袁水霞張佳佳馮紀(jì)年

（1河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 451450；2西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，植保資源與病蟲害治理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西楊凌 712100）

草莓（Fragaria ananassa Duch）是多年生草本植物，具有生產(chǎn)周期短、經(jīng)濟(jì)效益高、采摘期長(zhǎng)、適于設(shè)施栽培等特點(diǎn)，近年來(lái)種植面積不斷擴(kuò)大（王玉坤 等，2003）?；颐共。˙otrytis cinerea）是草莓的常見病害，主要為害葉片、果實(shí)和花蕾等，造成葉片腐爛、枯死，果實(shí)脫落等癥狀，傳播迅速，危害嚴(yán)重，一般可使草莓減產(chǎn)10%～20%，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)50%以上（王凌宇 等，2015；曹婷婷 等，2016）。灰霉病病原菌為灰葡萄孢菌，屬半知菌亞門葡萄孢菌屬，具有遺傳變異大、繁殖速率快和適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)（孟飛 等，2006），并且其侵染方式多樣化，寄主多樣化，可以利用菌絲體、分生孢子或者菌核在土壤或病殘?bào)w上越冬或越夏，這些特點(diǎn)均為灰霉病的防治帶來(lái)困難（邱莉萍 等，2018）。

由于尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)灰霉病有高抗性的草莓品種，草莓灰霉病防治主要以化學(xué)殺菌劑為主。在生產(chǎn)中常用的殺菌劑包括多菌靈、腐霉利、乙霉威、百菌清、戊唑醇和嘧菌環(huán)胺等（肖長(zhǎng)坤 等，2012；王凌宇 等，2015）?；颐共【z傳變異較大，長(zhǎng)期大量單一施用某種藥劑，極易使之產(chǎn)生抗藥性。據(jù)報(bào)道，目前灰霉病已對(duì)多菌靈產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性（朱虹 等，2006）。但是在具體的化學(xué)藥劑選用上，種植者普遍存在用藥單一的問題，使得草莓灰霉病的抗藥性不斷增強(qiáng)，制約了草莓產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

木霉菌（Trichoderma spp.）屬于半知菌亞門絲孢綱絲孢目，是一種普遍存在于土壤、植物根圍、葉圍及種子球莖表面的一種真菌（朱虹 等，2006）。1932年，Windling首 次 發(fā) 現(xiàn) 木 素 木 霉（Trichoderma lignorum）可寄生于多種植物病原真菌，并對(duì)利用木霉菌防治土傳病害開展研究，20世紀(jì)80年代以后木霉菌作為重要生物防治資源得到了廣泛關(guān)注（孟祥東 等，2003）。隨著生物技術(shù)的進(jìn)步，科學(xué)家已經(jīng)從分子和代謝水平對(duì)木霉菌的生防機(jī)制進(jìn)行了研究，而且國(guó)外已經(jīng)有商品化的木霉制劑問世，如美國(guó)的哈茨木霉T22、以色列的哈茨木霉T39等。國(guó)內(nèi)外許多研究人員發(fā)現(xiàn)木霉與灰霉病菌有著極強(qiáng)的拮抗作用，哈茨木霉對(duì)黃瓜灰霉病的防治效果可達(dá)到90%，與二甲酰亞胺類殺菌劑混合施用防治效果高達(dá)96%（Elad et al.，1992）；綠色木霉對(duì)番茄灰霉病的防治效果為74.2%（趙蕾和楊合同，1999）；采用木霉T5菌株孢子懸浮液對(duì)草莓果實(shí)和枝葉灰霉病進(jìn)行防治，防治效果在80%以上（田連生 等，2000）。但是由于生防菌本身是活體，受溫度、濕度及光照等環(huán)境因子影響較大，防治效果具有不穩(wěn)定性。

本試驗(yàn)通過測(cè)定盆栽和大田試驗(yàn)中單獨(dú)施用木霉菌、腐霉利以及二者以不同比例混合配制對(duì)草莓灰霉病的防治效果，旨在探究化學(xué)殺菌劑對(duì)生防菌防效的影響，為田間科學(xué)施用化學(xué)農(nóng)藥和生防菌制劑提供科學(xué)依據(jù)，以期延緩化學(xué)殺菌劑的抗藥性產(chǎn)生，提高木霉防治效果的穩(wěn)定性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試草莓品種為紅顏，由鄭州市中牟縣官渡鎮(zhèn)十里鋪草莓種植基地提供。供試藥劑為50%腐霉利可濕性粉劑（速克靈，日本住友化學(xué)株式會(huì)社），木霉菌可濕性粉劑（含孢子2億個(gè)·g-1，山東泰諾藥業(yè)有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 盆栽防效測(cè)定 2016年10月12日在河南省農(nóng)業(yè)高新科技園區(qū)溫室內(nèi)進(jìn)行盆栽試驗(yàn)。將配制好的基質(zhì)（草炭∶蛭石=1 V∶1 V）放入直徑為20 cm的營(yíng)養(yǎng)缽中，選取生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)一致的3片真葉草莓幼苗，每盆定植1株。待幼苗緩苗生長(zhǎng)出2片新葉后進(jìn)行藥劑試驗(yàn)。試驗(yàn)共設(shè)6個(gè)處理，各藥劑配比如表1所示，采用1 000倍稀釋液噴霧施藥法，將藥劑均勻噴灑于草莓葉片上。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5株草莓幼苗，每株噴灑藥液1 mL，以清水作為對(duì)照。待藥劑自然晾干后采用孢子液噴霧法接種，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)配灰霉病菌孢子懸浮液，濃度為1×106個(gè)·mL-1，用微量接菌器均勻噴灑于葉表面，每株噴1 mL。草莓幼苗接種后放入溫室常規(guī)管理，待對(duì)照幼苗發(fā)病后開始調(diào)查各處理葉片灰霉病發(fā)病情況。

