張睿 吳曉毅 馬寶偉 陳上 王秀娟 高偉 黃璐琦

摘要 目的：研究不同濃度脫落酸（Abscisic acid，ABA）對(duì)雷公藤懸浮細(xì)胞中萜類次生代謝產(chǎn)物的誘導(dǎo)效應(yīng)，探討脫落酸的毒物效應(yīng)（Hormesis）。方法：雷公藤懸浮細(xì)胞繼代培養(yǎng)10 d后，分別加入不同濃度（10 μM，20 μM，50 μM，100 μM，150 μM，200 μM，500 μM）的ABA誘導(dǎo)，并設(shè)置空白對(duì)照組，每組生物學(xué)重復(fù)4次。分別采用HPLC和UPLC檢測(cè)誘導(dǎo)后0 h和240 h的樣品，測(cè)定懸浮細(xì)胞中雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲4種萜類成分的含量。結(jié)果：當(dāng)ABA濃度為10 μM和20 μM時(shí)，誘導(dǎo)組與對(duì)照組無(wú)差異；50 μM時(shí)，與對(duì)照組比較，雷酚內(nèi)酯含量明顯升高，雷公藤紅素含量升高至2.4倍，雷公藤內(nèi)酯甲含量升高至4.7倍；當(dāng)誘導(dǎo)濃度超過100 μM時(shí)，與對(duì)照組比較，除雷公藤內(nèi)酯甲外，雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素含量均顯著降低。結(jié)論：ABA在10～500 μM范圍內(nèi)對(duì)不同的雷公藤萜類成分影響作用不同，從整體趨勢(shì)看，呈現(xiàn)為β曲線，符合Hormesis效應(yīng)特點(diǎn)；50 μM時(shí)ABA對(duì)雷公藤紅素含量的積累有顯著促進(jìn)作用，為后期研究ABA影響雷公藤紅素合成機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 脫落酸；雷公藤；懸浮細(xì)胞；萜類成分；Hormesis效應(yīng)

Abstract Objective：To investigate the induction effect of abscisic acid （ABA） on the terpenoid secondary metabolites in the suspension cells of Tripterygium wilfordii ，and to explore the hormesis of abscisic acid.Methods：After being subcultured for 10 days，the suspension cells of Tripterygium wilfordii were induced by ABA at different concentrations （10 μM，20 μM，50 μM，100 μM，150 μM，200 μM，500 μM），and the blank control group was set for contrast.They were repeated for 4 times.The HPLC and UPLC was used to detect the samples at 0 h and 240 h after induction，respectively，and the contents of triptolide，triptophenolide，celastrol and wilforlide A were determined in suspension cells.Results：When the concentration of ABA was 10 μM and 20 μM，there was no difference between the induction group and the control group.At 50 μM，the content of triptophenolide significantly increased and the content of celastrol increased to 2.4 times，compared with the control group.And the content of wilforlide A increased to 4.7 times； when the induction concentration exceeded 100 μM，compared with the control group，except wilforlide A，content of triptolide，triptophenolide and celastrol were significantly lower.Conclusion：The effect of ABA on different terpenoids of Tripterygium wilfordii differs from 10 μM to 500 μM.From the overall trend，ABA shows a β-curve，which is in line with the hormesis effect.The 50 μM of ABA significantly enhances the accumulation of celastrol，which laid the foundation for later study on the mechanism of ABA affecting tripterine synthesis.

Key Words Abscisic acid； Tripterygium wilfordii ； Suspend cell； Terpenoids； Hormesis effect

