杜彩蓮 張燦 袁芳 李佳穎 孫廷飛 樂揚(yáng) Shaukat Ali

摘要：【目的】分析不同溫度、pH及培養(yǎng)基對長毛擬青霉[Paecilomyces penicillatus（H?hn）]菌株SP053生長特性的影響，為SP053菌株的大規(guī)模發(fā)酵及微生物農(nóng)藥的研制與開發(fā)提供理論依據(jù)。【方法】以SP053菌株為試驗(yàn)材料，采用常規(guī)的固體培養(yǎng)方法，分別測試該菌株在6個溫度梯度（17、20、23、26、29和32 ℃）、5個pH（5、6、7、8和9）和3種不同培養(yǎng)基[馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、薩氏培養(yǎng)基（SDAY）和察氏瓊脂培養(yǎng)基（Czapek）]等培養(yǎng)條件下的孢子萌發(fā)率、菌落生長速率和產(chǎn)孢量。【結(jié)果】溫度、pH和培養(yǎng)基類型對SP053菌株的生長特性具有明顯影響。高溫（32 ℃）和低溫（17 ℃）均不利于SP053菌株生長，23～29 ℃為該菌株的最適生長溫區(qū)，在26 ℃下的孢子萌發(fā)率（94.50%）、菌落直徑（47.5 mm）和產(chǎn)孢量（4.450×109個孢子/皿）均最高。在26 ℃下，SP053菌株在PDA和Czapek培養(yǎng)基上生長較快、產(chǎn)孢量較多，培養(yǎng)15 d的菌落直徑分別為47.7和46.3 mm，產(chǎn)孢量分別為5.357×109和2.570×109個孢子/皿。pH在7～8時SP053菌株的生長、萌發(fā)和產(chǎn)孢效果最佳?！窘Y(jié)論】SP053菌株在26 ℃下、pH為7～8的PDA培養(yǎng)基上的生長和產(chǎn)孢效果最佳。

關(guān)鍵詞： 長毛擬青霉;SP053菌株;溫度;pH;培養(yǎng)基;生長

中圖分類號： S476.12? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2018）12-2447-07

Effects of temperature， pH and culture media on growth and sporulation of Paecilomyces penicillatus strain SP053

DU Cai-lian1， ZHANG Can1， YUAN Fang2， LI Jia-ying2 ， SUN Ting-fei1，

YUE Yang1， Shaukat Ali1*

（1College of Agriculture， South China Agricultural University/Key Laboratory of Bio-pesticide Innovation and Application/Guangdong Engineering Technology Research Center of Pest Biocontrol， Guangzhou? 510642， China;

2Yongzhou Branch， Hunan Tobacco Corporation， Yongzhou， Hunan? 425000）

Abstract：【Objective】The effects of temperature， pH and culture medium on the growth characteristics of Paecilomyces penicillatus strain SP053 were examined in order to provide theoretical basis for the large-scale fermentation of microorganisms and the development of microbial pesticides. 【Method】SP053 strains were used as materials. Using common plate culture technical procedure， effects of six different temperatures（17，20，23，26，29 and 32 ℃） ， five pH levels（5，6，7，8 and 9） and three different culture media including potato dextrose agar（PDA）， SDAY， Czapek dox agar（Czapek） on the spore germination rate， colony expansion and sporulation of? SP053 were observed. 【Result】Temperature， pH and medium type had obvious influence on the growth characteristics of SP053 strain. The results showed that high temperature（32 ℃） and low temperature（17 ℃） were detrimental to the growth of SP053 strain. The optimal growth temperature ranged between 23 °C to 29 ℃ and the spore germination rate（94.50%）， colony diameter（47.5 mm） and spore production amount（4.450×109 spore/dish） were the maximum at 26 ℃. At 26 ℃， SP053 strain grew fast and produced a large amount of spores on PDA and Czapek media. On PDA and Czapek media， the colony diameters were 47.7 and 46.3 mm respectively while the spores yield were 5.357×109 and 2.570×109 spore/dish. The optimum pH for strain growth， germination and spore production ranged between 7 and 8. 【Conclusion】SP053 strain has the best growth and sporulation effect on PDA medium at 26 ℃ and pH 7-8.

