張志強(qiáng)，全昌銀，胡鵬，杜志勇

宜昌市第一人民醫(yī)院暨三峽大學(xué)人民醫(yī)院1甲乳科，2普外科，3門診部，湖北 宜昌4430000

三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）與其他類型乳腺癌相比，具有發(fā)病率高、發(fā)病早、治療難、易復(fù)發(fā)及預(yù)后差的特點(diǎn)[1]。TNBC是一種不表達(dá)人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和雌激素受體（estrogen receptor，ER）的乳腺癌[2]。近年來，隨著 TNBC 發(fā)病率的不斷增加，臨床越來越重視其臨床特征、治療方案的選擇及臨床預(yù)后的研究[3]。目前，TNBC的治療僅限于化療，但療效不明顯，患者治療后的轉(zhuǎn)移率和局部復(fù)發(fā)率較高，預(yù)后欠佳[4]。本研究對(duì)宜昌市第一人民醫(yī)院收治的TNBC和非TNBC患者的臨床特征、預(yù)后及藥物敏感度蛋白表達(dá)情況進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年4月至2017年4月在宜昌市第一人民醫(yī)院接受治療的乳腺癌患者221例，并搜集其存檔的乳腺癌組織標(biāo)本。其中TNBC患者63例，作為觀察組；非TNBC患者158例，作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為乳腺癌；②術(shù)前均未接受放化療；③病歷資料保存完整；④均為女性；⑤均能獲取隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病歷資料不完整；②晚期或復(fù)發(fā)乳腺癌患者；③術(shù)后未接受正規(guī)輔助化療，或接受少于6個(gè)療程的化療。收集患者的年齡、病理類型、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑、絕經(jīng)狀態(tài)、手術(shù)方式、乳腺癌家族史等一般資料。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測

采用免疫組織化學(xué)SP法測定兩組患者乳腺癌組織中拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（topoisomeraseⅡ，TOPOⅡ）、β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulin Ⅲ）、p53、Ki-67和E-cadherin的表達(dá)情況。石蠟切片脫蠟水化，制成4～5 μm厚切片，放入Citrate緩沖液，在微波中中火煮沸10 min，用蒸餾水沖洗冷卻后，30 ml/L過氧化氫浸入5 min，經(jīng)蒸餾水沖洗后，再用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）沖洗。加入一抗，孵育30 min后，用PBS沖洗3次，每次約2 min，加入二抗En-Vision孵育30 min后，與加入一抗相同，用PBS沖洗后，加DAB顯色，用蘇木精對(duì)比染色。以PBS為陰性對(duì)照，以陽性切片為陽性對(duì)照。

1.3 隨訪方法

采用門診復(fù)查、電話回訪等方式對(duì)出院患者進(jìn)行隨訪。隨訪內(nèi)容包括患者乳腺癌轉(zhuǎn)移、生存和復(fù)發(fā)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)。以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床特征的比較

觀察組和對(duì)照組患者的年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、病理類型和手術(shù)方式比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）；觀察組中有乳腺癌家族史、臨床分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的患者所占比例均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。（表1）

2.2 TOPOⅡ、 β-tubulinⅢ、 p53、Ki-67和E-cadherin表達(dá)情況的比較

觀察組患者乳腺癌組織中TOPOⅡ的陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，β-tubulinⅢ的陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）；觀察組和對(duì)照組患者乳腺癌組織中p53、Ki-67、E-cadherin的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。（表2、圖1）

表1 兩組患者臨床特征的比較

表2 兩組腫瘤組織中TOPOⅡ、 β-tubulinⅢ、 p53、Ki-67、E-cadherin陽性表達(dá)情況的比較[ n（%）]

圖1 觀察組與對(duì)照組TOPOⅡ、 β-tubulinⅢ陽性表達(dá)情況（免疫組化染色，×100）

2.3 生存情況的比較

觀察組患者的中位總生存時(shí)間和中位無進(jìn)展生存時(shí)間均短于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=26.705、27.190，P﹤0.05）。（圖2、圖3）

