張昳

摘要：本文介紹了PCR方法的幾種原理，主要就PCR技術(shù)的各種特性、檢測(cè)速度、準(zhǔn)確性、在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用等進(jìn)行分析討論。

關(guān)鍵詞：微生物檢測(cè);PCR;食品

聚合酶鏈反應(yīng)就是常說(shuō)的PCR技術(shù)，是由美國(guó)學(xué)者提出的一種特定DNA片段擴(kuò)增的方法。因?yàn)樵摷夹g(shù)存在其特殊的性質(zhì)特征，又不斷應(yīng)用于食品微生物檢測(cè)工作中，因此，該技術(shù)的運(yùn)用不但可以讓食品微生物的檢出率不斷提高，更重要的是可以讓微生物一些導(dǎo)致人類患病的安全隱患問(wèn)題排除。

一、關(guān)于食品微生物的PCR檢測(cè)技術(shù)

PCR的通用檢測(cè)。PCR檢測(cè)技術(shù)的原理非常簡(jiǎn)單，在DNA模板與其對(duì)應(yīng)引物的混合物質(zhì)當(dāng)中添加適當(dāng)?shù)木酆厦?，利用催化的DNA片段逐漸進(jìn)行擴(kuò)增，在此過(guò)程中主要是按照DNA模板來(lái)進(jìn)行，并且需要通過(guò)各個(gè)周期，在這些周期內(nèi)均會(huì)創(chuàng)造出各有差別的DNA片段，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的產(chǎn)物在此過(guò)程中會(huì)不斷增加。其實(shí)，早在幾十年前就有研究人員對(duì)沙門氏菌的基因進(jìn)行設(shè)計(jì)，而研究過(guò)程也就是對(duì)PCR檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行使用，在檢測(cè)過(guò)程中，檢測(cè)出的菌類極多，其檢出率大約可達(dá)到99.5%左右。由此可知，PCR檢測(cè)方式是可以大幅度推廣的^[1]。

PCR的多重檢測(cè)。PCR多重檢測(cè)技術(shù)和以往的PCR檢測(cè)技術(shù)具有較為相似的大量構(gòu)成，在此當(dāng)中，綜合的反應(yīng)體系應(yīng)該由大量的引物構(gòu)成，混合物內(nèi)的引物主要呈現(xiàn)出互補(bǔ)關(guān)系。在反應(yīng)罐內(nèi)添加進(jìn)種類各異的DNA片段，不僅能夠令以往檢測(cè)的特征仍然存在，還能夠簡(jiǎn)化檢測(cè)的流程，對(duì)更多的基因進(jìn)行檢測(cè)。不過(guò)，這種檢測(cè)方式也存在一定缺點(diǎn)，比如敏感度、檢測(cè)效率等，因此，需要較為客觀的對(duì)問(wèn)題進(jìn)行分析。

在多年的發(fā)展中，各類學(xué)者以及專家都對(duì)其檢測(cè)方式進(jìn)行了研究，而其中最有典型意義的菌種就是沙門氏菌以及大腸桿菌。通過(guò)研究數(shù)據(jù)可以看出，其檢測(cè)率大約在63%，具有一定的可行性。

RT-PCR。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)是其全稱，原理是對(duì)細(xì)胞中的RNA進(jìn)行提取并作為模板來(lái)進(jìn)行CDNA獲取，分析并作為模板來(lái)對(duì)PCR進(jìn)行擴(kuò)增，以較好地表示基因。大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該措施可以令檢測(cè)的靈敏度有效增強(qiáng)，甚至還可以提高更多的數(shù)量級(jí)，使RNA樣品的研究工作更加精確。RT-PCR檢測(cè)方式在進(jìn)行過(guò)程當(dāng)中，大多數(shù)的檢測(cè)對(duì)象都是動(dòng)物的糞便或者是河流當(dāng)中的樣品，而經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)可以得知，其中的菌體之間存在較多的區(qū)別。因此，在檢測(cè)菌體情況的時(shí)候，特別容易識(shí)別噬菌體的屬性究竟為陽(yáng)性或是陰性。

二、PCR技術(shù)應(yīng)用于食品微生物檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)

操作簡(jiǎn)便。微生物的檢測(cè)工作涵蓋多個(gè)領(lǐng)域，比如，微生物生長(zhǎng)應(yīng)用的培養(yǎng)基、微生物的生長(zhǎng)環(huán)境PH值和生長(zhǎng)溫度等不同的因素，由于微生物的種類各異，為了對(duì)微生物和生理特性進(jìn)行徹底觀察，需要耗費(fèi)過(guò)多的物力、人力以及財(cái)力，盡管有大量的時(shí)間和人力資源，但很難提高工作效率。而PCR技術(shù)就可以很好地解決這些問(wèn)題。

檢測(cè)快捷。用傳統(tǒng)自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)微生物一般需要48小時(shí)96小時(shí)，甚至?xí)_(dá)到7天或更久。但如果檢測(cè)時(shí)間較久，總是會(huì)出現(xiàn)食品進(jìn)入市場(chǎng)流轉(zhuǎn)以致不能準(zhǔn)確辨別檢測(cè)結(jié)果等現(xiàn)象，給我國(guó)的食品實(shí)際生產(chǎn)造成滯后的后果，也對(duì)我國(guó)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)穩(wěn)定造成一定影響。使用高自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)PCR就可以避免這一弊端，在短時(shí)間內(nèi)就可以得到檢測(cè)結(jié)果，通常僅僅需要幾小時(shí)，較長(zhǎng)的也僅僅需要一天便能結(jié)束。因此，高自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)PCR對(duì)我國(guó)的食品行業(yè)有著重大意義^[2]。

結(jié)果精準(zhǔn)。食用微生物很難辨別，其中活性薄弱的細(xì)菌最難檢測(cè)出來(lái)，并且通常情況下不僅檢測(cè)不出，還很難培養(yǎng)。然而利用高自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)PCR能夠詳細(xì)地將食品微生物的種類檢測(cè)出來(lái)，為我國(guó)的食品安全提供較大保障。

發(fā)展空間巨大。傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)的生產(chǎn)效率落后，而PCR在現(xiàn)階段屬于高自動(dòng)化技術(shù)，在各個(gè)方面都比傳統(tǒng)的食品檢測(cè)技術(shù)優(yōu)勢(shì)明顯，對(duì)于我國(guó)的食品行業(yè)和食品市場(chǎng)都有重要意義。

三、結(jié)論

經(jīng)過(guò)以上論述可知，高自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)PCR不光是對(duì)檢測(cè)效率的提高，更重要的是可以讓其中的精準(zhǔn)度提高，從而讓食品安全更有保障。筆者相信，隨著時(shí)代的不斷發(fā)展，我國(guó)的微生物檢測(cè)技術(shù)還會(huì)不斷提高、不斷發(fā)展，并在生物學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科之中進(jìn)行應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳諾，唐善虎，岑璐伽，等.多重PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37（10）：72-75.

[2]李勤，盛占武，孫志高.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)和研究中的應(yīng)用[J].食品與發(fā)酵科技，2006，42（5）：9-12.