Key words： Paecilomyces penicillatus; SP053 strain; temperature; pH;culture medium; growth

0 引言

【研究意義】在當(dāng)前的農(nóng)作物害蟲防治中主要依賴化學(xué)農(nóng)藥（張洋，2018），但化學(xué)農(nóng)藥的頻繁使用易導(dǎo)致害蟲抗藥性增強(qiáng)、生態(tài)環(huán)境污染和食品安全等系列問題。生物防治因具有對人畜、農(nóng)作物及天敵安全，環(huán)境友好且不易引發(fā)害蟲抗藥性等特點(diǎn)（辛海云，2018）受到社會各界的廣泛關(guān)注和推廣。在害蟲生物防治中，“以蟲治蟲，以菌治蟲”的防治措施得到重視（張艷莉等，2013），其中蟲生真菌對多種農(nóng)林重要害蟲具有很好的防治效果（王利軍等，2010;李月等，2017），如應(yīng)用蟲生真菌淡紫擬青霉（Peacilomyces lilacinus）防治小麥禾谷包囊線蟲（Heterodera avenae）（張春龍等，2014）;利用球孢白僵菌（Beauveria bassiana）防治柑橘木虱（Diaphorina citri）、西花薊馬（Frankliniella occidentalis）、松墨天牛（Monochamus alternatus）幼蟲等（張璐璐等，2015;宋曉兵等，2016）;利用金龜子綠僵菌（Metarhizium anisopliae）防治螳螂和白蟻（St Leger and Wang，2010）。擬青霉屬真菌是害蟲生物防治中重要的蟲生真菌（陳文華等，2018），其中長毛擬青霉[Paecilomyces penicillatus（H?hn）]是自然界中廣泛分布的一種蟲生真菌（陳宇熹等，2016），隸屬于半知菌亞門（Deuteromycotina）絲孢綱（Hyphomycetes）絲孢目（Hyphomycetales）叢梗孢科（Moniliaceae）擬青霉屬（Peacilomyces Bainier），具有殺蟲譜廣、致病力及適應(yīng)性強(qiáng)、易于培養(yǎng)、孢子豐富、容易擴(kuò)散等特點(diǎn)，在小菜蛾（Plutella xylostella）和煙粉虱（Bemisia tabaci）等害蟲的生物防治中起著重要作用（蔡淑佳，2009），而對長毛擬青霉菌株培養(yǎng)條件的研究是應(yīng)用該菌進(jìn)行害蟲防治的前提。【前人研究進(jìn)展】真菌的生長和繁殖不僅取決于菌株本身的特性，還需要一定的環(huán)境條件和營養(yǎng)物質(zhì)支持，溫度、濕度、光照、pH、培養(yǎng)基等均對菌株生長起關(guān)鍵性作用（Hong et al.，2000;Sun et al.，2003;肖順等，2008;彭鑫等，2016）。目前，有關(guān)擬青霉屬部分真菌的培養(yǎng)條件已有一些報道。陳劍翔（2013）通過正交試驗(yàn)對細(xì)腳擬青霉的液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行篩選、優(yōu)化，確定了以4%葡萄糖、2%蠶蛹粉、0.15% KH2PO4和0.15% MgSO4為成分的培養(yǎng)基為最佳培養(yǎng)基，最適宜的培養(yǎng)條件為溫度25 ℃、pH 6.5。汪軍等（2013）利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化淡紫擬青霉（P. lilacinus）的固體發(fā)酵培養(yǎng)基，結(jié)果表明以玉米粉+甘蔗渣+麩皮+殼聚糖組成的配方為最佳復(fù)合培養(yǎng)基質(zhì)，可產(chǎn)生大量分生孢子，且用量少、成本低。吳丹丹等（2015）以產(chǎn)孢量為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)加入不同濃度的碳源、氮源，篩選出最優(yōu)的玫煙色擬青霉（P. fumosoroseus）固體培養(yǎng)基配方為玉米粉培養(yǎng)基+0.2% KNO3+0.1%葡萄糖+水（1∶15=物料∶水質(zhì)量比），最佳的培養(yǎng)條件為溫度28 ℃、光照黑暗交替培養(yǎng)14 h∶10 h。張命龍等（2015）利用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化蝙蝠蛾擬青霉（P. hepialid）PH-2菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件以獲取高質(zhì)量的菌絲體和腺苷，其最佳配方為玉米淀粉40 g/L、葡萄糖5 g/L、玉米漿25 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、磷酸二氫鉀1 g/L、硫酸鋅1.5 g/L，培養(yǎng)條件為溫度26 ℃，pH 6.0。【本研究切入點(diǎn)】目前鮮見有關(guān)長毛擬青霉最佳培養(yǎng)條件優(yōu)化的文獻(xiàn)報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用傳統(tǒng)的對照試驗(yàn)方法，以具有高毒力的長毛擬青霉菌株SP053為研究對象，觀察在不同溫度、pH和不同組分的培養(yǎng)基下該菌株的生長和繁殖特性，以期獲得SP053菌株適合的培養(yǎng)條件，為其后期大量發(fā)酵和微生物農(nóng)藥的研制及開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試菌株：長毛擬青霉菌株SP053從貴州省赫章縣城郊區(qū)的土壤中分離獲得，保存于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物農(nóng)藥創(chuàng)制與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）（去皮馬鈴薯200 g，切成小塊，加水1 L煮沸20 min，紗布過濾;加葡萄糖20 g，瓊脂12～20 g，再加熱使之溶化，最后定容至1 L）;薩氏培養(yǎng)基（SDAY）（蛋白胨10 g，葡萄糖40 g，酵母粉10 g，瓊脂12～20 g，蒸餾水1 L）;察氏瓊脂培養(yǎng)基（Czapek）（NaNO3 3 g，K2HPO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g，蔗糖30 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 L）。

