周思思，姜建國

（華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州 510640）

紅景天根莖提取物(Extracta from stems and leaves ofRhodiola sachliensisA. Bor)系從景天科紅景天屬長白山產(chǎn)高山紅景天中提取的浸膏，已被前蘇聯(lián)廣泛用于臨床。被報道具有多種藥理活性[1]，含有豐富的黃酮，多糖，有機(jī)酸和揮發(fā)油[2]等化學(xué)成分。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，紅景天具有抗衰老、抗疲勞和抗自由基損傷等作用[1]。苗艷波[3]等大量實驗結(jié)果表明，高山紅景天及其總皂苷能明顯提高老齡小鼠紅細(xì)胞SOD（超氧化物歧化酶）和CAT（過氧化氫酶）活力，提高肝組織中 GSH-Px（谷胱甘肽過氧化氫酶）的活力，降低血漿中 MDA（丙二醛）的含量，起到減緩衰老的作用；胡卡明[4]等觀察紅景天膠囊治療中醫(yī)虛證100例，結(jié)果表明紅景天具有健脾益腎、益氣生血、保護(hù)細(xì)胞和延緩衰老的作用；因此中藥紅景天在抗衰老方面有 廣闊的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步開發(fā)。

反復(fù)的紫外照射會導(dǎo)致皮膚光老化，產(chǎn)生大量自由基，引發(fā)皮膚氧化壓力、促使蛋白氧化性損傷，進(jìn)而會引發(fā)皮膚衰老，甚至是惡性腫瘤[5]。角質(zhì)細(xì)胞和纖維細(xì)胞是皮膚衰老過程中涉及的主要細(xì)胞類型，應(yīng)用中藥提取物抑制皮膚光老化衰老是近些年來研究的熱點[6]。Lim等[7]以不同立體異構(gòu)體的人參皂苷作用于中波紫外線（UVB）照射后的角質(zhì)細(xì)胞和纖維細(xì)胞為研究對象，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3對皮膚光老化抗衰老有保護(hù)作用；Kwak等[8]研究發(fā)現(xiàn)桃花乙醇提取物有預(yù)防皮膚光老化，減緩機(jī)體衰老的效果，并檢測了相關(guān)基因的表達(dá)和蛋白的合成量。因此，為合理開發(fā)珍貴藥用資源，本實驗研究以紅景天為材料，利用紫外照射人皮膚成纖維細(xì)胞（HSF）和人永生化皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）受損為模型，應(yīng)用紅景天4大類粗提物（總皂苷、總黃酮、多糖、揮發(fā)油）體外干預(yù)中波紫外線（UVB）照射的HSF細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞，通過觀察最大濃度下細(xì)胞的形態(tài)、存活率和最大濃度800 μg/mL時細(xì)胞上清液中SOD、GSH-Px、MDA的含量變化來探討紅景天粗提物對皮膚細(xì)胞光老化衰老的保護(hù)作用，為進(jìn)一步分離，純化紅景天抗光老化功效成分及其作用機(jī)制的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和主要儀器

1.1.1 材料和細(xì)胞

高山紅景天，產(chǎn)自西藏，購于廣州清平藥材市場，植物由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院郝剛教授鑒定；人永生化皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞 HaCaT和人皮膚成纖維細(xì)胞HSF購于中國科學(xué)院干細(xì)胞庫。

1.1.2 培養(yǎng)基和試劑

DMEM培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶消化液、青霉素、鏈霉素，美國Gibico公司；胎牛血清，四季青公司；DMSO，sigma公司；SOD、GSH-Px、MDA 試劑盒均為南京建成生物工程研究所。

1.1.3 主要實驗儀器

CO2培養(yǎng)箱，上海博迅實業(yè)有限公司；垂直流超凈工作臺，蘇州凈化設(shè)備有限公司；臺式低速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；倒置顯微鏡，上海光學(xué)儀器六廠；多功能酶標(biāo)儀，瑞士TECAN公司；ZF-2型三用紫外儀，上海市安亭電子儀器廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 紅景天皂苷[9]、黃酮[10]的制備

