王姍姍，王莉，程媛媛，范艷，王菲迪，吳聲敢

(浙江省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標準研究所 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全國家重點實驗室省部共建培育基地農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥 殘留檢測重點實驗室，浙江 杭州 310021)

草莓以其味道鮮美、色澤艷麗、營養(yǎng)豐富而深受我國人民的喜愛。草莓栽培容易、生產(chǎn)成本低、產(chǎn)量高、收益好，近年來已成為農(nóng)民增加收入的主要途徑。草莓主要采用設施栽培方式進行種植，而設施大棚內(nèi)高溫高濕環(huán)境增加了病蟲害發(fā)生的概率[1]。據(jù)調(diào)查，浙江省草莓病害主要有16種、蟲害有18種[2]。由于草莓病蟲害發(fā)生種類多，農(nóng)戶必須使用不同的農(nóng)藥進行防治。據(jù)統(tǒng)計，草莓生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥有56種，其中殺菌劑有吡唑醚菌酯等33種，吡蟲啉等殺蟲劑16種，丁草胺等除草劑3種及蕓苔素內(nèi)酯等植物生長調(diào)節(jié)劑5種[3]。同時，為減少施藥次數(shù)，節(jié)省勞動力，農(nóng)戶常一次使用多種農(nóng)藥進行防治，易導致草莓農(nóng)藥產(chǎn)生多殘留現(xiàn)象[4-6]。隨著生活水平的提高，食品安全問題得到了人們的普遍關(guān)注。因此，開發(fā)一種簡單快速、準確穩(wěn)定、可用于草莓多殘留檢測的方法具有重要的意義。

超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)因具有高通量、高靈敏度、分析時間短、極佳的選擇性和去除干擾能力等優(yōu)點，已成為草莓樣品農(nóng)藥殘留檢測的有力工具[5-10]。QuEChERS前處理方法因具有簡單、快速、回收率高、準確度和精密度高等優(yōu)點，在草莓樣品農(nóng)藥殘留檢測中也得到了廣泛應用[4,6-8,10]。但已有研究結(jié)果顯示，草莓樣品一次檢測最多只有35種農(nóng)藥[9]，不能滿足當前草莓農(nóng)藥殘留檢測需求。因此，迫切需要開發(fā)一種農(nóng)藥多檢測檢測方法，其檢測參數(shù)應涵蓋當前草莓生產(chǎn)上使用的農(nóng)藥及將來可能使用的農(nóng)藥。本研究采用QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜法建立了草莓中啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺、多菌靈、聯(lián)苯肼酯等85種農(nóng)藥殘留同時測定的方法，以期為草莓產(chǎn)品質(zhì)量安全和風險評估提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

LCMS-8050超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司)，Phenomenex Luna? Omega C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.6 μm，美國菲羅門公司)，AB104-S電子天平(感量0.000 1 g，梅特勒-托利多國際貿(mào)易上海有限公司)，OHAUS SPS202F型電子天平(感量0.01 g，奧豪斯儀器常州有限公司)，TYZD-IIA振蕩器(姜堰市天儀電子儀器有限公司)，Sigma 3-18k高速冷凍離心機(德國Sigma公司)，TD5A-WS離心機(金壇市金南儀器制造有限公司)，移液槍，容量瓶，藥勺，50 mL PPTE離心管等。

色譜純乙腈(Merck公司)，飲用純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)，色譜純甲酸(Anaqua Chemicals Supply公司)，分析純氯化鈉(天津市大茂化學試劑廠)，分析純無水硫酸鎂(天津市大茂化學試劑廠)，Cleanert MAS-QuEChERS(MS-9PP0250，C1850 mg，PSA 50 mg，PC 50 mg，MgSO4150 mg，天津博納艾杰爾科技有限公司)等。

標準品為85種農(nóng)藥標準品或標準溶液，均購于德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司和上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.2 樣品提取與凈化

稱取10 g草莓樣品于50 mL PPTE離心管中，加入10 mL乙腈，振蕩器上以200 rpm的轉(zhuǎn)速振蕩30 min后，加入3 g氯化鈉和5 g無水硫酸鎂，劇烈手搖30 s。然后將盛裝樣品的離心管在離心機離心5 min (離心力RCF=1 006g)，取1.5 mL上清液轉(zhuǎn)入含有50 mg PSA+50 mg C18+150 mg MgSO4的2 mL離心管。充分振蕩混勻后將混合液離心3 min(離心力RCF=7 155g)，吸取上清液0.5 mL過0.22 μm有機濾膜后進UPLC-MS/MS檢測。

1.3 UPLC-MS/MS分析

1.3.1 液相條件

色譜柱為Phenomenex Luna? Omega C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.6 μm，美國菲羅門公司)，流動相為0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脫(表1)，流速0.2 mL·min-1，柱溫40 ℃，進樣體積5.00 μL，峰面積外標法定量。

表1 高效液相色譜梯度洗脫參數(shù)

