徐婷娟，沈國棟，程民，胡世蓮

[中國科學技術大學附屬第一醫(yī)院(安徽省立醫(yī)院)老年醫(yī)學研究所，腫瘤免疫與營養(yǎng)治療安徽省重點實驗室，合肥 230001]

我國是目前世界上唯一一個老年人口超過1億的國家，而且正在以每年3%以上的速度快速增長，我國已經(jīng)出現(xiàn)第一個老年人口增長高峰。據(jù)第6次全國人口普查顯示，我國60歲及以上老年人口已達1.78億，老年人口比重由總人口數(shù)的13.3%增加至16%。隨著中國人口老齡化進展以及癌癥發(fā)病率的不斷攀升，老年腫瘤患者數(shù)量日益增長。老年人免疫功能低下，而惡性腫瘤患者又通常伴有免疫功能障礙，機體的免疫狀態(tài)與腫瘤的進展及預后密切相關。因此，檢測老年腫瘤患者外周血中T淋巴細胞，對患者的臨床治療及預后判斷等具有重要的參考價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2014年1月至2017年8月中國科學技術大學附屬第一醫(yī)院收治的115例老年惡性腫瘤患者作為研究組，男87例，女28例；年齡(73.4±10.0)歲；其中消化道腫瘤55例，肺癌44例，其他腫瘤16例。入選標準：年齡≥60歲，無其他惡性腫瘤史，不伴有自身免疫性疾病，未服用激素類藥物或接受免疫抑制劑治療。所有病例均經(jīng)病理確診。

健康對照組：選取在我院進行體檢的48例健康者，男38例，女10例；年齡(76.1±10.1)歲。排除近期有感染情況和其他疾病。

1.2 試劑與儀器 CD系列(CD3/4/8)細胞檢測玻片及自動計數(shù)儀由上海匯中細胞生物科技有限公司提供。

1.3 標本采集與檢測 采集入選對象的外周靜脈血2 mL加入乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)的抗凝管中，充分混勻后待測。配置磷酸鹽緩沖液，取20 μL血樣加至380 μL磷酸鹽緩沖液中，充分混勻。吸取5 μL稀釋血，加入玻片方框區(qū)域中央。濕盒內加入室溫水，水平放置，孵育40 min。將玻片插入染色架，將染色架即刻放入磷酸鹽緩沖液中，旋轉提拉至玻片呈無色透明。將染色架即刻放入過氧化酶染色液中，靜置1 min。將稍加瀝干的染色架放入新鮮過氧化氫工作液中，靜置4 min。將染色架放入75%乙醇染液缸中，旋轉提拉直至玻片呈無色透明，再置于干燥儀下干燥6 min。將染色架放入復染液，靜置1 min后，轉入純水染液缸，靜置30 s，提拉數(shù)次后提出。染色架鎖扣打開，用干燥儀干燥后，用自動計數(shù)儀計數(shù)。

2 結果

多數(shù)指標整體差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。多重比較并結合主要數(shù)據(jù)分析：老年腫瘤患者組CD3+、CD4+與CD4+/CD8+低于健康對照組(P<0.05)，CD8+比老年健康對照組略高，但差異無統(tǒng)計學意義。消化道腫瘤組、肺癌組與其他腫瘤組CD3+、CD4+與CD4+/CD8+均低于健康對照組(P<0.05)，CD8+比老年健康對照組略高，但差異無統(tǒng)計學意義。各腫瘤組之間比較，CD3+、CD4+、CD8+與CD4+/CD8+均差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

3 討論

腫瘤是在各種內外致癌因素共同作用下，機體自身細胞發(fā)生惡變轉化而成。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關，尤其是T細胞介導的細胞免疫，在腫瘤免疫中占重要地位[1]。隨著對腫瘤免疫機制的了解和腫瘤免疫治療的應用，越來越多的細胞免疫檢測指標被用來監(jiān)測腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和判斷治療效果及預后，目前應用最多的是T淋巴細胞亞群的測定[2-4]。

