王文然 郭 瑞 張 華

乳腺惡性腫瘤是臨床較為常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，流行病學(xué)研究顯示乳腺惡性腫瘤的發(fā)病率可達(dá)735～988/100000萬人左右[1]。近年來乳腺惡性腫瘤的發(fā)生呈現(xiàn)出了明顯的年輕化的趨勢，且其臨床預(yù)后較差，遠(yuǎn)期病死率相對較高[2]。

在探討乳腺惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)因子的改變，可以通過影響乳腺腫瘤上皮細(xì)胞的增殖、凋亡或者侵襲等能力的改變，進(jìn)而促進(jìn)患者病情的進(jìn)展，加劇臨床分期或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等風(fēng)險[3]。α-SMA能夠在提高癌細(xì)胞的變形能力，增加其對于癌細(xì)胞DNA的結(jié)合等方面發(fā)揮作用，促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移或者對于臨近正常組織的浸潤[4]。已有的研究探討了α-SMA在乳腺癌患者中的異常蛋白表達(dá)，但缺乏對其與患者臨床病理特征的關(guān)系研究。為了進(jìn)一步揭示α-SMA的表達(dá)與乳腺惡性腫瘤患者臨床病理特征的關(guān)系，本次研究選取(2015年1月至2016年12月)我院收集的乳腺腫瘤術(shù)后標(biāo)本進(jìn)行研究，旨在為乳腺腫瘤的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制與影響因素的研究提供新參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年12月我院收集的乳腺腫瘤術(shù)后標(biāo)本進(jìn)行研究，患者均為女性，按腫瘤良、惡性分組。其中乳腺惡性腫瘤組標(biāo)本100例、良性腫瘤組標(biāo)本60例。惡性腫瘤組，年齡33～65歲，平均(47.4±9.2)歲，其中TNM分期[5]：Ⅰ期29例、Ⅱ期30例、Ⅲ期41例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，組織學(xué)類型：乳腺導(dǎo)管原位癌34例、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌66例；組織學(xué)分級：Ⅰ級24例、Ⅱ級39例、Ⅲ級37例。良性腫瘤組，年齡27～65歲，平均(45.2±11.8)歲，其中乳腺纖維瘤21例、乳腺導(dǎo)管上皮普通型增生27例、乳腺導(dǎo)管上皮非典型增生12例。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有研究標(biāo)本均來自于我院手術(shù)后切除的病變標(biāo)本；②所有標(biāo)本均經(jīng)過病理學(xué)診斷證實(shí)；③惡性腫瘤標(biāo)本手術(shù)前未采取放化療、免疫治療；④患者的各項臨床資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有血液系統(tǒng)疾病、凝血功能障礙；②合并免疫疾病；③獲取標(biāo)本前患者接受過放化療及免疫治療；④合并其他類型惡性腫瘤。

1.3 免疫組化SP方法

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5 min，加入α-SMA抗體(鼠來源，ABCUM公司)，37 ℃孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(購自abcum公司)，37 ℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1.4 冰凍切片免疫組化染色判斷標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化SP法結(jié)果判定α-SMA蛋白陽性的依據(jù)：①著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色和褐色；②根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞比例≤10%為“-”、11%～50%為“+”、51%～75%為“++”、>75%為“+++”，≤10%為陰性、>10%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組腫瘤組織中α-SMA蛋白表達(dá)差異

經(jīng)免疫組化染色后評分判斷，乳腺惡性腫瘤組織中α-SMA蛋白陽性率為79.00%，顯著高于乳腺良性腫瘤組織的25.00%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 兩組α-SMA蛋白表達(dá)情況比較/例

2.2 α-SMA蛋白表達(dá)與乳腺惡性腫瘤患者臨床病理特征的關(guān)系

乳腺惡性腫瘤組織中α-SMA蛋白陽性表達(dá)與患者年齡、病灶直徑、ER表達(dá)、PR表達(dá)、原癌基因人類表皮生長因子受體2(human epidermalgrowth factor receptor-2,HER-2)表達(dá)無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與腫瘤組織臨床分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類型具有顯著相關(guān)性(P<0.05)(表2)。