用NaOH和HCl調(diào)PDA培養(yǎng)基的pH。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 溫度對SP053菌株生長和繁殖的影響

1. 2. 1. 1 溫度對孢子萌發(fā)的影響 將培養(yǎng)好的SP053菌株配制成1.0×107個孢子/mL的懸浮液，裝于滅菌的10 mL離心管中，分別置于17、20、23、26、29和32 ℃的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察并記錄孢子萌發(fā)情況，以芽管長度超過孢子直徑一半作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。每個溫度梯度設(shè)置3次重復(fù)。

1. 2. 1. 2 溫度對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響 配制PDA培養(yǎng)基，滅菌后倒入直徑9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，每皿15 mL，冷卻，制成平板待用。將培養(yǎng)好的SP053菌株配制成1.0×104個孢子/mL的懸浮液，用移液槍吸取2 μL懸浮液滴于平板中央，靜置一段時間后用封口膜封住培養(yǎng)皿邊緣，分別置于17、20、23、26、29和32 ℃人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)觀察，光照條件為12 L∶12 D。每處理重復(fù)3次。每3 d檢查并記錄菌落生長直徑1次，共觀察15 d。

待測完最后一次菌落直徑后，用100 mL 0.05% Tween-80收集孢子，計(jì)算產(chǎn)孢量。

1. 2. 2 培養(yǎng)基對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響 配制PDA、SDAY和Czapek 3種培養(yǎng)基，滅菌后分別倒入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，每皿15 mL，冷卻，制成平板待用。將培養(yǎng)好的SP053菌株配制成1.0×104個孢子/mL的懸浮液，用移液槍吸取2 μL懸浮液滴于平板中央，靜置一段時間后用封口膜封住培養(yǎng)皿邊緣， 置于26 ℃人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)。每處理重復(fù)3次。每3 d檢查并記錄菌落生長直徑1次，共觀察15 d。

待測完最后一次菌落直徑后，用100 mL 0.05% Tween-80收集孢子，計(jì)算產(chǎn)孢量。

1. 2. 3 pH對SP053菌株生長和繁殖的影響

1. 2. 3. 1 pH對孢子萌發(fā)的影響 將PDA培養(yǎng)基的pH調(diào)至5、6、7、8和9，分裝于10 mL離心管中。將培養(yǎng)好的SP053菌株配制成1.0×107個孢子/mL的懸浮液，裝于滅菌的10 mL離心管中，置于26 ℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察并記錄孢子萌發(fā)情況，以芽管長度超過孢子直徑一半作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。每處理重復(fù)3次。

1. 2. 3. 2 pH對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響 將PDA培養(yǎng)基的pH調(diào)至5、6、7、8和9，滅菌后倒入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，每皿15 mL，冷卻，制成平板待用。將培養(yǎng)好的SP053菌株配制成1.0×104個孢子/mL的懸浮液，用移液槍吸取2 μL懸浮液滴于平板中央，靜置一段時間后用封口膜封住培養(yǎng)皿邊緣，置于26 ℃人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)。每處理重復(fù)3次。每3 d檢查并記錄菌落生長直徑1次，共觀察15 d。

待測完最后一次菌落直徑后，用100 mL 0.05% Tween-80收集孢子，計(jì)算產(chǎn)孢量。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

利用SAS 9.0對菌落擴(kuò)展量進(jìn)行多重比較（Tukeys），運(yùn)用Excel 2010對孢子萌發(fā)率和產(chǎn)孢量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 溫度對SP053菌株生長和繁殖的影響