干燥的紅景天根莖2 kg，經(jīng)過粉碎過篩后按料液比1:15(m/V)，用75%的乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50 ℃下減壓濃縮得到乙醇提取物，將乙醇粗提取物在 0～5 ℃冷置 24 h，4000 r/min高速離心15 min，傾取上清液，減壓濃縮，然后用水溶解，作為上樣液。將上樣液緩慢加入到已處理過的D-101大孔樹脂上，先用蒸餾水洗脫5個柱體積，洗去水溶性雜質(zhì)，再用30%乙醇進(jìn)行洗脫5個柱體積，去除酚類物質(zhì)，然后以50%乙醇和70%乙醇分別洗脫5個柱體積，收集各個組分，減壓濃縮回收乙醇，真空干燥，得到50%洗脫部分和70%洗脫部分。經(jīng)查文獻(xiàn)[9]以及檢測，50%洗脫部分為總皂苷類，70%部分為總黃酮類。

1.2.2 紅景天多糖的制備[11]

稱取100 g干燥紅景天根莖粉末，采用蒸餾水加熱回流法提取紅景天多糖，按m/V=1:10加水回流2.5 h后用紗布過濾，重復(fù)2次，合并兩次所得濾液于4500 r/min離心10 min，所得上清液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60 ℃下減壓濃縮至 600 mL。將濃縮的多糖溶液按體積比為1:1加入預(yù)處理過的D354FD樹脂于50 ℃水浴鍋中水浴3 h，并持續(xù)攪拌，重復(fù)脫色3次，后抽濾得到脫色后的多糖溶液。接著加入150 mL體積比為4:1的三氯甲烷/正丁醇混合液，磁力攪拌10 min，轉(zhuǎn)入離心管，4500 r/min離心5 min，取水相部分，重復(fù)該操作3次去除雜蛋白，所得水相部分于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60 ℃下減壓濃縮至200 mL濃縮液。濃縮液中加入無水乙醇至含醇量達(dá)80%，邊加邊攪拌，得灰白色絮狀沉淀，重復(fù)此操作2次。4 ℃下隔夜靜置，傾出上層清液，余下部分4500 r/min離心8 min得沉淀，回收上層乙醇溶液。沉淀部分用少量無水乙醇洗滌4次，60 ℃下烘干即得紅景天多糖。

1.2.3 紅景天揮發(fā)油的制備[12]

本研究參照2010版《中華人民共和國藥典》一部附錄中揮發(fā)油測定甲法提取紅景天中的揮發(fā)油。具體步驟為：準(zhǔn)確稱取100 g粉碎后的樣品粗粉于5 L圓底燒瓶中，加2 L蒸餾水，搖勻后浸泡12 h，連接揮發(fā)油提取裝置，由上而下，加入蒸餾水到刻度段至溢出為止，煮沸提取至油量不再增加，停止加熱，冷卻30 min，將刻度段蒸餾水放出，再用乙醚將冷凝管中的揮發(fā)油洗至刻度段，用100 mL錐形瓶接收，加入適量無水硫酸鈉除去水，用脫脂棉過濾轉(zhuǎn)移至已稱重的50 mL楔形瓶中，將乙醚旋干，擦干楔形瓶后稱其重量，增重即為揮發(fā)油質(zhì)量，記錄并計算揮發(fā)油得率。

1.2.4 四大類樣品含量的測定

皂苷含量的測定，參照Hu等[13]的方法。

黃酮含量的測定，參照Chang等[14]的方法。

多糖含量的測定，參照崔宏春等[15]的方法。

揮發(fā)油含量的測定，參照劉本等[16]的方法。

1.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)