圖2 觀察組與對(duì)照組患者的總生存曲線

圖3 觀察組與對(duì)照組患者的無進(jìn)展生存曲線

3 討論

TNBC是一種特殊類型的乳腺癌，據(jù)報(bào)道，TNBC的平均發(fā)病年齡約為53歲，低于非TNBC[5]。TNBC患者的組織學(xué)分級(jí)較高，且在絕經(jīng)前發(fā)病，對(duì)于臨床判斷有積極意義。TNBC缺乏HER2/neu靶基因的表達(dá)以及相應(yīng)的激素受體，因此無法對(duì)其進(jìn)行靶向治療和內(nèi)分泌治療[6]。TNBC對(duì)內(nèi)分泌治療不敏感，且常用的分子靶向藥物對(duì)其針對(duì)性較差，導(dǎo)致患者的總體預(yù)后較差，關(guān)于進(jìn)一步改善TNBC的預(yù)后效果需要進(jìn)行深入研究[7]。TNBC有著獨(dú)特的生物學(xué)行為，對(duì)其化療敏感度的分析是化療研究的熱點(diǎn)問題。越來越多的學(xué)者開始研究TNBC并針對(duì)其臨床治療策略、臨床生物學(xué)和分子生物學(xué)的特征進(jìn)行深入研究[8]。乳腺癌的靶向治療越來越受到重視，鉑類藥物治療是目前TNBC患者腫瘤切除術(shù)后最常用的治療方法[9]。TNBC患者與非TNBC患者相比，治療后更易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，這也是TNBC患者治療失敗并最終死亡的重要原因[10]。有研究表明，TNBC患者的臟器轉(zhuǎn)移率高于非TNBC患者，且肺部和腦轉(zhuǎn)移率也較非TNBC患者高，但骨轉(zhuǎn)移率較非TNBC患者低[11]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者的中位總生存時(shí)間和中位無進(jìn)展生存時(shí)間均短于對(duì)照組（P﹤0.05）；且觀察組中有乳腺癌家族史、臨床分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的患者所占比例均高于對(duì)照組（P﹤0.05），表明TNBC患者的乳腺癌家族史會(huì)增加其患病的風(fēng)險(xiǎn)。

TOPOⅡ參與DNA的復(fù)制，是與細(xì)胞增殖相關(guān)的一類酶，是嘧啶拮抗劑、蒽環(huán)類以及氟尿嘧啶等多種化療藥物的靶點(diǎn)[12]。TOPOⅡ主要存在于S期細(xì)胞，其表達(dá)率降低導(dǎo)致藥物靶向作用的位點(diǎn)減少，使藥物的作用效果下降，進(jìn)而影響TNBC化療的敏感度，甚至可引起腫瘤細(xì)胞耐藥。TOPOⅡ在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)率越高，以TOPOⅡ?yàn)榘悬c(diǎn)的化療藥物的敏感度越高，TOPOⅡ的表達(dá)情況與患者的腫瘤大小和局部分期具有一定的相關(guān)性，與腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[13]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者乳腺癌組織中TOPOⅡ的陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組（P﹤0.01），表明TNBC患者腫瘤組織內(nèi)TOPOⅡ陽性表達(dá)率下降更為明顯，藥物的敏感度更低，影響了化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。

β-tubulinⅢ與肺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等一些實(shí)體腫瘤的預(yù)后具有一定的相關(guān)性。β-tubulinⅢ與腫瘤細(xì)胞紫杉醇耐藥性的獲得密切相關(guān)，是紫杉醇的靶向作用位點(diǎn)[14]。有研究顯示，βtubulinⅢ的表達(dá)水平變化會(huì)影響紫杉醇的化療敏感度，導(dǎo)致治療效果下降，β-tubulinⅢ高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞紫杉醇耐藥有關(guān)[15]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者乳腺癌組織中β-tubulinⅢ的陽性表達(dá)率高于對(duì)照組（P﹤0.05），表明TNBC患者β-tubulinⅢ的表達(dá)率高于非TNBC患者，可導(dǎo)致TNBC患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的耐藥性增強(qiáng)，影響患者的治療效果，可能會(huì)引起預(yù)后不良。

綜上所述，臨床可根據(jù)TNBC患者體內(nèi)TOPOⅡ、β-tubulinⅢ的表達(dá)水平判斷患者的臨床治療效果及預(yù)后情況。