惡性腫瘤的發(fā)生和轉移過程中，患者的免疫功能，尤其是抗腫瘤免疫功能減退具有重要作用。在機體抗腫瘤免疫中細胞免疫又是關鍵，特別是T細胞的數(shù)量和功能發(fā)生異常時，可使腫瘤細胞逃逸宿主的免疫監(jiān)控。血液中T淋巴細胞亞群的檢測是觀察機體細胞免疫水平的重要方法，對惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系統(tǒng)疾病的診斷、治療及預后判斷有重要作用。成熟的T淋巴細胞表面均可表達CD3分子，而CD4、CD8不能同時表達于成熟的T淋巴細胞表面，故可將成熟的T淋巴細胞分為CD4+T細胞和CD8+T細胞二個亞群。CD4+細胞可識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，協(xié)助B細胞分泌抗體和調節(jié)其他T細胞的免疫應答，進而發(fā)揮抗瘤作用；另外，CD4+細胞還可釋放多種細胞因子參與抗瘤效應。CD8+細胞常表現(xiàn)出細胞毒活性，抑制免疫應答活化階段，其作用的靶細胞是抗原特異性的Th和B細胞[5-7]。

在腫瘤患者的CD3、CD4、CD8表達的多項研究中均可發(fā)現(xiàn)淋巴細胞的功能紊亂，實驗顯示，淋巴細胞亞群活性是反映腫瘤患者的機體免疫功能狀態(tài)常用指標[8]。有研究顯示，無論是小細胞還是非小細胞肺癌晚期的患者CD3+、CD4+數(shù)值明顯低于健康人群[9]。黨連生等[10]對CD3、CD4、CD8在肺癌、消化道腫瘤及乳腺癌患者中的表達進行分析，發(fā)現(xiàn)CD4+數(shù)值及CD4+/CD8+比值在腫瘤患者中均明顯低于健康對照組。嚴健等測定了100例腫瘤患者及90名健康對照組外周血淋巴細胞亞群，結果顯示腫瘤患者組T淋巴細胞外周血絕對計數(shù)CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值與健康組比較明顯下降，提示腫瘤患者存在免疫功能異常，T淋巴細胞亞群絕對技術的變化對腫瘤患者病情監(jiān)測及預后判斷具有重要意義[11]。

表1 腫瘤患者組與健康對照組外周血T淋巴細胞亞群檢測結果比較

注：與健康對照組比較,aP<0.05

本研究結果顯示：老年腫瘤患者組CD3+、CD4+與CD4+/CD8+明顯低于老年健康對照組，CD8+在兩組之間差異無統(tǒng)計學意義，與文獻[12]的結果一致。提示老年惡性腫瘤患者的細胞免疫功能處于免疫抑制狀態(tài)。CD4+細胞介導的抗瘤效應明顯降低，機體對識別和殺傷突變細胞的能力下降，形成了腫瘤的生長轉移。有研究發(fā)現(xiàn)非小細胞肺癌患者化療后CD3+、CD4+/CD8+比值、NK細胞數(shù)顯著升高，患者的免疫功能也有不同程度地恢復[13]。CD8+屬于抑制性T淋巴細胞，CD8+越高，免疫抑制越強，患者的抵抗力越弱。本研究中老年腫瘤組CD8+較健康對照組相比略高，但差異無統(tǒng)計學意義。本研究中消化道腫瘤組、肺癌組與其他腫瘤組之間比較，CD3+、CD4+、CD8+與CD4+/CD8+均差異無統(tǒng)計學意義。

綜上所述，對老年惡性腫瘤患者的外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)與CD4+/CD8+比值進行檢測，觀察各個指標的變化情況可以了解老年腫瘤患者的免疫狀態(tài)，對確定其相應的治療方案，觀察療效及評估預后具有重要意義。