HSF和HaCaT細(xì)胞用含1%雙抗、10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，放置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 d換液，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行試驗。

1.2.6 細(xì)胞衰老模型的建立[17]

建模實驗分2組，設(shè)空白對照組以及6～7個不同能量UVB照射實驗組。空白對照組加100 μL培養(yǎng)基，不進(jìn)行UVB照射；實驗組加入適量PBS（磷酸緩沖鹽溶液）反復(fù)洗至無色后加入100 μL PBS，分別放在不同能量UVB燈下照射，燈源和培養(yǎng)瓶間距15 cm，實驗組經(jīng)照射后，棄去PBS，加入100 μL培養(yǎng)液，正常培養(yǎng)；24 h后，MTT法檢測2組細(xì)胞的增殖抑制率；

增殖抑制率(%)=(1-照射組 OD 值/空白對照組OD)×100%

據(jù)文獻(xiàn)[18]報道，當(dāng)增殖抑制率為50%時，說明此細(xì)胞建模成功，此時的輻射能量即為衰老模型的實驗?zāi)芰?，后續(xù)實驗均選用此能量為細(xì)胞實驗輻射能量。

1.2.7 實驗分組

分別檢測4大類紅景天樣品對HSF和HaCaT細(xì)胞的衰老修復(fù)能力，每種細(xì)胞實驗設(shè)3個組，分別為陽性對照組（上述確定能量照射，Vc濃度：25、50、100、200、400，800 μg/mL），實驗藥物組（上述確定能量照射，加含不同濃度紅景天 4個樣品的 DMEM完全培養(yǎng)液：25、50、100、200、400、800 μg/mL），空白照射對照組（上述確定能量照射，加正常DMEM完全培養(yǎng)液），每組設(shè)6個平行復(fù)孔。

1.2.8 方法

根據(jù)文獻(xiàn)[19]稍作修改，取處于對數(shù)生長期的皮膚細(xì)胞，以0.25%胰蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度1×104個/mL，接種于96 孔板中，每孔100 μL，常規(guī)培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后進(jìn)行能量照射處理，再加藥保護(hù)繼續(xù)培養(yǎng) 24 h，每孔加20 μL MTT 和 180 μL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，收集細(xì)胞上層培養(yǎng)液按照試劑盒方法測定SOD、GSH-Px、MDA的含量，培養(yǎng)板中繼續(xù)每孔加 150 μL DMSO，震蕩 10 min，用酶標(biāo)儀檢測其在490 nm波長處的OD值，按下式計算樣品對細(xì)胞衰老的修復(fù)效果：

樣品修復(fù)效果=照射加藥 OD值/照射不加藥 OD值×100%

當(dāng)比值＞100%，說明藥物對細(xì)胞損傷起修復(fù)作用；

當(dāng)比值=100%，說明藥物對細(xì)胞損傷沒有作用；

當(dāng)比值＜100%，說明藥物對細(xì)胞起傷害作用。

1.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

使用Excel和SPSS 13軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，MTT試驗檢驗做6個復(fù)孔平行，其它實驗均做3組平行實驗，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)方差表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 含量測定結(jié)果

表1 紅景天四大類粗提物的含量測定結(jié)果Table 1 The determination results of four kinds of extracts of Rhodiola

2.2 細(xì)胞衰老模型的建立

紫外照射是引起皮膚老化的一種重要方式，它可以輕易的進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，引起脂質(zhì)過氧化、DNA損傷等，從而使細(xì)胞衰老[20]。為了建立紫外照射對皮膚細(xì)胞的損傷衰老模型，采用不同能量（50、60、70、80、90、100 mJ/cm2）處理皮膚細(xì)胞，通過細(xì)胞的增殖抑制率大小來反映樣品對光老化衰老的修復(fù)能力。

2.2.1 不同UVB能量照射對HSF細(xì)胞的細(xì)胞增殖影響

圖1 不同能量對HSF細(xì)胞增殖抑制的影響Fig.1 Effects of different energies on the proliferation inhibition of HSF cell

