翟垚青 閆文靜 喬志燕

摘要目的：探討子午流注針法聯(lián)合干擾素治療對宮頸癌合并人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染的臨床療效，并觀察其對Th17細胞因子表達的影響。方法：選取宮頸癌合并HPV感染患者70例，隨機分為對照組和觀察組，每組35例。2組患者均接受紫杉醇+卡鉑化療方案以及重組人α2β干擾素均勻涂宮頸表面，觀察組在上述治療方案的基礎上加用子午流注針法聯(lián)合治療，比較2組治療臨床療效、KPS評分、外周血Th17細胞百分比的變化，并觀察不良反應發(fā)生情況。結果：治療后2組KPS評分均較治療前提高，其中觀察組提高的趨勢較對照組明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。觀察組臨床總有效率為7429%，對照組臨床總有效率4286%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=329，P<005）。治療后觀察組有26例HPV轉陰，轉陰率7429%，對照組12例轉陰，轉陰率3429%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=283，P<005）。治療后2組外周血Th17百分比均較治療前下降，觀察組較對照組下降更明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。結論：子午流注針法可改善宮頸癌合并HPV感染的免疫抑制狀態(tài)，明顯提高患者的生命質量。

關鍵詞宮頸癌；HPV感染；干擾素；子午流注針法；Th17；T淋巴細胞亞群；療效；免疫抑制

Effect of Acupuncture Based on Midnightnoon Cycle of Qi in Combination with Interferon

on T Lymphocyte Subsets in Patients with Cervical Cancer Coinfection of HPV

Zhai Yaoqing1， Yan Wenjing2， Qiao Zhiyan1

（1 Department of Gynecology， Jiaozuo City Maternal and Child Health Hospital， Jiaozuo 454000， China； 2 Department

of Pathology， Jiaozuo City Maternal and Child Health Hospital Pathology， Jiaozuo 454000， China）

AbstractObjective：To investigate the clinical curative effect of the acupuncture based on midnightnoon cycle of qi in combination with interferon on cervical cancer coinfection of human papilloma virus （HPV）， and to observe the effects on Th17 cytokines. Methods：A total of 70 cases of patients with cervical cancer coinfection of HPV in our hospital included into the study， and were randomly divided into the control group and the observation group， with 35 cases in each group. Two groups of patients accepted chemotherapy regimens of paclitaxel + carboplatin and recombinant human interferon α2βevenly cervical surface， and the observation group combined with acupuncture based on midnightnoon cycle of qi on the basis of the above treatment. The clinical curative effect， Karnofsky Performance Status （KPS）， peripheral blood Th17 cells percentage changes of two groups were compared， and the adverse reactions were observed. Results：1）KPS scores improved in the two groups after treatment， and the increase trend of observation group was more obviously than the control group. The differences were statistically significant （P<005）. 2）The clinical total effective rate of observation group was 7429%， and that was 4286% in the control group. The differences were with statistically significant （χ2=329， P<005）. After treatment， 26 cases of HPV turned to negative in the observation group， and the negative conversion ratio was 7429%，12 cases turned to negative in the control group， and the negative conversion ratio was 3429%. The differences were statistically significant （χ2=283， P<005）. 3）After a stage of treatment， peripheral blood Th17 percentage in the two groups decreased， and the observation group decreased more obvious than the control group. The differences were statistically significant （P<005）. Conclusion：The acupuncture based on midnightnoon cycle of qi can improve the immunosuppression of cervical cancer coinfection of HPV， and can significantly improve the patient′s quality of life.

Key WordsCervical cancer； HPV infection； Interferon； Acupuncture based on midnightnoon cycle of qi； Th17； T lymphocyte subsets； Efficacy； Immunosuppression

中圖分類號：R245文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.048

宮頸癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率僅次于乳腺癌的疾病，發(fā)病率呈逐年增加的趨勢，目前有文獻[13]證實HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的主要原因，國內(nèi)外專家雖進行大量研究，但仍無法顯著降低HPV的感染率。多數(shù)腫瘤合并感染的患者處于免疫抑制狀態(tài)[4]，且與患者的臨床預后相關，因此，我們認為改善宮頸癌合并HPV感染的免疫力將有可能成為治療的靶方向。

子午流注針法在臨床被廣泛運用[5]，并不斷發(fā)展和完善，擇時施治可以調(diào)整臟腑功效。本研究利用子午流注針法治療宮頸癌合并HPV感染，并對其部分作用機制進行研究。

1資料與方法

11一般資料選取2014年1月至2015年1月我院合并HPV感染的宮頸癌患者70例，按隨機數(shù)字表法分為對照組和觀察組，每組35例。對照組患者年齡36～70歲，平均年齡（4529±948）歲，病程6個月至3年，平均病程（126±023）年，國際婦產(chǎn)科協(xié)會（FIGO）分期為Ⅰ期4例、Ⅱ期13例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例；觀察組患者年齡37～71歲，平均年齡（4611±838）歲，病程5個月至25年，平均病程（114±014）年，F(xiàn)IGO分期為Ⅰ期5例、Ⅱ期11例、Ⅲ期9例、Ⅳ期10例。同時取同期健康體檢者30名作為健康對照組，年齡34～73歲，平均年齡（4629±1002）歲，2組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>005），具有可比性。本研究經(jīng)倫理委員會批準（倫理批件號2014EK021）。