1.3.2 質(zhì)譜條件

電噴霧質(zhì)譜正離子模式(ESI+)，三重四級桿質(zhì)量分析器，多反應監(jiān)測模式(MRM)，毛細管電壓4.0 kV，霧化氣流量3.0 L·min-1，加熱氣流量10.0 L·min-1，Heat Block溫度400 ℃，DL 溫度250 ℃，Interface溫度300 ℃。85種農(nóng)藥的質(zhì)譜檢測參數(shù)見表2～4。

表2 氧樂果等供試農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

注：*代表定量離子，表3～4同。

表3 百克威等供試農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

表4 甲拌磷等供試農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

1.4 標準溶液的配制及標準曲線的繪制

標準儲備液的配制。分別準確稱取85種農(nóng)藥的標準品，用色譜純乙腈溶解并配制成一定濃度的單個農(nóng)藥的標準儲備液，于4 ℃下避光保存，標準儲備液濃度均大于500 mg·L-1，有效期為1年。

10 mg·L-1混合標準工作液的配制。準確移取相應體積的85種農(nóng)藥標準儲備液，用色譜純乙腈定容，得到濃度為10 mg·L-1混合標準工作液，于4 ℃下避光保存，有效期為1個月。

基質(zhì)匹配標準溶液的配制，將草莓空白樣品按照1.2節(jié)方法進行處理，得到空白基質(zhì)溶液，用空白基質(zhì)溶液稀釋10 mg·L-1的混合標準工作液，得到濃度為0.5、1、5、10、50、100、500 μg·L-1的系列匹配標準溶液。按1.3條件測定，以待測農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

1.5 添加回收試驗

選取草莓空白樣品進行添加回收試驗，驗證該快速檢測方法的回收率，并考察方法的準確度和精密度。85種農(nóng)藥在草莓中的添加水平均為5，50和200 μg·kg-1，每個濃度水平重復5次，按1.2節(jié)方法進行處理，1.3節(jié)條件進行測定，計算添加回收率和相對標準偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

試驗對比了Phenomenex Luna? Omega C18(2.1 mm×50 mm，1.6 μm)和Waters ACQUITY UPLCTMBEH C18(2.1 mm×100 mm×1.7 μm)兩種色譜柱的分離效果及化合物的儀器響應。結(jié)果表明，85種化合物在2根柱子上均有較好的峰型和重現(xiàn)性，但85種化合物在使用Phenomenex Luna? Omega C18色譜柱時儀器響應普遍高于ACQUITY UPLCTMBEH C18色譜柱，因此最終選擇Phenomenex Luna? Omega C18色譜柱分離待測物。試驗對比發(fā)現(xiàn)，使用體積分數(shù)為0.1%的甲酸水溶液和0.1%的甲酸乙腈溶液為流動相，待測物的分離度和峰型均較好，且化合物的響應也有明顯的增強效果。

2.2 凈化管的選擇

凈化管的組成和含量是影響樣品前處理效果的重要因素。試驗對比2種凈化管，一種為C1850 mg，PSA 50 mg，MgSO4150 mg，另一種在前一種凈化管的基礎上增加石墨化炭(GCB)50 mg。結(jié)果表明，當添加GCB時嘧菌環(huán)胺、吡唑醚菌酯、阿維菌素等農(nóng)藥的回收率小于70%，推測GCB對這些具有平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥有一定的吸附作用，從而造成添加回收率偏低，而不添加GCB時，85種農(nóng)藥的添加回收率均大于70%，滿足農(nóng)藥定量分析的要求[11]。

2.3 方法的線性、靈敏度、準確度和精密度

在0.5～500 μg·L-1范圍內(nèi)，85種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度和對應峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.994 5。檢出限為評價方法靈敏度的指標。以信噪比等于3對應的目標化合物濃度作為方法的檢出限(表5～6)。

選取空白草莓樣品進行加標回收試驗。以回收率表示方法的準確度，回收率的相對標準偏差(RSD)表示方法的精密度。由表7～8可知，在5，50和200 μg·kg-1的添加水平下，平均回收率為70.2%～109.0%，RSD為0.23%～13.90%(n=5)。除蕓苔素內(nèi)酯的定量限為50 μg·kg-1外，其余84種農(nóng)藥均為最低一檔添加濃度5 μg·kg-1。

表5 氧樂果等農(nóng)藥的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

表6 氟酰胺等農(nóng)藥的質(zhì)線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

表7 氧樂果等農(nóng)藥在草莓中的添加回收率和相對標準偏差

表8 氯蟲苯甲酰胺等農(nóng)藥在草莓中的添加回收率和相對標準差

3 小結(jié)

本研究采用QuEchERS前處理方法結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了草莓中85種農(nóng)藥殘留同時測定的方法。方法采用基質(zhì)匹配標準溶液外標法定量。樣品前處理簡單、靈敏度高，線性關(guān)系、準確度和精密度等各項指標均能滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求，適用于草莓中該85種農(nóng)藥的同時測定。