李 雯 韓 莉

（新疆巴音郭楞蒙古自治州人民醫(yī)院病理科，新疆 庫(kù)爾勒 841000）

胸腔積液，屬于臨床常見(jiàn)癥狀，臨床多采取查找脫落癌細(xì)胞方式，明確腫瘤性病變的性質(zhì)、腫瘤性質(zhì)[1]。常規(guī)離心涂片處理，缺少組織形態(tài)的結(jié)構(gòu)，所以容易和轉(zhuǎn)移性腺癌弄混，進(jìn)而對(duì)診斷結(jié)果構(gòu)成直接影響。為此，本次研究，探究細(xì)胞塊聯(lián)合免疫組化技術(shù)診斷、單純免疫組化技術(shù)診斷的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料：按照診斷方法，將三級(jí)甲等醫(yī)院病理科2012年3月至2017年10月收治的236例胸腔積液患者，分成觀察組、對(duì)照組，分別為126例、110例，兩組患者均經(jīng)影像學(xué)檢查[2]。觀察組中包括男性78例，女性48例；最小年齡、最大年齡分別為32歲、86歲，平均年齡為（59.4±5.5）歲。對(duì)照組包括男性75例，女性35例；最小年齡、最大年齡分別為34歲、82歲，平均年齡為（58.9±5.3）歲。兩組臨床一般資料比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。

1.2 方法：兩組均接受常規(guī)離心涂片法處理，取患者胸腔積液標(biāo)本10 mL，放置在錐形試管中，置于離心設(shè)備每分鐘2000 r，離心時(shí)間為6 min。然后，倒上清液，將沉淀物涂片取出。

1.2.1 對(duì)照組診斷方法：采用免疫組化技術(shù)，通過(guò)免疫組化染色SP法，選擇CK7、TTF-1、CEA等抗體，操作時(shí)嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。

1.2.2 觀察組診斷方法：采用免疫組化技術(shù)聯(lián)合制備細(xì)胞塊。細(xì)胞塊制備方法為脫落細(xì)胞石蠟包埋法，具體步驟如下：選取胸腔積液標(biāo)本50 mL，置于錐形試管中，2000 r/min，6 min離心，取沉淀物質(zhì)，離心兩次，沉淀物為凝集塊情況，采取濾紙將10%的重型福爾馬林包裹并固定處理。也可添加1%的融化瓊脂，混合、離心，取沉淀。然后，將固定物實(shí)行包裹及固定處理。固定時(shí)間為5 h，和活檢標(biāo)本脫水、包埋，形成細(xì)胞塊后切片處理。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 觀察兩組HE染色形態(tài)學(xué)、診斷效果、免疫表型情況。

1.3.2 經(jīng)離心涂片、細(xì)胞塊HE切片和免疫組化切片，經(jīng)兩名醫(yī)師評(píng)判，以確保診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。免疫組化標(biāo)記CK7、Ecadherin、CEA細(xì)胞膜顯示為著棕黃色粒狀、TTF-1細(xì)胞核著棕黃色顆粒、Calretinin細(xì)胞核陰性，即可判定為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：研究數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS13.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）代表，組間率（%）比較經(jīng)χ2檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)對(duì)比為P＜0.05差異時(shí)，表示組間對(duì)比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HE染色形態(tài)學(xué)分析：細(xì)胞塊鏡下，能觀察到腺癌細(xì)胞異型比較明顯，核質(zhì)比增大、核膜清晰。同時(shí)，可清晰的觀察到核分裂情況，通過(guò)腺管樣排列、乳頭狀排列、小梁狀排列。反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞核為圓形，多處于中心位置，常見(jiàn)多核、雙核。

2.2 兩組診斷效果的對(duì)比：觀察組和對(duì)照組的診斷情況實(shí)行對(duì)比，存在顯著差異，P＜0.05，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者診斷結(jié)果的對(duì)比[n（%）]