由圖1可知，隨著輻射能量的增大，細(xì)胞的增殖抑制率越高，即細(xì)胞死亡越多，說明紫外對細(xì)胞有一定的殺害能力。

當(dāng)輻射能量在50 mJ/cm2時，細(xì)胞增殖抑制率為20%；當(dāng)輻射能量在100 mJ/cm2時，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到65%；而當(dāng)輻射能量正好達(dá)到90 mJ/cm2，細(xì)胞的增殖抑制率為50%。根據(jù)文獻(xiàn)得增殖抑制率為50%時HSF細(xì)胞建模成功，故在后續(xù)實驗過程中，均選用90 mJ/cm2照射 HSF 細(xì)胞。

2.2.2 不同能量UVB照射對HSF細(xì)胞生長狀態(tài)的影響

圖2 不同能量UVB照射對HSF細(xì)胞生長形態(tài)的影響Fig.2 Effects of different UVB energy rays on growth morphology of HSF cell

正常情況下，HSF細(xì)胞貼壁生長，成束狀或纖維狀，數(shù)量較多。隨著紫外輻射能量的加大，細(xì)胞數(shù)量減少，且形態(tài)變得不規(guī)則。當(dāng)達(dá)到100 mJ/cm2能量照射時，細(xì)胞大部分死亡，形態(tài)變得難以分辨；在照射能量為90 mJ/cm2時，細(xì)胞存活率為50%，此時的細(xì)胞增殖率更適合實驗要求，故選用此能量進(jìn)行實驗。

2.2.3 不同能量UVB照射對HaCaT細(xì)胞的細(xì)胞增殖影響

圖3 不同能量對HaCaT細(xì)胞增殖抑制的影響Fig.3 Effects of different energies on the proliferation inhibition of HaCaT cell

同樣，由圖3可知，隨著輻射能量的增大，細(xì)胞死亡得越多。輻射能量在40 mJ/cm2時，細(xì)胞增殖抑制率為20%；當(dāng)輻射能量在90 mJ/cm2時，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到60%；而當(dāng)輻射能量達(dá)到80 mJ/cm2，細(xì)胞的增殖抑制率正好為 50%，說明此能量照射下，HaCaT細(xì)胞建模成功，在后續(xù)實驗過程中，均選用80 mJ/cm2能量照射HaCaT細(xì)胞。

2.2.4 不同能量UVB照射對HaCaT細(xì)胞生長狀態(tài)的影響

圖4 不同能量UVB照射對HaCaT細(xì)胞生長形態(tài)的影響Fig.4 Effects of different UVB energy rays on growth morphology of HaCaT cell

正常情況下，HaCaT細(xì)胞為牢固貼壁生長的不規(guī)則細(xì)胞，多為橢圓形和多角形。細(xì)胞在紫外照射下，數(shù)量逐漸減少，形態(tài)發(fā)生巨大變化；當(dāng)輻射能量達(dá)到90 mJ/cm2時，細(xì)胞大部分死亡，且形態(tài)已分辨不出；在照射能量為80 mJ/cm2時，實驗存活率為50%，此時的細(xì)胞增殖率更適合實驗要求，故選用此能量進(jìn)形實驗。

2.3 不同樣品對HSF細(xì)胞抗衰老效果的影響

圖5 不同紅景天樣品對輻射后HSF細(xì)胞抗衰老效果圖Fig.5 Effects of different Rhodiola samples on anti-aging restoration of HSF cell after radiation

