陳麗萍，吳長(zhǎng)興，蒼濤，徐明飛，柳采秀，吳聲敢，趙學(xué)平

(1.浙江大學(xué) 農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310058； 2.浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室—省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，浙江 杭州 310021)

灰霉病是草莓上主要的真菌病害之一，近幾年來(lái)，隨著草莓的廣泛種植，灰霉病問(wèn)題日益突出，尤其在我國(guó)南方發(fā)生更為嚴(yán)重[1-3]。草莓灰霉病害是由半知菌亞門葡萄孢屬的灰葡萄孢菌(BotrytiscinemaPers.)侵染引起。果實(shí)成熟前植株感染灰霉病菌會(huì)導(dǎo)致花和果實(shí)的軟化腐爛，嚴(yán)重影響草莓生長(zhǎng)，使農(nóng)業(yè)生產(chǎn)受損；果實(shí)成熟后儲(chǔ)存和運(yùn)輸時(shí)期感染灰霉病菌致使草莓果實(shí)大量腐爛。因此，灰霉病已成為嚴(yán)重影響草莓生長(zhǎng)以及采摘后防腐保鮮的主要病害之一，直接造成品質(zhì)和產(chǎn)量下降，對(duì)草莓產(chǎn)區(qū)經(jīng)濟(jì)影響極大[4-5]。目前，草莓尚無(wú)高抗灰霉病的品種，生產(chǎn)上控制灰霉病仍以化學(xué)防治為主[6]，隨著化學(xué)防治導(dǎo)致病原菌抗藥性、農(nóng)藥殘留等問(wèn)題日益加重[7]。本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率抑制法，將8種殺菌劑對(duì)采集于建德的草莓灰霉病菌株進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定，以期篩選出效果好風(fēng)險(xiǎn)低的農(nóng)藥，為指導(dǎo)草莓灰霉病的防治及草莓生產(chǎn)安全合理用藥提供理論和實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

草莓灰霉病菌由本實(shí)驗(yàn)室采集自浙江省建德市楊村橋鎮(zhèn)緒塘村草莓種植大棚中的病果，經(jīng)分離、純化獲得。

馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)[8]用于草莓灰霉病菌的分離、保存以及毒力測(cè)定。

供試藥劑有50%啶酰菌胺水分散粒劑(巴斯夫植物保護(hù)(江蘇)有限公司)；75%百菌清可濕性粉劑(日本石原產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社)；35%腐霉利懸浮劑(四川省宜賓川安高科農(nóng)藥有限責(zé)任公司)；70%嘧霉胺水分散粒劑(京博農(nóng)化科技股份有限公司)；50%嘧菌環(huán)胺水分散粒劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)；255 g·L-1異菌脲懸浮劑(拜耳作物科學(xué)(中國(guó))有限公司)；250 g·L-1戊唑醇水乳劑(江蘇龍燈化學(xué)有限公司)；12%(125 g·L-1)咯菌腈懸浮劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)。各供試藥劑用滅菌水配制母液備用。

1.2 處理設(shè)計(jì)

在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將各供試藥劑按等比系列稀釋成5個(gè)濃度，將12%(125 g·L-1)咯菌腈懸浮劑依次稀釋為500.00、50.00、5.00、0.50、0.05 mg·L-1；50%啶酰菌胺水分散粒劑依次稀釋為200.00、50.00、12.50、3.13、0.78 mg·L-1；35%腐霉利懸浮劑依次稀釋為100.00、25.00、6.25、1.56、0.39 mg·L-1；50%嘧菌環(huán)胺水分散粒劑依次稀釋為50.00、12.50、3.13、0.78、1.95×10-1mg·L-1；70%嘧霉胺水分散粒劑依次稀釋為50.00、12.50、3.13、0.78、1.95×10-1mg·L-1；75%百菌清可濕性粉劑依次稀釋為25.00、2.50、0.25、2.50×10-2、2.50×10-3mg·L-1；255 g·L-1異菌脲懸浮劑依次稀釋為25.00、6.25、1.56、0.39、9.77×10-2mg·L-1；250 g·L-1戊唑醇水乳劑依次稀釋為25.00、2.50、0.25、2.50×10-2、2.50×10-3mg·L-1；并設(shè)清水為對(duì)照。