表1 殺菌劑與生防菌的配比及施用劑量

1.2.2 田間防效測(cè)定 2017年3月10日在中牟縣官渡鎮(zhèn)十里鋪村進(jìn)行田間試驗(yàn)。草莓種植密度約為7 200株·（667 m2）-1，土壤為砂壤土，有機(jī)質(zhì)含量中等。6種藥劑的施用劑量及稀釋倍數(shù)和盆栽試驗(yàn)相同，以清水為對(duì)照，每個(gè)處理小區(qū)面積為4 m2，各小區(qū)草莓植株長(zhǎng)勢(shì)基本一致，隨機(jī)區(qū)組排列，3次重復(fù)。選擇灰霉病自然發(fā)病的結(jié)果期草莓進(jìn)行試驗(yàn)，于發(fā)病中期進(jìn)行第1次施藥，采用手動(dòng)噴霧器對(duì)葉片及植株均勻噴霧施藥，每個(gè)處理噴施藥液3 L，連續(xù)噴灑2次，每次間隔7 d。在第2次噴藥7 d后調(diào)查葉片和果實(shí)的灰霉病發(fā)病情況。

1.2.3 調(diào)查與統(tǒng)計(jì)方法 葉片病情調(diào)查：采用對(duì)角線5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)調(diào)查3株，每株調(diào)查全部葉片；病果率調(diào)查：每個(gè)小區(qū)隨機(jī)調(diào)查50個(gè)果實(shí)。調(diào)查各處理區(qū)草莓葉片是否有藥斑以及發(fā)黃、植物矮化等藥害現(xiàn)象。

盆栽試驗(yàn)及田間試驗(yàn)葉片病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，葉片無(wú)病斑；1級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；3級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的6%～15%；5級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的16%～25%；7級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的26%～50%；9級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的51%以上。按照如下公式計(jì)算病情指數(shù)及防效。

其中CK0為空白對(duì)照區(qū)施藥前病情指數(shù)；CK1為空白對(duì)照區(qū)施藥后病情指數(shù)；PT0為藥劑處理區(qū)施藥前病情指數(shù)；PT1為藥劑處理區(qū)施藥后病情指數(shù)。

觀察各處理對(duì)草莓葉片和果實(shí)有無(wú)藥害作用。藥害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：-，無(wú)藥害；+，輕度藥害，不影響作物正常生長(zhǎng)；++，明顯藥害，可復(fù)原，不會(huì)造成作物減產(chǎn)；+++，高度藥害，影響作物正常生長(zhǎng)，對(duì)作物產(chǎn)量和品質(zhì)都造成一定損失；++++，嚴(yán)重藥害，作物生長(zhǎng)受阻，產(chǎn)量和質(zhì)量損失嚴(yán)重（農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生測(cè)室，2004）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft excel 2003軟件整理數(shù)據(jù)，并用SPSS 17.0軟件進(jìn)行防效差異分析，采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，按照P≤0.05標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)草莓灰霉病的盆栽防治效果

由表2可知，盆栽試驗(yàn)中，經(jīng)噴霧法微量接種病原菌孢子之后，所有處理均發(fā)病，各藥劑處理的草莓葉片病情指數(shù)遠(yuǎn)低于清水對(duì)照。6個(gè)處理對(duì)草莓灰霉病的盆栽防治效果有所差異。單獨(dú)施用腐霉利（T6處理）的防治效果最低，為64.13%，施用腐霉利和木霉菌混合藥劑的防治效果均有所提高，其中木霉菌與腐霉利以8∶1的質(zhì)量比混配時(shí)（T2處理）防治效果最高，達(dá)88.32%，其次為單獨(dú)施用木霉菌（T1處理），防效為81.40%。

表2 不同處理對(duì)草莓灰霉病的盆栽防治效果

2.2 不同處理對(duì)草莓灰霉病的田間防治效果

由表3可知，T2處理對(duì)草莓葉片灰霉病的田間防治效果最好，高達(dá)87.30%，顯著高于其他處理；其次為T3和T1處理，防治效果分別為79.91%和79.67%。單獨(dú)施用腐霉利（T6處理）的防治效果最低，顯著低于T1、T2、T3處理。