2. 1. 1 溫度對孢子萌發(fā)的影響 不同溫度下SP053菌株分生孢子萌發(fā)率如圖1所示。結(jié)果表明，溫度對SP053菌株的分生孢子萌發(fā)率具有顯著影響（P<0.05，下同），其中，26 ℃下SP053菌株的孢子萌發(fā)率最高，為94.50%，顯著高于其他溫度處理;其次為29和23 ℃，孢子萌發(fā)率分別為71.53%和69.12%，二者間無顯著差異（P>0.05，下同）;17和32 ℃下的萌發(fā)率最低，僅為13.48%和8.16%。表明溫度過高或過低均不利于SP053菌株分生孢子萌發(fā)，23～29 ℃為該菌株的最適生長溫區(qū)，且26 ℃時分生孢子的萌發(fā)率最高。

2. 1. 2 溫度對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響 由表1可知，不同溫度條件下SP053菌株的菌落生長量存在明顯差異。在17、20、23、26、29和32 ℃下該菌株均能正常生長，且在17～26 ℃下的菌落生長量隨溫度的升高而增加，當(dāng)溫度繼續(xù)升高時菌落生長量開始減緩。具體而言，該菌株在26 ℃下的菌落生長量增加最快，培養(yǎng)15 d時菌落直徑達(dá)47.5 mm，且與其他溫度處理達(dá)顯著差異水平;其次為29和23 ℃下，培養(yǎng)15 d時菌落直徑分別為42.1和40.1 mm，二者間無顯著差異;在17 ℃下菌落生長最慢，培養(yǎng)15 d時菌落直徑僅為25.9 mm。表明23～29 ℃最適宜SP053菌株生長，且在26 ℃下菌株生長量增加最快。

由圖2可知，在17～32 ℃下SP053菌株均能產(chǎn)孢，其中，在26 ℃下其產(chǎn)孢量最高，為4.450×109個孢子/皿，且與其他溫度處理達(dá)顯著差異水平;其次為29 ℃，產(chǎn)孢量為2.082×109個孢子/皿;當(dāng)溫度達(dá)32 ℃時產(chǎn)孢量極速下降，僅為0.508×109個孢子/皿，幾乎為最高產(chǎn)孢量的1/560，同時菌體和孢子較其他溫度更易老化。表明26 ℃為SP053菌株的最佳產(chǎn)孢溫度。

2. 2 培養(yǎng)基對SP053菌株生長和繁殖的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表2和圖3）表明，SP053菌株在PDA、SDAY和Czapek培養(yǎng)基上均能正常生長，其中，SP053菌株在PDA和Czapek培養(yǎng)基上生長較快，培養(yǎng)15 d的菌落直徑分別為47.7和46.3 mm，二者差異不顯著;在SDAY培養(yǎng)基上生長最慢，第3 d仍未見生長，第15 d的菌落直徑為39.7 mm，顯著小于在PDA和Czapek培養(yǎng)基上的菌落生長直徑。表明PDA和Czapek培養(yǎng)基較SDAY培養(yǎng)基更適宜SP053菌株生長。

由圖4可看出，SP053菌株在3種培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量存在顯著差異，其中在PDA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量顯著高于其他2種培養(yǎng)基，達(dá)5.357×109個孢子/皿;其次為Czapek培養(yǎng)基，產(chǎn)孢量為2.570×109個孢子/皿;在SDAY培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量最小，僅為0.464×109個孢子/皿。因此，PDA培養(yǎng)基是最適宜SP053菌株產(chǎn)孢的培養(yǎng)基。

綜上所述，最適合SP053菌株生長和產(chǎn)孢的培養(yǎng)基是PDA培養(yǎng)基，其主要的碳源為葡萄糖。

2. 3 pH對SP053菌株生長和繁殖的影響

2. 3. 1 pH對SP053菌株孢子萌發(fā)的影響 由圖5可知，SP053菌株的孢子在pH為5、6、7、8和9時均能萌發(fā)，且各處理間孢子萌發(fā)率達(dá)顯著差異水平，其中，pH 8時孢子萌發(fā)率最高，為97.72%，其次是pH 7時，孢子萌發(fā)率為89.57%;pH 5時孢子萌發(fā)率最低，為51.72%。

2. 3. 2 pH對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響 由表3可知，SP053菌株在不同酸堿度培養(yǎng)基上的生長存在差異，其中在pH為7和8時生長最好，菌落直徑最大，培養(yǎng)第15 d時的菌落直徑分別為46.77和48.21 mm;培養(yǎng)基過酸或過堿導(dǎo)致菌株生長弱，菌落直徑小，pH為5和9時，培養(yǎng)第15 d時的菌落直徑分別為27.80和34.670 mm。

