影響與PBK/TOPK、Ki-67表達相關性影響情況類似，見表3。

3 討論

肺癌是現(xiàn)實生活中很常見的1種惡性腫瘤。其發(fā)病因素有很多，吸煙、大氣污染等都是其發(fā)病率逐年升高的重要因素[5-6]。有相關報道指出肺癌正逐漸發(fā)展為我國城市人口中死亡率最高的惡性腫瘤[7]。其中非小細胞肺癌占肺癌80%～85%左右。由于早期診斷很難檢測出非小細胞肺癌，這也導致了非小細胞肺癌的高死亡率，許多患者在患病后的存活期限都不超過5年。目前對肺癌的主要治療方法有化學治療、放射治療和手術治療。但手術切除后癌細胞易轉移的特點也容易引起病情復發(fā)，因此患者術后的存活率很低[8]。目前臨床上主要把Ki-67和p53作為預后診斷的依據(jù)。但根據(jù)近來的研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67和p53作為診斷的獨立因素仍存在較大爭議。因此找到1種更準確，診斷結果更穩(wěn)定的診斷依據(jù)對患者的預后診斷和治療具有重大意義，有利于提高患者的中位生存期限[9]。本課題通過研究PBK/TOPK與Ki-67及p53在非小細胞肺癌中表達相關性來探究這種相關性對患者預后的影響，為患者的預后診斷和治療提供依據(jù)。

表3 PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中的表達及其與中位生存期的關系

PBK/TOPK具有促進非小細胞肺癌細胞增殖的功能，目前臨床研究發(fā)現(xiàn)，PBK/TOPK除在一些胚胎組織和睪丸組織中有表達外，在其它正常細胞組織中幾乎不表達，在癌細胞中則存在高表達現(xiàn)象。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)PBK/TOPK、Ki-67、p53非在小細胞肺癌中的表達結果呈正相關，且PBK/TOPK與Ki-67及p53的正相關性影響著患者的預后。PBK/TOPK與Ki-67及p53表達越低，患者的中位生存期越高。結合相關數(shù)據(jù)我們可以推測PBK/TOPK在肺癌細胞中的高表達具有促進肺癌細胞增殖的作用，因而影響了Ki-67蛋白的高表達。相關研究發(fā)現(xiàn)，在某些癌細胞中PBK/TOPK與野生p53結合域的相互作用能抑制p53的表達進而促進癌細胞增殖[10]。在本研究中p53的高表達率為62.5%，大部分非小細胞肺癌細胞存在p53突變現(xiàn)象，根據(jù)相關資料可以推測這種突變可能在一定程度上受到PBK/TOPK高表達的影響。因此PBK/TOPK與Ki-67及p53在非小細胞肺癌細胞中的表達可能存在某種影響機制，使得它們在非細胞肺癌細胞中的表達呈正相關，這種正相關性又對患者的預后結果產(chǎn)生影響。

綜上所述，PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中表達結果呈正相關。這種相關性會對患者的預后情況產(chǎn)生影響。通過對PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小細胞肺癌中的表達結果進行檢測，分析其相關性，可以作為患者預后診斷和治療的依據(jù)。