中圖分類號(hào)：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.02.006

植物在生長(zhǎng)發(fā)育各個(gè)階段，會(huì)通過不同的植物激素調(diào)節(jié)自身代謝，從而適應(yīng)外界環(huán)境的改變。植物激素主要指在植物體內(nèi)合成，并從產(chǎn)生部位移動(dòng)到作用部位，在低濃度下對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育起顯著作用的微量有機(jī)物[1]。目前，已知的植物激素主要有生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素、脫落酸、乙烯，以及近年來(lái)被稱為第六大植物激素的油菜素內(nèi)酯[2]。其中，脫落酸（Abscisic acid，ABA）是一種以異戊二烯為單位的類倍半萜類物質(zhì)，存在于高等植物的器官及組織中，如成熟、衰老的植物組織或休眠器官中，其主要作用是調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育以及植物對(duì)非生物脅迫應(yīng)答中的反應(yīng)，從而促進(jìn)器官脫落、種子的成熟休眠、抑制種子萌發(fā)、以及加速植株的生長(zhǎng)和衰老[3]，如：在干旱、低溫、鹽脅迫、滲透脅迫等條件下，ABA可在植物體內(nèi)迅速積累，提高細(xì)胞水平非生物脅迫忍耐力，增強(qiáng)植物對(duì)逆境的抵抗力[4-7]。近年來(lái)，隨著對(duì)植物激素的研究深入，學(xué)者們發(fā)現(xiàn)植物激素對(duì)植物次生代謝產(chǎn)物的累積也有一定的影響，如：不同濃度ABA誘導(dǎo)甘草植株，其有效成分甘草酸與甘草苷含量均顯著提高或用ABA處理有損傷的采后番茄，可有效促進(jìn)傷口部位總酚、類黃酮含量的積累[8-9]；外源茉莉酸甲酯誘導(dǎo)丹參毛狀根，其酚酸類成分迅速積累[10]；外源水楊酸誘導(dǎo)可促進(jìn)活血丹扦插苗中總黃酮、熊果酸、齊墩果酸含量的積累[11]。

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物[12]，其根、葉、花及果實(shí)均可入藥，而根的去皮木質(zhì)部用作中藥雷公藤使用，具有祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、消腫止痛、殺蟲解毒等功效。該植物化學(xué)成分復(fù)雜多樣，其中具有顯著生物活性的成分主要為雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲等萜類化合物[13-14]。已有研究表明：雷公藤甲素具有抗排異、抗腫瘤和抗生育[15]等作用；雷酚內(nèi)酯具有有抗炎、抗免疫的作用[16]；而雷公藤紅素則具有抗炎、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗病毒，以及抗神經(jīng)退行性疾病等作用[17]。但由于氣候變化、生境破壞、人為開采過度，雷公藤植物資源大幅減少，有些地區(qū)的野生資源已接近枯竭，因此，保護(hù)雷公藤現(xiàn)有資源，研究其資源的合理可持續(xù)利用，已成為迫在眉睫的問題。有學(xué)者報(bào)道，在雷公藤生長(zhǎng)發(fā)育過程中，外源施加ABA可提高植物的抗冷性，緩解低溫對(duì)雷公藤植株幼苗的傷害，控制藥材產(chǎn)量下降等問題[18]，而組織培養(yǎng)等生物技術(shù)的發(fā)展也為藥用植物資源的開發(fā)和利用提供了新的方向。因此，本實(shí)驗(yàn)旨采用不同濃度的ABA誘導(dǎo)雷公藤懸浮細(xì)胞，測(cè)定其中雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲4種萜類成分的含量，分析ABA對(duì)雷公藤懸浮細(xì)胞中萜類成分累積的影響，篩選ABA誘導(dǎo)雷公藤懸浮細(xì)胞的最適濃度，從而為進(jìn)一步研究雷公藤懸浮細(xì)胞的作用機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持，并為解決雷公藤藥用資源的不足和合理利用提供新途徑和新思路。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent 1200，Agilent Technologies公司）；超高效液相色譜儀（Agilent 1290，Agilent Technologies公司）；微量移液器（Eppendorf Research Plus，Eppendorf公司）；臺(tái)式離心機(jī)（1-14型，sigma公司）；pH計(jì)（3510型，JENWAY有限公司）；高壓蒸汽滅菌鍋（MLS-3751-PC，三洋公司）；十萬(wàn)分之一電子天平（BT25S，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；萬(wàn)分之一電子天平（BSA3202S，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ5200DV型，昆山市超聲儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（WGL-65B型，天津市泰斯特儀器有限公司）；凈化工作臺(tái)（SW-CJ-1G、SW-CJ-2FD型，蘇州凈化設(shè)備有限公司）；低溫冰箱（MDF-388-C型，SANYO公司）；CHRIST凍干機(jī)（Alpha 1-2 LD plus型，北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試劑 脫落酸（生工生物工程（上海）股份有限公司，BBI，批號(hào)：BB17BA0022）、色譜乙腈（Fisher Chemical，A998-4，批號(hào)：155805）、色譜甲醇（Fisher Scientific，A452-4，批號(hào)：110939）、娃哈哈純凈水、雷公藤甲素標(biāo)準(zhǔn)品（成都普思生物有限公司，批號(hào)：PS08060201）、雷酚內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品（百諾威公司，批號(hào)：MUST-14071205）、雷公藤紅素標(biāo)準(zhǔn)品（Pharmacodia，批號(hào)：R0130198）、雷公藤內(nèi)酯甲標(biāo)準(zhǔn)品（aladdin，批號(hào)：G1404043）、Murashige&Skoog（MS）基本培養(yǎng)基（美國(guó)PhytoTechnology Laboratories公司，批號(hào)：05170010）、植物激素KT（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，K3378，批號(hào)：60D10120）、2，4-D（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，D7299，批號(hào)：11M2036V）、IBA（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：12B1012D）。