由圖6可知，SP053菌株在不同酸堿度培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量存在差異顯著，當(dāng)pH為8時產(chǎn)孢量最高，為3.97×109個孢子/皿，其次是pH 7時，產(chǎn)孢量為3.57×109個孢子/皿，pH為5時產(chǎn)孢量最低，為0.84×109個孢子/皿。因此，pH 8最適合SP053菌株產(chǎn)孢。

3 討論

前人研究表明，擬青霉屬不同種、不同菌株的最適生長溫度和營養(yǎng)條件有所不同。如玫煙色擬青霉孢子的最適宜萌發(fā)溫度為20～28 ℃（張仙紅等，2007），環(huán)鏈擬青霉（P. cateniannulatus）菌絲生長的最適溫度為20～23 ℃，比大多數(shù)擬青霉低（朱新燕等，2008），而本研究中長毛擬青霉菌株SP053的最適宜生長溫度為26 ℃。

張未仲等（2007）發(fā)現(xiàn)玫煙色擬青霉在培養(yǎng)基初始pH為6～7時菌落直徑最大，產(chǎn)孢量最高;王瑞等（2008）研究表明，少孢節(jié)叢孢菌菌絲生長最適宜的固體培養(yǎng)基初始pH為7～8，以pH 7.5時菌絲的生長率最大;Dias等（2008）研究發(fā)現(xiàn)pH 8最適合白僵菌生長;張命龍等（2015）研究表明，擬青霉屬的蝙蝠蛾擬青霉菌絲生長最適培養(yǎng)基初始pH為6。而本研究對象SP053菌株菌絲生長的最適培養(yǎng)基初始pH為7～8，表明不同真菌菌株最適宜的培養(yǎng)基初始pH不同，因而有必要對不同真菌菌株的最適宜培養(yǎng)基初始pH進(jìn)行探究。

對真菌生長所用培養(yǎng)基的研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)鏈擬青霉和爪哇擬青霉（P. javanicus）在PDA培養(yǎng)基上生長最佳且產(chǎn)孢最多（秦涵淳等，2008;朱新燕等，2008），與SP053菌株最適宜培養(yǎng)基相一致;玫煙色擬青霉則最適宜在SDAY培養(yǎng)基上生長（張未仲等，2007）。在科學(xué)研究中，不同類型的固體或液體培養(yǎng)基被廣泛應(yīng)用于分離菌株的培養(yǎng)和分生孢子的產(chǎn)生（Feng et al.，2000），如昆蟲病理學(xué)家最常用的培養(yǎng)基是添加酵母提取物的SDAY培養(yǎng)基，此外，Czapek培養(yǎng)基、麥芽提取物培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基和沙氏麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基也經(jīng)常被使用。本研究結(jié)果表明，PDA為SP053菌株生長的最適宜培養(yǎng)基，在PDA上其菌落生長直徑最大，產(chǎn)孢量最高。Goettel等（2000）研究發(fā)現(xiàn)，將馬鈴薯提取物加入培養(yǎng)基中可為真菌提供生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，如淀粉、粗蛋白質(zhì)、維生素和Ca、K、P、Mg、Na、S、Zn、N等礦物質(zhì)。也有研究人員提出使用更復(fù)雜的培養(yǎng)基，如混合谷物瓊脂，其特點(diǎn)是分離物不易失去活力，但這一說法尚未得到證實(shí)，此類培養(yǎng)基也尚未被廣泛接受（Liu et al.，2002）。

不同培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的差異導(dǎo)致其碳、氮源不同，不同真菌生長特性的差異亦導(dǎo)致不同培養(yǎng)基的適用范圍不同。如球孢白僵菌、蠟蚧輪枝菌（Verticillium lecanii）、綠僵菌和萊氏野村菌（Nomuraea rileyi）最容易在標(biāo)準(zhǔn)瓊脂培養(yǎng)基上生長和產(chǎn)生分生孢子，也是上述真菌商業(yè)化發(fā)展的主要優(yōu)勢之一（Bidochka et al.，2000;Feng et al.，2000）。對于不考慮經(jīng)濟(jì)因素的小規(guī)模接種生產(chǎn)，SDAY培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基等價格相對較高的培養(yǎng)基已成功地誘導(dǎo)真菌形成分生孢子并獲得幾種昆蟲病原真菌的接種物。大多數(shù)兼性蟲生真菌可在一種或多種限定的或半限定的培養(yǎng)基或天然基質(zhì)上生長，少數(shù)可離體培養(yǎng)，但需要復(fù)雜的培養(yǎng)基，如大鏈壺菌（Lagenidium gigan-teum）可在簡單的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，但需要甾醇誘導(dǎo)（Navon and Ascher，2000）。而SP053菌株在PDA、SDAY和Czapek培養(yǎng)基上均能正常生長和產(chǎn)生分生孢。真菌培養(yǎng)基的成分有碳源、氮源和其他營養(yǎng)物質(zhì)，葡萄糖提供碳源，硝酸鹽、亞硝酸鹽、氨、尿素、氨基酸和其他化合物提供氮源。有研究表明，在固體培養(yǎng)基上，少孢節(jié)叢孢菌菌絲生長的最適碳源和氮源分別為葡萄糖和蛋白胨（王瑞等，2008）。本研究發(fā)現(xiàn)，SP053菌株生長的碳源為葡萄糖，與擬青霉屬生長的適宜碳源相一致。