3 討論

乳腺癌的病情進(jìn)展，可以導(dǎo)致多器官的轉(zhuǎn)移或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，患者生存預(yù)后較差。長期的臨床隨訪研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌的致殘率或者病死率近年來呈現(xiàn)出了明顯的上升趨勢[6]，臨床上乳腺癌患者的中位生存時間不足24個月，五年生存率不足35%[7-8]。而通過對乳腺癌發(fā)病過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，一方面可以為揭示乳腺惡性腫瘤的病情進(jìn)展提供理論基礎(chǔ)，同時可以為臨床上乳腺癌的綜合性治療措施如分子靶向治療等提供新的作用靶點(diǎn)。α-SMA蛋白的四級空間結(jié)構(gòu)上包含了多個可結(jié)合的糖蛋白配體，其可以通過影響癌細(xì)胞相關(guān)惡性腫瘤信號通路蛋白的轉(zhuǎn)錄或者激活等方面發(fā)揮作用，加劇癌細(xì)胞的生物學(xué)特性的改變，導(dǎo)致癌細(xì)胞的DNA擴(kuò)增或者癌基因相關(guān)蛋白的磷酸化修飾的改變，促進(jìn)患者癌細(xì)胞的侵襲或者轉(zhuǎn)移的發(fā)生[9-10]。α-SMA蛋白的高表達(dá)，能夠促進(jìn)乳腺癌間質(zhì)細(xì)胞成分中p53信號通路的激活、加劇P16等癌相關(guān)蛋白的翻譯，影響到上皮病變細(xì)胞的極性、導(dǎo)致癌組織對于乳腺基底膜層的突破和浸潤[11-12]。已經(jīng)證實(shí)的是，α-SMA蛋白能夠在促進(jìn)甲狀腺癌、卵巢癌或者肝癌等多種惡性腫瘤的臨床分期的進(jìn)展、癌組織的浸潤或者組織學(xué)分型的惡化等方面發(fā)揮了一定的促進(jìn)作用[13]，但在乳腺癌患者中的研究不足。

表2 α-SMA蛋白表達(dá)與乳腺惡性腫瘤臨床病理特征的關(guān)系分析(例，%)

本次研究通過免疫組化分析研究發(fā)現(xiàn)，α-SMA蛋白的陽性表達(dá)率在乳腺惡性腫瘤病灶組織中較高，明顯高于正常良性病變組織，差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義，分析其原因可能為：腫瘤間質(zhì)中肌纖維母細(xì)胞為主要的功能細(xì)胞，肌纖維母細(xì)胞通過不同的信號通路參與腫瘤細(xì)胞生物活性的調(diào)節(jié)，而α-SMA是肌纖維母細(xì)胞的細(xì)胞表型可靠的標(biāo)志性蛋白，其可作為間質(zhì)細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)化指標(biāo)。當(dāng)肌纖維母細(xì)胞中出現(xiàn)α-SMA蛋白高表達(dá)時，即會促進(jìn)腫瘤增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移。在乳腺腫瘤中，α-SMA蛋白的高表達(dá)能夠在腫瘤相關(guān)蛋白信號通路的激活或者加劇癌細(xì)胞對于臨床乳腺導(dǎo)管或者小葉的浸潤方面發(fā)揮作用，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對于腋窩淋巴結(jié)或者鎖骨下淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移風(fēng)險。李艷宏等[14]研究者在對400例乳腺疾病患者的病變組織進(jìn)行檢測的研究中發(fā)現(xiàn)，100例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者(D組)的腫瘤間質(zhì)中α-SMA的陽性表達(dá)率顯著另外3組(P<0.05)，提示a-SMA陽性肌纖維母細(xì)胞增多與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。因此，本次研究所得結(jié)果并結(jié)合上述分析提示α-SMA蛋白可能參與到了乳腺惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中。本研究在探討α-SMA蛋白的表達(dá)與乳腺惡性腫瘤的臨床病理特征的觀察過程中發(fā)現(xiàn)α-SMA蛋白的表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型、組織學(xué)分級或者臨床分期等具有密切的關(guān)系，相關(guān)臨床病理過程的進(jìn)展越為明顯，α-SMA蛋白的表達(dá)濃度越高，趨勢較為明顯。趙晶潔等[15]學(xué)者在對100例相關(guān)乳腺癌組織中α-SMA蛋白的表達(dá)及其生物學(xué)行為的研究中也發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌組織中α-SMA蛋白表達(dá)均高于良性乳腺組織,且與乳腺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計學(xué)意義。對本研究結(jié)果從機(jī)制上考慮，α-SMA蛋白的高表達(dá)與患者臨床病理的關(guān)系可能主要與下列幾個方面的因素有關(guān)：①α-SMA蛋白的高表達(dá)，促進(jìn)乳腺癌患者局部腫瘤病灶組織中的腫瘤微環(huán)境的惡化，促進(jìn)患者局部炎癥損傷導(dǎo)致的持續(xù)性腫瘤細(xì)胞的增殖；②α-SMA蛋白的高表達(dá)，能夠在促進(jìn)乳腺癌患者的腫瘤干細(xì)胞因子CD44、CD133等的高表達(dá)的同時，促進(jìn)癌病灶組織的癌細(xì)胞的遷移和細(xì)胞凋亡的抑制。③α-SMA蛋白的高表達(dá)，使乳腺上皮細(xì)胞可獲得間質(zhì)特性，失去典型的上皮細(xì)胞粘附性與極性，從而獲得遷移能力，誘使腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)部位，通過血管和淋巴管轉(zhuǎn)移。

本次研究綜合探討了細(xì)胞間質(zhì)成分相關(guān)生物學(xué)因子的異常表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，這有利于揭示乳腺癌的發(fā)生機(jī)制。綜上所述，乳腺惡性腫瘤間質(zhì)中α-SMA的表達(dá)顯著的升高，并且與乳腺惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。后續(xù)臨床研究應(yīng)該在探討α-SMA蛋白與乳腺癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系等方面做進(jìn)一步的研究。