1.3 分析樣品 雷公藤懸浮細(xì)胞，由實(shí)驗(yàn)室自培[19]。

2 方法

2.1 雷公藤懸浮細(xì)胞體系構(gòu)建 以每瓶2.0 g的細(xì)胞量轉(zhuǎn)接入40 mL含0.5 mg/L 2，4-D+0.1 mg/L KT+ 0.5 mg/L IBA的MS液體培養(yǎng)液中，25 ℃，黑暗，120 r/min懸浮培養(yǎng)。

2.2 不同濃度ABA誘導(dǎo)雷公藤懸浮細(xì)胞 雷公藤懸浮細(xì)胞繼代10 d后，分別加入終濃度為10 μM、20 μM、50 μM、100 μM、150 μM、200 μM和500 μM的ABA進(jìn)行誘導(dǎo)，并設(shè)置空白對(duì)照組（CK組），共設(shè)8個(gè)實(shí)驗(yàn)分組，每組生物學(xué)重復(fù)4次，誘導(dǎo)培養(yǎng)240 h。

2.3 雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 依次精密稱取雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲標(biāo)準(zhǔn)品0.20 mg、0.60 mg、1.14 mg和0.80 mg，分別溶于色譜甲醇，并進(jìn)行稀釋，最終配成濃度為：0.50，1.00，5.00，20.00和40.00 μg/mL的雷公藤甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液；0.30，1.00，3.00，30.00和60.00 μg/mL的雷酚內(nèi)酯系列溶液；1.14，5.68，11.35，56.75和113.50 μg/mL的雷公藤紅素標(biāo)準(zhǔn)溶液；和8.00，80.00，160.00，400.00，和800.00 μg/mL的雷公藤內(nèi)酯甲標(biāo)準(zhǔn)溶液。將雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲4種成分的標(biāo)準(zhǔn)品系列溶液用HPLC檢測(cè)，并用Excel 2007軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4 雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素和雷公藤內(nèi)酯甲等含量測(cè)定 分別于誘導(dǎo)處理后0 h和240 h取樣，置于-80 ℃冰箱冷凍保存4 h后，進(jìn)行冷凍干燥，24 h后取出樣品。取冷凍干燥后的懸浮細(xì)胞約0.1 g，加1.5 mL80%色譜甲醇，超聲提取1 h，每隔5 min上下震蕩，樣品離心（12 000 r/min，2 min），取上清液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，于4 ℃保存，放置備用。

2.4.1 雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯和雷公藤內(nèi)酯甲含量測(cè)定方法 檢測(cè)條件：AglientSB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：0.05%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脫，0～12 min，38%B；12～25 min，38%～60%B；25～30 min，60%～65%B；30～35 min，65%B；35～48 min，65%～85%B；48～52 min，85%B；52～54 min，85%～83%B；54～65 min，83%B；流速0.8 mL/min。

2.4.2 雷公藤紅素含量測(cè)定方法 檢測(cè)條件：AglientSB-C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為426 nm；柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：0.1%乙酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脫，0～5 min，30%～35%B；5～8 min，35%B；8～15 min，35%～70%B；15～16 min，70%～85%B；16～19 min，85%B；19～22 min，85%～90%B；流速0.4 mL/min。

2.4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 所測(cè)得的數(shù)據(jù)用Excel和SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。若服從正態(tài)分布，則用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；組間差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 雷公藤懸浮細(xì)胞中4種萜類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線按照“2.4.1”方法測(cè)定4種標(biāo)準(zhǔn)品溶液的含量，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，利用Excel 2007軟件對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行分析，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖1-1～1-4。