2.3 免疫表型分析：236例患者中，腺癌細(xì)胞陽(yáng)性率為70.34%（166/236），166例診斷腺癌細(xì)胞陽(yáng)性患者中，肺腺癌細(xì)胞CK7陽(yáng)性率、TTF-1陽(yáng)性率、E-cadherin陽(yáng)性率、CEA陽(yáng)性率、Calretinin陽(yáng)性率各占100%（166/166）、80.72%（134/166）、95.78%（159/166）、94.58%（157/166）、0。反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞陽(yáng)性率29.66%（70/236），70例診斷為反應(yīng)性增生皮細(xì)胞陽(yáng)性者中，間皮細(xì)胞CK7陽(yáng)性率、TTF-1陽(yáng)性率、E-cadherin陽(yáng)性率、CEA陽(yáng)性率、Calretinin陽(yáng)性率各占5.71%（4/70）、0、0、10%（7/70）、87.14%（61/70）。肺腺癌細(xì)胞中CK7、TTF-1、E-cadherin、CEA均為高表達(dá)狀態(tài)。反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞中，Calretinin顯示為高表達(dá)狀態(tài)。見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 放大倍數(shù)：20×10 E-cadherin

圖2 放大倍數(shù)：20×10 TTF-1

3 討 論

胸腔積液中惡性腫瘤最為多見(jiàn)，主要包括轉(zhuǎn)移性癌、淋巴瘤和惡性間皮瘤等[3]。轉(zhuǎn)移性癌，主要以乳腺癌、肺癌、腸癌等常見(jiàn)。查找胸腔積液中的癌細(xì)胞，對(duì)腫瘤防治、預(yù)后有著重要的臨床價(jià)值。臨床方面多采取體液細(xì)胞學(xué)中離心涂片方法處理，這種處理方式容易產(chǎn)生收集細(xì)胞少和假陰性情況。蛋白質(zhì)多聚集在細(xì)胞的四周，進(jìn)而會(huì)直接對(duì)免疫組化試劑進(jìn)到細(xì)胞的效果構(gòu)成不良影響，無(wú)法滿足臨床實(shí)際需求[4-5]。細(xì)胞塊技術(shù)的主要原理為離心操作，可將細(xì)胞濃縮后形成沉淀物。然后，實(shí)行固定、脫水、包埋和切片、染色等處理。細(xì)胞塊能連續(xù)切片，保存時(shí)間較長(zhǎng)，所以比較利于觀察，可提高漿膜腔積液診斷率。免疫組化技術(shù)，主要利用免疫學(xué)抗原抗體特異度結(jié)合原理，經(jīng)化學(xué)反應(yīng)對(duì)抗體顯色劑顯色，從而能明確組織內(nèi)抗原的情況。免疫組化技術(shù)，對(duì)于漿膜腔積液轉(zhuǎn)移性癌、增生間皮細(xì)胞進(jìn)行診斷，可達(dá)到較好的診斷效果[6]。細(xì)胞塊診斷的過(guò)程中，通過(guò)免疫組化標(biāo)記，以確保細(xì)胞檢查結(jié)果的準(zhǔn)確度。其中CK7為相對(duì)分子質(zhì)量細(xì)胞角蛋白，一般多在上皮、尿路上皮細(xì)胞標(biāo)記中應(yīng)用。TTF-1，屬于核轉(zhuǎn)錄蛋白NKx2，可對(duì)肺部、甲狀腺上皮細(xì)胞、胚胎大腦區(qū)域表達(dá)。相關(guān)研究人員認(rèn)為，TTF-1于肺腺癌敏感度、特異度均比較高，將其作為肺腺癌特異度的標(biāo)志，便于判定轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞、間皮源性細(xì)胞。E-cadherin，為相對(duì)分子鈣黏附蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞間黏附效果較佳，通過(guò)在機(jī)體上皮組織表達(dá)，降低腫瘤細(xì)胞間黏附性，一般多在腫瘤浸潤(rùn)診斷中應(yīng)用。CEA為胚胎性癌抗原，多出現(xiàn)在胎兒消化道上皮組織、胰腺、肝臟位置，為上皮性腫瘤的標(biāo)志。Calretinin常處于神經(jīng)組織，可對(duì)間皮瘤、反應(yīng)性間皮細(xì)胞進(jìn)行診斷。總而言之，細(xì)胞塊聯(lián)合免疫組化技術(shù)，能夠有效鑒別并解決胸腔積液，具有重要的臨床價(jià)值。