本實驗以HSF細(xì)胞為研究目標(biāo)，采用MTT法檢測90 mJ/cm2的UVB照射后的HSF細(xì)胞經(jīng)紅景天4大類樣品作用24 h后的光老化修復(fù)作用的情況，結(jié)果如圖5所示。由圖5可知，隨著濃度的增大，樣品的修復(fù)細(xì)胞衰老效果越來越好，且呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系，但是不同樣品在不同濃度下對 HSF細(xì)胞衰老修復(fù)能力各有不同。其中總皂苷樣品的衰老修復(fù)效果最好，且好于陽性對照Vc；多糖和黃酮樣品在低濃度時，效果一樣，在較高濃度時，多糖的效果好于黃酮；揮發(fā)油樣品的效果一般，在低濃度時對受損傷細(xì)胞幾乎沒有抗衰老能力，較高濃度開始表現(xiàn)出修復(fù)能力。

2.4 不同樣品對 90 mJ/cm2的 UVB 照射后HSF細(xì)胞衰老修復(fù)生長狀態(tài)的影響

圖6 不同樣品（800 μg/mL）對90 mJ/cm2的UVB照射后HSF細(xì)胞生長形態(tài)的影響Fig.6 Effects of different samples (800 g/mL) on the growth morphology of HSF cells after UVB irradiation of 90 mJ/cm2

由上圖細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量可看出，HSF細(xì)胞在800 μg/mL樣品干預(yù)24 h后，對細(xì)胞衰老有較好的修復(fù)作用。與未加藥照射組相比，總皂苷的修復(fù)能力最強(qiáng)，細(xì)胞纖維狀形態(tài)最為明顯，數(shù)量最多，且好于陽性對照Vc；多糖和黃酮對細(xì)胞的修復(fù)能力不相上下，細(xì)胞形態(tài)呈纖維狀，數(shù)量未明顯減少；相對而言，揮發(fā)油的效果一般，細(xì)胞之間連接疏松，間隙變大，形態(tài)各異，突起增加，呈不規(guī)則形，但是和未加藥照射組對比，四種樣品的細(xì)胞數(shù)量還是較多，說明紅景天四大類粗提物都具有抗衰老效果。

表2 不同樣品（800 μg/mL）對HSF細(xì)胞中SOD、GSH-Px、MDA的影響Table 2 Effects of different samples (800 μg/mL) on SOD,GSH-Px and MDA in HSF cells

2.5 不同樣品對HSF細(xì)胞中SOD、GSH-Px、MDA活性的影響

由800 μg/mL不同樣品作用于細(xì)胞24 h后測定細(xì)胞上清液中相關(guān)酶活性數(shù)據(jù)如表 2，可發(fā)現(xiàn)與空白組相比，模型組中SOD、GSH-Px活性顯著降低（p＜0.05），MDA活性顯著升高（p＜0.05）；和模型組相比，四個樣品組中 SOD、GSH-Px活性顯著升高（p＜0.05），MDA活性顯著降低（p＜0.05），說明四大類樣品對HSF細(xì)胞抗衰老可能與抗氧化，增強(qiáng)清除機(jī)體自由基的機(jī)制相關(guān)。

2.6 不同樣品對 HaCaT細(xì)胞抗衰老效果的影響

圖7 不同紅景天樣品對輻射后HaCaT細(xì)胞抗光老化修復(fù)效果圖Fig.7 Effects of different Rhodiola samples on anti-light aging restoration of HaCaT cell after radiation

本實驗以HaCaT細(xì)胞為研究目標(biāo)，采用MTT法檢測80 mJ/cm2的UVB照射后的HaCaT細(xì)胞經(jīng)紅景天4種樣品作用24 h后的光老化修復(fù)作用的情況，結(jié)果如圖7所示。由圖7可知，隨著樣品濃度的增大，其修復(fù)細(xì)胞衰老效果越來越好，呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系，但是不同樣品在相同濃度下對 HFF老化修復(fù)能力也各有不同。其中總皂苷樣品的抗衰老效果最好，最明顯，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)好于陽性對照Vc；多糖、黃酮和揮發(fā)油樣品在低濃度時沒有表現(xiàn)出強(qiáng)的抗衰老能力，但高濃度時有一定的抗衰老效果。