12診斷標準經(jīng)陰道鏡檢查及宮頸活檢確診宮頸癌，經(jīng)快速導流雜交技術檢測存在HPV感染[3]。

13納入標準1）符合12者；2）年齡35～75歲；3）無心、腦、肺、腎等重大臟器并發(fā)癥者；4）知情同意并簽署知情同意書者。

14排除標準1）存在精神疾患或者認知障礙者；2）存在免疫缺陷疾病者；3）對化療藥物過敏者。

15脫落與剔除標準1）在治療過程中因故中途退出者；2）隨訪中自然脫落者；3）治療過程出現(xiàn)明顯不良反應者；4）依從性差者。

16治療方法對照組采用紫杉醇+卡鉑聯(lián)合化療方案，首先用改良Seldinger穿刺法進行置管，靜脈滴注絲裂霉素（上海上藥新亞藥業(yè)有限公司，國藥準字號H31020504）+順鉑（德州德藥制藥有限公司，國藥準字號H20023236）+5氟脲嘧啶（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國藥準字H31020593）。觀察組在對照組基礎上加用子午流注針法，以本地時間為時間依據(jù)，依照“陽日陽時開陽經(jīng)之穴，陰日陰時開陰經(jīng)之穴”的開穴原則進行開穴，每日按時開穴的時間體見表1。具體操作方法：患者雙側肢體取穴，保持仰臥位，用75%乙醇對穴位局部進行消毒，用華佗牌針具進行針刺，平補平瀉手法，每次留針30 min，1次/d，以10次為1個療程，連續(xù)進行3個療程治療，每個療程間隔開3 d。2組均進行為期6個月隨訪。

17觀察指標

171KPS評分KPS評分是對腫瘤患者健康狀態(tài)進行評估的一種手段，從正常，無癥狀和體征至死亡分為11個級別，每個級別對應的分值不同，正常，無癥狀和體征代表10分，能進行正?；顒樱休p微癥狀和體征代表9分，勉強進行正?；顒?，有一些癥狀或體征代表8分；生活能自理，但不能維持正常生活和工作代表7分；生活能大部分自理，但偶爾需要別人幫助代表6分；常需要人照料代表5分；生活不能自理，需要特別照顧和幫助代表4分；生活嚴重不能自理代表3分；病重，需要住院和積極的支持代表2分；病重，需要住院和積極的支持治療代表1分；死亡代表0分。得分越低，健康狀況越差，若低于60分，許多有效的抗腫瘤治療就無法實施。

172Th17細胞百分比取2組宮頸癌患者治療前以及隨訪6個月后和健康組外周血5 mL，用人淋巴細胞分離液將上述血液中的單核細胞分離出并調(diào)整密度為1×106/mL，取200 μL置于10%胎牛血清RPMI 1640培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，加入事先混合完成的工作液，工作液內(nèi)含有刺激劑佛波醇乙酯及離子霉素等，將培養(yǎng)瓶置于37 ℃，5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)4～6 h，培育結束后用磷酸鹽緩沖液沖洗，以5 000 r/min速度下離心，收集細胞后加入5μL異硫氰酸熒表1“子午流注納甲法”擇時按日開穴時間時辰時間日干甲己乙庚丙辛丁壬戊癸辰7～9支溝支溝陽溪商陽昆侖昆侖陽陵泉俠溪后溪后溪巳9～11商丘隱白經(jīng)渠經(jīng)渠陰谷然谷太沖太沖大陵大陵午11～13陽溪陽溪委中通谷足臨泣足臨泣中渚后溪、京骨、陽池陽池、厲兌厲兌未13～15尺澤魚際太溪太溪勞宮太沖、太溪少沖少沖商丘商丘申15～17委中委中液門足臨泣、合谷少澤少澤解溪解溪二間二間酉17～19中沖太溪、太白大敦大敦靈道靈道大都大都尺澤尺澤

光素對CD4（CD4FITC）進行標記，加入5 μL藻紅蛋白對IL17（IL17AAPC）細胞進行標記，隨后采用流式細胞檢測技術進行Th17細胞的檢測。

18療效判定標準采用FIGO評定標準對腫瘤治療效果進行判定[6]，完全緩解（CR）：肉眼下未見腫瘤組織，且無新病灶出現(xiàn)；部分緩解（PR）：腫瘤組織體積較治療前縮小50%以上，且無新病灶出現(xiàn)；病情穩(wěn)定（SD）：腫瘤組織體積較治療前未達50%，且無新病灶出現(xiàn)；病情進展（PD）：治療前后腫瘤組織大小無變化或出現(xiàn)新病灶。HPV療效標準：1）轉陰；2）無效。