3.2 雷公藤懸浮細(xì)胞中萜類化合物含量測(cè)定結(jié)果雷公藤懸浮細(xì)胞及雷公藤甲素等標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖結(jié)果見圖2、圖3。

3.3 不同濃度ABA對(duì)雷公藤懸浮細(xì)胞中4種萜類化合物累積的影響 隨著加入不同濃度ABA誘導(dǎo)劑，雷公藤懸浮細(xì)胞中4種萜類化合物的含量發(fā)生明顯變化。見圖4-1～圖4-9。如圖4-1所示，在空白對(duì)照組中，0 h與240 h比較，雷酚內(nèi)酯與雷公藤紅素含量無(wú)明顯變化，而雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯甲含量有明顯差異，其中，雷公藤甲素的含量升高4.0倍；雷公藤內(nèi)酯甲含量降低17.0%。

如圖4-2～4-5所示，經(jīng)不同濃度ABA誘導(dǎo)后，4種萜類化合物的含量均較誘導(dǎo)前有差異性變化。其中，除200 μM誘導(dǎo)濃度外，在其他不同誘導(dǎo)濃度作用下，雷公藤甲素的含量均有所提高；而除50 μM和100 μM誘導(dǎo)濃度外，在其他不同誘導(dǎo)濃度作用下，雷酚內(nèi)酯和雷公藤紅素的含量有所下降，且雷酚內(nèi)酯的含量變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；當(dāng)誘導(dǎo)濃度≥100 μM時(shí)，雷公藤內(nèi)酯甲的含量升高，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如圖4-6所示，與CK-240 h比較，經(jīng)不同濃度的ABA誘導(dǎo)后240 h，雷公藤甲素的含量呈下降趨勢(shì)。當(dāng)ABA濃度在10～50 μM時(shí)，其含量無(wú)顯著性變化；當(dāng)濃度超過100 μM后，則存在顯著性差異，雷公藤甲素含量分別是CK組的41.5%、31.4%、17.6%和36.7%。由此說明：當(dāng)ABA濃度高于100 μM時(shí)，能明顯抑制雷公藤甲素的積累。

如圖4-7所示，與CK-240 h比較，經(jīng)不同濃度的ABA誘導(dǎo)后240 h，雷酚內(nèi)酯的含量呈差異性改變。當(dāng)ABA濃度為10 μM時(shí)，其含量明顯降低；隨濃度增加，當(dāng)ABA濃度為50 μM和100 μM時(shí)，其含量明顯升高，分別是CK組的4.9倍和3.5倍；但當(dāng)ABA濃度超過100 μM后，雷酚內(nèi)酯的含量則又顯著下降，明顯低于CK組，分別是CK組的12.6%、11.9%和32.7%。由此說明：雷酚內(nèi)酯的含量隨著ABA濃度的增大，整體呈先下降、后上升、再下降的趨勢(shì)。當(dāng)ABA濃度在50 μM和100 μM時(shí)，可促進(jìn)雷酚內(nèi)酯的積累，但當(dāng)誘導(dǎo)濃度≥150 μM時(shí)，則明顯抑制雷酚內(nèi)酯的累積。

如圖4-8所示，與CK-240 h比，經(jīng)不同濃度的ABA誘導(dǎo)后240 h，雷公藤紅素的含量呈差異性變化。當(dāng)ABA濃度為10 μM和20 μM時(shí)，其含量明顯降低；隨濃度增加，當(dāng)ABA濃度為50 μM和100 μM時(shí)，其含量明顯升高，分別為CK組的2.4倍和2.6倍；但當(dāng)濃度在100～200 μM時(shí)，雷公藤紅素的含量與CK組比較無(wú)顯著差異，當(dāng)濃度為500 μM時(shí)，雷公藤紅素含量低于CK組，為CK組的36.8%。由此說明：誘導(dǎo)組雷公藤紅素的含量隨著ABA濃度的增大，整體呈先下降、后上升、再下降的趨勢(shì)。當(dāng)ABA濃度在50 μM和100 μM時(shí)，可促進(jìn)雷公藤紅素的積累，但誘導(dǎo)濃度高于150 μM時(shí)，則明顯抑制雷公藤紅素的累積。