以上研究結(jié)果均表明有必要對不同真菌菌株生長繁殖所需的營養(yǎng)條件和環(huán)境條件進(jìn)行研究，根據(jù)每個菌株特定的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，得到最高的分生孢子產(chǎn)量，是真菌大規(guī)模生產(chǎn)的需要，也是害蟲生物防治中以菌治蟲的需要。

4 結(jié)論

23～29 ℃是SP053菌株的最適生長溫區(qū)，其中26 ℃為該菌株的最適生長產(chǎn)孢溫度，該溫度下菌株萌發(fā)率高、菌落生長快、產(chǎn)孢最多;SP053菌株在PDA、SDAY和Czapek 3種培養(yǎng)基上均能正常生長和產(chǎn)孢，但在PDA上生長速率和產(chǎn)孢量均最高;pH 7～8下SP053菌株的孢子萌發(fā)率高、菌株生長快、產(chǎn)孢量高。

參考文獻(xiàn)：

蔡淑佳. 2009. 土壤中擬青霉高致病力菌株的分離與鑒定[D]. 廣州： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué). [Cai S J. 2009. Isolating and screening the intensive pathogenicity of fungi in the genus Paecilomyces（Bainier） from the soil[D]. Guangzhou： South China Agricultural University.]

陳劍翔. 2013. 細(xì)腳擬青霉優(yōu)化培養(yǎng)及產(chǎn)活性物質(zhì)的研究[D]. 蕪湖：安徽工程大學(xué). [Chen J X. 2013. Study on the optimized of Paecilomyces tenuipes cultivation and the active material[D]. Wuhu：Anhui Polytechnic University.]

陳文華，譚會穎，劉政，邴帥，鄭曉文，王安冉，徐凌川. 2018.中國大陸新記錄種珊瑚擬青霉的分離鑒定及其培養(yǎng)基優(yōu)化[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，50（7）：145-148. [Chen W H，Tan H Y，Liu Z，Bing S，Zheng X W，Wang A R，Xu L C. 2018. Isolation，Identification and optimization of culture medium of a new record species Penicilliopsis clavariaeformis Solms in the Chinese mainland[J]. Shandong Agricultural Sciences，50（7）：145-148.]

陳宇熹，邱君志，關(guān)雄. 2016. 擬青霉屬真菌的研究現(xiàn)狀[C]// 中國菌物學(xué)會. 中國菌物學(xué)會2016年學(xué)術(shù)年會論文集. [Chen Y X，Qiu J Z，Guan X. 2016. Research status of genus Paecilomyces[C]//Mycological Society of China. Proceedings of Annualmeeting of Mycological Society of China 2016.]

李月，姜春杰，趙宇鷹，馮梅，金巖. 2017. 蟲生真菌在林業(yè)害蟲生物防治中的應(yīng)用[J]. 吉林農(nóng)業(yè)，（15）： 64-65. [Li Y，Jiang C J，Zhao Y Y，F(xiàn)eng M，Jin Y. 2017. Application of entomogenous fungi in biological control of forestry pests[J]. Agriculture of Jilin，（15）： 64-65.]

彭鑫，浦靜，朱麗梅，張波，崔群香. 2016. 玫煙色擬青霉的形態(tài)特征和分生孢子萌發(fā)環(huán)境條件的研究[J]. 金陵科技學(xué)院學(xué)報，32（3）：76-79. [Peng X，Pu J，Zhu L M，Zhang B，Cui Q X. 2016. Morphological chatacteristics of the Pceciolmyces fumoroseus（Wize） brown & smith and their conidium germination environmental conditions[J].Journal of Jinling Institute of Technology，32（3）：76-79.]

秦涵淳，楊臘英，唐復(fù)潤，黃俊生. 2008. 茶蓑蛾寄生真菌的分離鑒定及其培養(yǎng)性狀[J]. 熱帶作物學(xué)報，29（5）： 653-657. [Qin H C，Yang L Y，Tang F R，Huang J S. 2008. Isolation and identication of entoparasitic fungus from Clania minuscula burler and its cultural characteristics[J]. Chinese Journal of Tropical Grops，29（5）： 653-657.]