由表4可知，6個(gè)處理對(duì)草莓灰霉病病果的防治效果在65%～85%之間，防治效果較高的為T2和T3處理，分別為83.87%和82.18%，顯著高于其他處理，防治效果最低的為T6處理，僅為67.30%。

與噴施清水的對(duì)照相比，6個(gè)處理的草莓葉片、果實(shí)未出現(xiàn)藥斑以及發(fā)黃的癥狀，植株未出現(xiàn)矮化等藥害癥狀（表3、4）。因此本試驗(yàn)設(shè)置的殺菌劑濃度對(duì)草莓安全，無(wú)藥害作用。

表3 不同處理對(duì)草莓葉片灰霉病的田間防治效果

表4 不同處理對(duì)草莓果實(shí)灰霉病的田間防治效果

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，6個(gè)處理在盆栽試驗(yàn)或大田應(yīng)用中，均能有效防止草莓灰霉病在葉片及果實(shí)上的發(fā)展，并且對(duì)草莓生長(zhǎng)無(wú)藥害作用。單獨(dú)施用木霉菌的盆栽防效為81.40%，田間防效在80%左右，當(dāng)木霉菌與腐霉利以質(zhì)量比8∶1或3∶1混配時(shí)，田間對(duì)灰霉病的防治效果有所提高，其中木霉菌與腐霉利以8∶1混配時(shí)對(duì)葉片灰霉病的防治效果可達(dá)87.30%。二者以其他比例混配時(shí)，相比于單獨(dú)施用木霉菌的防效有所下降，但仍高于單獨(dú)施用腐霉利。故在生產(chǎn)中以8∶1的質(zhì)量比混合施用木霉菌與腐霉利這兩種藥劑，可以提高生防菌防效的穩(wěn)定性，同時(shí)延緩因單獨(dú)施用化學(xué)殺菌劑而使病原菌產(chǎn)生的抗藥性。

由于灰霉病極易對(duì)化學(xué)藥劑產(chǎn)生抗藥性，國(guó)內(nèi)外許多科學(xué)家將目光轉(zhuǎn)向自然界中有益微生物及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)自然界中多種真菌（如木霉和酵母菌）、細(xì)菌（如芽孢桿菌、假單胞菌）和鏈霉菌及其產(chǎn)物（白肽霉素、變構(gòu)霉素以及魚時(shí)霉素等）對(duì)草莓灰霉病有較好的防治效果（童蘊(yùn)慧 等，2003）。一些生防制劑如芽孢桿菌、木霉菌、丁香假單胞菌、嗜油酵母菌等（田連生 等，2000；王凌宇 等，2015；楚文琢 等，2017），已經(jīng)在生產(chǎn)中推廣和應(yīng)用。本試驗(yàn)中所選用的木霉菌對(duì)灰葡萄孢菌具有一定的拮抗作用和重寄生作用：由于木霉菌菌絲在灰葡萄孢菌菌絲上重寄生，營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)，致使灰葡萄孢菌菌絲失活，并逐漸停止生長(zhǎng)，最終徹底解體、死亡（田連生 等，2000）。由于生防菌的防效受環(huán)境影響較大，本試驗(yàn)將木霉菌與腐霉利以不同比例混合施用，對(duì)果實(shí)灰霉病的防治效果在65%～85%之間，均高于單獨(dú)施用腐霉利的防效；當(dāng)木霉菌與腐霉利以質(zhì)量比8∶1和3∶1混配時(shí)，防治效果在80%以上，高于單獨(dú)施用木霉菌的防效。可見以一定比例添加化學(xué)藥劑腐霉利，可以提高木霉菌的防治效果，為今后生防菌和化學(xué)藥劑的混配提供了科學(xué)依據(jù)。

目前，用于草莓灰霉病化學(xué)防治的殺菌劑按照其化學(xué)結(jié)構(gòu)主要有二甲酰亞胺類、苯并咪唑類、N-苯基氨基甲酸酯類、吡啶酰胺類、苯氨基嘧啶類、取代苯類、咪唑類和吡咯類殺菌劑等（肖長(zhǎng)坤 等，2012；王凌宇 等，2015）。其中腐霉利為二甲酰亞胺類殺菌劑，是一種廣譜性殺菌劑，于20世紀(jì)70年代問世，直至今日已有30 a以上的用藥歷史，其殺菌機(jī)制主要是自由基介導(dǎo)的細(xì)胞毒假說(shuō)，通過抑制孢子的萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)來(lái)防治病原菌（祝明亮等，2006）。本試驗(yàn)中，單獨(dú)施用腐霉利對(duì)灰霉病的田間防治效果在60%～70%之間，相比于其他處理防效較低，可能是因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間連續(xù)施用，致使灰霉病病原菌對(duì)該藥劑有一定的抗性。木霉菌與腐霉利二者混合施用的防治效果高于單獨(dú)施用腐霉利，防治灰霉病作用機(jī)制的不同，可能是防治效果提高的重要原因，對(duì)于這兩種藥劑混配的防治效果持效性和速效性還需進(jìn)一步研究。