如圖4-9所示，與CK組比較，經(jīng)不同濃度的ABA誘導(dǎo)后240 h，雷公藤內(nèi)酯甲的含量呈上升趨勢(shì)。當(dāng)ABA濃度為10～500 μM時(shí)，雷公藤內(nèi)酯甲含量與CK組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且濃度越大，上升幅度越大；當(dāng)濃度為500 μM時(shí)，雷公藤內(nèi)酯甲含量最大，是CK組的32.1倍。由此說明，ABA能明顯促進(jìn)雷公藤內(nèi)酯甲含量的積累。

4 討論

經(jīng)ABA誘導(dǎo)240 h后，雷公藤甲素的含量升高，但低于CK-240 h，其中，當(dāng)誘導(dǎo)濃度超過100 μM時(shí)，雷公藤甲素的含量較對(duì)照組有顯著性差異，降幅高達(dá)58.6%～82.4%。故當(dāng)使用濃度大于100 μM的ABA誘導(dǎo)雷公藤懸浮細(xì)胞后，雷公藤甲素的累積被抑制，且隨誘導(dǎo)劑濃度的升高，其抑制程度逐漸加大。

經(jīng)ABA誘導(dǎo)240 h后，雷酚內(nèi)酯的含量呈差異性變化，當(dāng)誘導(dǎo)濃度低于50 μM時(shí)，雷酚內(nèi)酯含量均不高于CK組，當(dāng)濃度為50 μM和100 μM時(shí)，雷酚內(nèi)酯的含量顯著高于CK組，是CK組的4.9倍和3.5倍，而當(dāng)濃度超過100 μM后，雷酚內(nèi)酯含量明顯低于CK組，降幅為67.3%～88.1%。故當(dāng)采用50～100 μM的ABA誘導(dǎo)雷公藤懸浮細(xì)胞時(shí)，可有效促進(jìn)雷酚內(nèi)酯含量的積累，超過150 μM，雷酚內(nèi)酯含量積累被明顯抑制。

經(jīng)ABA誘導(dǎo)240 h后，雷公藤紅素含量呈差異性變化，當(dāng)誘導(dǎo)濃度低于50 μM時(shí)，雷公藤紅素含量均明顯低于CK組，隨著誘導(dǎo)濃度增加，當(dāng)誘導(dǎo)濃度為50 μM和100 μM時(shí)，ABA濃度為50 μM和100 μM時(shí)，雷公藤紅素含量明顯升高，分別為CK組的2.4倍和2.6倍，當(dāng)誘導(dǎo)濃度超過150 μM后，雷公藤紅素含量逐漸降低，最低含量為CK組的36.0%，故當(dāng)使用50～100 μM的ABA誘導(dǎo)雷公藤懸浮細(xì)胞，可明顯促進(jìn)雷公藤紅素的積累，超過100 μM，雷公藤紅素的含量積累被明顯抑制，且隨誘導(dǎo)劑濃度的升高，其抑制程度逐漸加大。

未誘導(dǎo)前，CK組的雷公藤內(nèi)酯甲含量在240 h時(shí)間內(nèi)呈下降趨勢(shì)，經(jīng)不同濃度ABA誘導(dǎo)240 h后，雷公藤內(nèi)酯甲含量均顯著高于CK-240 h組，且隨著誘導(dǎo)濃度增大，雷公藤內(nèi)酯甲含量的積累幅度越大，當(dāng)濃度超過100 μM后，雷公藤內(nèi)酯甲含量均高于CK-0 h組，最大是CK-0 h時(shí)的5.62倍，是CK-240 h的31.14倍。故ABA在10～50 μM時(shí)，可有效抑制雷公藤內(nèi)酯甲含量的下降，當(dāng)ABA濃度超過100 μM時(shí)，ABA可促進(jìn)雷公藤內(nèi)酯甲含量的積累。

生物體在不同劑量化學(xué)物質(zhì)刺激下，會(huì)產(chǎn)生Hormesis效應(yīng)——以雙相劑量-反應(yīng)曲線為特征的一種適應(yīng)性反應(yīng)，即有毒化學(xué)物質(zhì)對(duì)生物體在高劑量時(shí)表現(xiàn)負(fù)面影響，但在低劑量時(shí)卻表為有益作用的現(xiàn)象[19]。該效應(yīng)最常見的量效曲線有2種，即β型曲線和U型曲線，其中β型曲線主要反映低劑量濃度下表現(xiàn)適度興奮作用，而高劑量表現(xiàn)為抑制作用的Hormesis效應(yīng)；而U型曲線所呈現(xiàn)的Hormesis效應(yīng)模型，主要反映毒物在低劑量時(shí)對(duì)腫瘤等疾病的抑制反應(yīng)[20]。