19統(tǒng)計學方法本課題所得數(shù)據(jù)均在SPSS 200統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<005為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

212組KPS評分比較治療后2組KPS評分均較治療前提高，其中觀察組提高較對照組明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。見表2。

222組臨床有效率比較觀察組臨床有效率為7429%，對照組臨床有效率4286%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=329，P<005）。見表3。

232組HPV轉陰率比較治療后觀察組有26例HPV轉陰，轉陰率7429%，對照組12例轉陰，轉陰率3429%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=283，P<005）。

242組Th17細胞百分率比較2組隨訪6個月后2組外周血Th17百分率雖仍較健康組高，但均較治療前明顯下降，觀察組較對照組下降更明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。見圖1。

3討論

宮頸癌的發(fā)病率近年來一直居高不下，對女性的生命安全產(chǎn)生嚴重危害。HPV感染是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的獨立危險因子，而持續(xù)性的免疫功能下降則是HPV持續(xù)性感染的危險因子[78]，Bhavsar等[9]證實免疫能力高低與癌癥患者的預后存在正相關。故我們認為調(diào)節(jié)患者的免疫功能以抵御HPV感染是治療宮頸癌患者的重要措施。

子午流注理論源自《黃帝內(nèi)經(jīng)》，是天人相應觀點的充分體現(xiàn)，后世醫(yī)賢在臨床實踐中不斷將其完善，逐步形成了目前較為完善的理論及實踐體系?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中認為人身之氣血周流出入皆有定時，人體氣血的虛盛具有周期性變化，此規(guī)律與天干、地支、陰陽五行相配合形成擇時定期開闔五腧穴的一種方法，此法充分體現(xiàn)了中醫(yī)針灸學注重時間條件取穴的特色，正如明代醫(yī)家楊繼洲《針灸大成》中曰：“剛柔相配，陰陽結合，氣血循環(huán)，時穴開闔”。在氣血灌注之時對特定的穴位進行刺激，充分調(diào)節(jié)氣血陰陽，疏通經(jīng)絡，促進機體功能恢復。子午流注法被廣泛運用于臨床治療各類疾病，療效好，越來越受到患者的青睞。董淑艷和馮萬才[10]利用子午流注法對中風后遺癥患者進行治療，結果顯示該療法可明顯提升患者的日常生活能力（ADL）；孫云廷等[11]對慢性乙酸胃潰瘍模型大鼠進行子午流注針法干預，結果顯示子午流注針法可明顯加速大鼠潰瘍創(chuàng)面的愈合，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）；有研究發(fā)現(xiàn)子午流注納甲法可明顯提高乙肝患者的丙氨酸轉氨酶復常率以及HBVDNA陰轉率，其療效明顯優(yōu)于單純使用拉米夫定的對照組（P<005），這提示子午流注針法對抑制乙型肝炎病毒的復制、提高肝功能有理想效果[1213]。諸如此類的臨床報道不勝枚舉，諸多醫(yī)家從臨床及動物實驗證實了子午流注法的有效性及可行性。本研究利用子午流注針法對宮頸癌合并HPV感染患者進行治療，結果顯示該療法不但提高了患者的關于腫瘤的臨床有效率，提升了KPS評分，且明顯增加了HPV的轉陰率。

Th17是近年來發(fā)現(xiàn)的CD4+淋巴細胞亞群，其結構與作用于Th1及Th2不同，Th17參與了機體自身免疫及炎性反應改變的過程，在部分疾病中Th17還是發(fā)病的主要調(diào)節(jié)者[1417]。宮頸癌合并HPV感染患者大多表現(xiàn)為免疫抑制及炎性反應，幼稚CD4+T細胞在一定條件下分化為Th17細胞，產(chǎn)生了IL17效應因子，而IL17是重要的促炎因子之一，與相應受體結合后發(fā)揮促進炎性反應發(fā)展、免疫應答等多種功能，因此調(diào)控Th17細胞分化有重要的臨床價值。在對該療法作用機制探討中我們檢測了2組宮頸癌患者外周血Th17細胞比例的變化，同時與健康組進行對照比較。本研究結果顯示，2組宮頸癌合并HPV感染患者外周血中Th17的表達頻率明顯高于健康對照組，由此我們推斷Thl7、IL17等在宮頸癌合并HPV感染中可能起到作用，隨訪6個月后2組外周血Th17百分比雖仍較健康組高，但均較治療前明顯下降，觀察組較對照組下降更明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<005），這進一步提示Th17可能是宮頸癌合并HPV感染一個重要因素，而子午流注針法發(fā)揮臨床療效可能與下調(diào)Th17的表達有關。因此我們認為糾正Th17的功能失調(diào)可能是治療宮頸癌的一個靶點。

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