宋曉兵，彭埃天，程保平，陳霞，凌金鋒，張煉輝. 2016. 利用蟲生真菌生物防治柑橘木虱的研究進(jìn)展[J]. 生物安全學(xué)報，25（4）： 255-260. [Song X B，Peng A T，Cheng B P， Chen X，Ling J F，Zhang L H. 2016. Review of biological controls of Diaphrina citri using entomopathogenic fungi[J]. Journal of Biosafety， 25（4）： 255-260.]

汪軍，楊臘英，毛超，陳平亞，張建華，郭立佳，黃俊生. 2013. 淡紫擬青霉E7菌株固體放大發(fā)酵產(chǎn)孢培養(yǎng)基和工藝條件研究[J]. 熱帶作物學(xué)報，34（10）：2038-2045. [Wang J， Yang L Y，Mao C，Chen P Y，Zhang J H，Guo L J，Huang J S. 2013. Medium and culture conditions for sporulation in solid state scale-up fermentation of Paecilomyces lilacinus E7 strain[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，34（10）：2038-2045.]

王利軍，譚萬忠，羅華東，杜喜翠. 2010. 蟲生真菌及其在害蟲生物控制中的應(yīng)用現(xiàn)狀與展望[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， （4）：119-125. [Wang L J，Tan W Z，Luo H D，Du X C. 2010. Status and prospects of entomogenous fungi and their app-lication in pest biological control[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，（4）： 119-125.]

王瑞，楊曉野，楊蓮茹，劉珍蓮，韓海賓，張曉東，鹿艷艷，李鑫. 2008. 不同碳氮源及其比例和培養(yǎng)基初始pH值對少孢節(jié)叢孢菌菌絲生長的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，（9）：11-14. [Wang R，Yang X Y，Yang L R，Liu Z L，Han H B，Zhang X D，Lu Y Y，Li X. 2008. Effects of carbon and nitrogen sources，carbon-to-nitrogen ratio and initial pH of medium on the growth of Arthrobotrys oligospora[J]. Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，（9）：11-14.]

吳丹丹，黃少華，章玉蘋，黃華，朱天圣，李傳瑛，鄧銘光，羅振亞. 2015. 玫煙色擬青霉固體培養(yǎng)基篩選及培養(yǎng)條件研究[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，42（15）：43-47. [Wu D D， Huang S H，Zhang Y P，Huang H，Zhu T S，Li C Y，Deng M G， Luo Z Y.2015. Screening of solid culture medium and culture conditions optimization of Paecilomyces fumosoroseus[J]. Guangdong Agricultural Science，42（15）：43-47.]

肖順， 劉國坤， 張紹升， 洪彩鳳. 2008. 淡紫擬青霉菌株P(guān)L050705的生物學(xué)特性及其對柑橘線蟲卵的寄生性[C]//福建省農(nóng)學(xué)會. 2008年福建省科協(xié)第八屆學(xué)術(shù)年會農(nóng)業(yè)分會場論文集. [Xiao S， Liu G K， Zhang S S， Hong C F. 2008. Biological characteristics of Paecllomyces lilacinus strain PL050705 and parasitiam on eggs of Tylenchulus semipenetrans[C]//Fujian agriculture society. 2008 Fujian Association for Sicence and Technology Eighth Annual Meeting of Agricultural Conference Procedings.

辛海云. 2018. 園藝植物蟲害生物防治技術(shù)[J]. 江西農(nóng)業(yè)， （10）： 91-92. [Xin H Y. 2018. Horticultural plant pest bio-logical control technology[J]. Jiangxi Agriculture，（10）： 91-92.]

張春龍，肖炎農(nóng)，向妮，黃朝炎，石磊，余旗紅，王長青，陳富華. 2014. 淡紫擬青霉防治小麥禾谷孢囊線蟲病研究[J]. 植物保護(hù)，40（4）：181-184. [Zhang C L，Xiao Y N， Xiang N，Huang C Y，Shi L，Xu Q H，Wang C Q，Chen F H. 2014. Bilolgical control effect of Paecilonyces lilacinus aginst cereal cyst nematode（CCN）[J]. Plant Protection，40（4）：181-184.]