本實(shí)驗(yàn)中，ABA誘導(dǎo)濃度在10～500 μM范圍內(nèi)，對(duì)雷公藤中4種萜類化合物的累積有不同影響。10～50 μM時(shí)，雷公藤甲素的含量無(wú)明顯變化，隨著濃度升高，當(dāng)濃度≥100 μM時(shí)，雷公藤甲素含量顯著降低，其積累被明顯抑制。從整體趨勢(shì)看，雷公藤甲素含量變化符合β型曲線。但是，雷公藤內(nèi)酯甲則與之相反，在10～500 μM時(shí)，雷公藤內(nèi)酯甲的含量與誘導(dǎo)濃度成正相關(guān)，隨濃度增加，其含量的增長(zhǎng)幅度越大，說明ABA可促進(jìn)雷公藤內(nèi)酯甲的積累。

與此同時(shí)，隨著ABA濃度的上升，雷酚內(nèi)酯含量和雷公藤紅素的含量呈規(guī)律性變化。當(dāng)誘導(dǎo)濃度低于20 μM時(shí)，雷酚內(nèi)酯含量均不超過CK組，50～100 μM時(shí)，雷酚內(nèi)酯含量的積累被促進(jìn)，超過150 μM后，雷酚內(nèi)酯含量的積累被抑制，從整體趨勢(shì)看，其含量變化符合β型曲線；在10～20 μM時(shí)，雷公藤紅素的含量均低于CK組，50～100 μM時(shí)，隨著誘導(dǎo)濃度升高，雷公藤紅素含量大幅提高，超過150 μM，雷公藤紅素的積累被抑制，從整體變化看，雷公藤紅素的含量變化在一定程度上同樣符合β型曲線。雷公藤甲素、雷酚內(nèi)酯和雷公藤紅素的含量變化說明本實(shí)驗(yàn)中的濃度范圍可以表現(xiàn)ABA的Hormesis效應(yīng)。通過分析，較低濃度的ABA可促進(jìn)雷公藤紅素和雷酚內(nèi)酯的含量積累，當(dāng)超過100 μM時(shí)，雷公藤紅素和雷酚內(nèi)酯的含量降低，起抑制作用；而雷公藤甲素在低濃度ABA誘導(dǎo)時(shí)無(wú)明顯變化，超過100 μM時(shí)含量的積累被抑制，ABA則對(duì)雷公藤內(nèi)酯甲的積累一直起促進(jìn)作用，說明除了ABA的作用外，雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯甲的積累還可能同時(shí)受到其他因素的影響。

大多數(shù)研究人員認(rèn)為Hormesis效應(yīng)是普遍存在的，人們?cè)诙喾N生物、毒物及生命現(xiàn)象中均發(fā)現(xiàn)了Hormesis效應(yīng)。如研究發(fā)現(xiàn)輕度干旱脅迫下甘草酸含量明顯升高[21]；低濃度的鹽脅迫能提高廣藿香幼苗根系的活力，而高濃度的鹽脅迫作用對(duì)根系活力則起抑制作用[22]；低濃度Cd可顯著促進(jìn)青蒿中青蒿素含量的提高[23]。所以在明確量效關(guān)系曲線的基礎(chǔ)上，利用Hormesis效應(yīng)，可以在藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育與次生代謝產(chǎn)物的積累方面實(shí)現(xiàn)雙贏。在檢測(cè)誘導(dǎo)后雷公藤懸浮細(xì)胞中的4種萜類成分時(shí)發(fā)現(xiàn)，從整體趨勢(shì)上，當(dāng)ABA濃度達(dá)到50 μM時(shí)，懸浮細(xì)胞中雷公藤紅素的含量積累達(dá)到一個(gè)最高點(diǎn)，而該濃度下，雷公藤甲素?zé)o明顯變化，推測(cè)50 μM濃度可作為后期實(shí)驗(yàn)中研究ABA影響雷公藤紅素合成機(jī)制的一個(gè)重要條件，同時(shí)為研究ABA影響雷公藤萜類合成機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

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