1.3 毒力測(cè)定

參照農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則[9]，采用菌絲生長(zhǎng)速率抑制法[10]測(cè)定。菌絲生長(zhǎng)速率抑制法是將不同濃度藥液混入融化的PDA培養(yǎng)基中(1∶10)，充分搖均勻后倒入直徑為90 mm的培養(yǎng)皿中制成不同濃度梯度的含藥培養(yǎng)基平板，以加無(wú)菌水培養(yǎng)基為空白對(duì)照(CK)，重復(fù)3次，將預(yù)先準(zhǔn)備好的菌絲生長(zhǎng)旺盛的病菌培養(yǎng)物平板，用打孔器在菌落外緣切下一菌盤(直徑為4 mm)，用接種針移植到含藥培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，并置于相同光源、25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d(空白對(duì)照快長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿時(shí))，然后用十字交叉法逐一測(cè)定菌落直徑，求出藥劑不同濃度的抑制率。

將菌絲生長(zhǎng)抑制率換成抑制幾率值并作為縱坐標(biāo)，藥劑質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)化為對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo)，根據(jù)菌絲生長(zhǎng)抑制率進(jìn)行幾率值(y)與質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)(x)之間的線性回歸關(guān)系，求毒力回歸方程，計(jì)算EC50值、95%置信限及相關(guān)系數(shù)(r)等[11-12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率

由表1可知，咯菌腈為0.05～500.00 mg·L-1時(shí)，對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率為47.5%～100.0%；啶酰菌胺在處理濃度為0.78～200.00 mg·L-1時(shí)，對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率為38.8%～74.5%；腐霉利在處理濃度為0.39～100.00 mg·L-1時(shí)，對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率為9.7%～56.8%；嘧菌環(huán)胺、嘧霉胺在處理濃度為1.95×10-1～50.00 mg·L-1時(shí)，對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率分別為9.4%～72.7%、6.7%～80.8%；百菌清、戊唑醇在處理濃度為2.50×10-3～25.00 mg·L-1時(shí)，對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率分別為3.0%～57.3%、0～93.1%；異菌脲在處理濃度為9.77×10-2～25 mg·L-1時(shí)，對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌率為7.8%～76.7%。

表1 不同濃度殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌效果

2.2 8種殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌的毒力

室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明(表2)，咯菌腈對(duì)草莓灰霉病的抑菌效果最好，EC50值為0.142 6 mg·L-1；其次是戊唑醇、啶酰菌胺、異菌脲、百菌清、嘧菌環(huán)胺，對(duì)草莓灰霉病的抑菌效果較好，EC50值分別為1.219 7、2.150 4、3.699 4、11.317 8和11.645 2 mg·L-1；腐霉利和嘧霉胺對(duì)草莓灰霉病的抑菌效果略差，EC50值分別為23.076 7和25.054 4 mg·L-1。

表2 供試藥劑對(duì)草莓灰霉病菌的毒力回歸方程及EC50的影響

3 小結(jié)與討論

化學(xué)藥劑防治灰霉病是控制灰霉病發(fā)生、減少損失的最有效途徑之一。由于草莓種植面積較小，國(guó)內(nèi)登記的農(nóng)藥品種較少，而且草莓灰霉病病原菌具有遺傳變異大、繁殖速率快和適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，連續(xù)單一使用某一種殺菌劑，極易使病原菌產(chǎn)生抗藥性及交互抗性[13-14]。因此，迫切需要篩選出新的殺菌劑防治草莓灰霉病，并避免使用已產(chǎn)生抗性或防效大幅降低的藥劑。

本研究結(jié)果表明，8種殺菌劑的毒力大小順序?yàn)榭┚?戊唑醇>啶酰菌胺>異菌脲>百菌清>嘧菌環(huán)胺>腐霉利>嘧霉胺，這與楊敬輝等[5]的啶酰菌胺毒力基本一致，也與陳宏州等[14]的啶酰菌胺毒力基本一致；但異菌脲、嘧菌環(huán)胺、嘧霉胺的毒力存在一定差異，與王睿等[6]的腐霉利、嘧菌酯的毒力存在一定差異，這可能是由于病原菌菌株之間的敏感性差異造成的，建德的草莓灰霉病菌株可能比相關(guān)報(bào)道中用到的其他菌株敏感性更低。

本研究?jī)H進(jìn)行了殺菌劑對(duì)草莓灰霉病的室內(nèi)篩選，田間藥效試驗(yàn)還有待開展，同時(shí)還需進(jìn)一步研究各類藥劑的應(yīng)用技術(shù)及殘留動(dòng)態(tài)，結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)提出科學(xué)合理的農(nóng)藥安全使用建議，對(duì)緩解草莓中農(nóng)藥登記品種少、易產(chǎn)生抗性的問(wèn)題、保障草莓質(zhì)量安全具有借鑒意義[15]。