張璐璐，吳圣勇，王帥宇，李娟，雷仲仁. 2015. 防治薊馬的球孢白僵菌SD-DZ-9菌株液體發(fā)酵工藝優(yōu)化[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，48（15）：2985-2994. [Zhang L L，Wu S Y，Wang S Y，Li J，Lei Z R. 2015. Optimization of Fetmentation Process of Beauveria bassiana of SDDZ-9 against Franklinie-lla occidentalis[J]. Scientia Agriculture Sinica，48（15）： 2985-2994.]

張命龍， 焦春偉， 謝意珍， 李崇， 梁慧嘉， 楊詠善. 2015. 蝙蝠蛾擬青霉液體發(fā)酵工藝優(yōu)化及菌絲體腺苷含量的檢測[J]. 菌物學(xué)報，35（2）：188-198. [Zhang M L，Jiao C W，Xie Y Z，Li C，Liang H J，Yang Y S. 2015. Optimization of submerged fermentation technology for Paecilomyces hepiali and determination for adenosine content in P. hepialid mycelia[J]. Journal of Fungi，35（2）：188-198.]

張未仲，張仙紅，張奐，張亞麗. 2007. 玫煙色擬青霉生物學(xué)特性的研究[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，35（2）：64-67. [Zhang W Z，Zhang X H，Zhang H，Zhang Y L. 2007. Study on bio-logical chaeacteristic of Paecilomyces fumosoroseus[J].Jounal of Shanxi Agricultural Sciences，35（2）：64-67.]

張仙紅，李文英，賀運(yùn)春. 2007. 影響蟲生真菌玫煙色擬青霉孢子萌發(fā)的因素探析[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，23（7）： 478-481. [Zhang X H，Li W Y，He Y C. 2007. The study on effect factors of conidia germination of Paecilomyces fumosoroseus[J]. Chinese Agriculture Science Bulletin， 23（7）： 478-481.]

張艷莉，呂銘輝，沈廣寧. 2013. 以蟲治蟲：種下小蟲子長出放心菜[J]. 農(nóng)藥市場信息，（15）：43. [Zhang Y L，Lü M H，Shen G N. 2013. Insect pest control： The small insect that were planted grew cabbages[J]. Pesticide Market News，（15）： 43.]

張洋. 2018. 農(nóng)業(yè)病蟲害防治技術(shù)分析[J]. 農(nóng)家參謀，（15）： 71. [Zhang Y. 2018. Analysis of agricultural pest control technology[J]. The Farmers Consultant，（15）： 71.]

朱新燕，李增智，樊美珍，鮑素敏，楊震元. 2008. 3株環(huán)鏈擬青霉固體培養(yǎng)條件的研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，35（1）：38-41. [Zhu X Y，Li Z Z，Pan M Z，Bao S M，Yang Z Y. 2008. Solid culture conditions of three strains of Paecilomyces catenlannulatus[J]. Journal of Anhui Agricultural University， 35（1）： 38-41.]

Bidochka D J，Melzer M J，Lavender T M，Kamp A M. 2000. Genetically related isolates of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisoplaie harbour homologous ds RNA vieu-ses[J]. MycologicalResearch，104（9）： 1094-1097.

Dias B A，Neves P M O J，F(xiàn)urlaneto-Maia L，F(xiàn)urlaneto M C. 2008. Cuticle-degrading proteases produced by the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana in the presence of coffee berry borer cuticle[J]. Brazilian Journal of Microbiology，39（2）：301-306.

Feng K C，Liu B L，Tzeng Y M. 2000. Verticillium lecanii spore production in solidstate and liquid-state fermentations[J]. Bioprocess Engineering， 23： 25-29.

Goettel M S，Inglis G D，Wriaght S P. 2000. Manual of Techniques in Insect Pathology[M]. Cambridge： Academic Press.

Hong T D，Ellis R H，Moore D. 2000. Development of a model to predict the effect of temperature and moisture on fungal spore longevity[J]. Annals of the Botany，79：121-128.

Liu Z Y，Liang Z Q，Whalley A J S. 2002. Molecular evidence for telemorph-anamorph connections in Cardyceps based on ITS-5.8S Rd[J]. Mycological Research，106： 1100-1108.

Navon A，Asher K R S. 2000. Bioassays of entomopathogenic microbes and nematodes[J]. Bioassays of Entomopathogenic Microbes and Nematodes：324.

St Leger R J， Wang C S. 2010. Genetic engineering of fungal biocontrol agents to greater efficacy against insect pests[J]. Applied Microbiology and Biotechnology， 85： 901-907.

Sun J Z，F(xiàn)uxa J R，HendersonG.2003. Effects of virulence， Sporulation and temperature on Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana laboratory transmission in Coptotermes formosanus[J]. Journal of Invertebrate Pathology，84（1）： 38-46.