2.7 不同樣品對 80 mJ/cm2的 UVB 照射后HaCaT細(xì)胞衰老修復(fù)生長狀態(tài)的影響

由圖 8可看出，四大類 800 μg/mL樣品干預(yù)HaCaT細(xì)胞24 h后，都對細(xì)胞衰老起較好的修復(fù)作用。和照射未加藥組對比，皂苷、黃酮、多糖和揮發(fā)油的細(xì)胞數(shù)量均增多，細(xì)胞形態(tài)呈較好的梭狀；其中皂苷的效果最為明顯，且好于陽性對照Vc組，細(xì)胞數(shù)量最多，形態(tài)呈梭形無明顯變化；多糖、黃酮和揮發(fā)油樣品對細(xì)胞的修復(fù)能力一樣，細(xì)胞形態(tài)呈梭狀或橢球狀，數(shù)量略微減少，細(xì)胞變圓縮短；但是和未加藥的照射組對比，細(xì)胞增殖未受到明顯限制，再一次說明紅景天具有抗衰老效果。

圖8 不同樣品（800 μg/mL）對80 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT細(xì)胞生長形態(tài)的影響Fig.8 Effects of different samples (800 μg/mL) on the growth morphology of HaCaT cell after UVB irradiation of 80 mJ/cm2

2.8 不同樣品對HaCaT細(xì)胞中SOD、GSH-Px、MDA活性的影響

表3 不同樣品（800 μg/mL）對HaCaT細(xì)胞中SOD、GSH-Px、MDA的影響Table 3 Effects of different samples (800 μg/mL) on SOD,GSH-Px and MDA in HaCaT cells

由800 μg/mL不同樣品作用于細(xì)胞24 h后測定細(xì)胞上清液中相關(guān)酶活性數(shù)據(jù)如表 3。我們發(fā)現(xiàn)與空白組相比，模型組中 SOD、GSH-Px活性顯著降低（p＜0.05），MDA活性顯著升高（p＜0.05）；和模型組相比，四個樣品組中 SOD、GSH-Px活性顯著升高（p＜0.05），MDA活性顯著降低（p＜0.05），說明四大類樣品對HaCaT細(xì)胞抗衰老可能與同HSF細(xì)胞一致，也和抗氧化，增強(qiáng)清除機(jī)體自由基的機(jī)制相關(guān)。

3 結(jié)論

3.1 紅景天經(jīng)過加熱回流提取，真空濃縮后過D-101大孔樹脂，不同梯度乙醇洗脫得到紅景天總皂苷，總黃酮，得率分別為8.54%和5.38%；利用水提法，脫色脫蛋白純化后得到紅景天粗多糖，得率為8.14%；醇提加熱回流法得到紅景天揮發(fā)油，得率為0.12%。并測定了相應(yīng)的含量，得到皂苷的純度為56.82%，黃酮的純度為34.14%，多糖的純度為55.58%，揮發(fā)油的純度為45.28%，整體上說，傳統(tǒng)的加熱提取法的得率和純度都不高。

3.2 角質(zhì)形成細(xì)胞和纖維細(xì)胞位于表皮層，是 UVB波長能量作用的主要靶部位。UVB誘發(fā)紅斑和日曬傷，并與皮膚衰老發(fā)生密切相關(guān)。利用中波紫外照射細(xì)胞，MTT法檢測細(xì)胞存活率，建立了HSF和HaCaT細(xì)胞體外光老化衰老模型：未照射組正常培養(yǎng)24 h后的細(xì)胞形態(tài)一致，邊界清楚，排列緊密，而紫外照射的細(xì)胞隨著照射能量增加，細(xì)胞數(shù)量減少，貼壁性降低，細(xì)胞間隙越來越大，在90～100 mJ/cm2時，細(xì)胞裂解成細(xì)胞碎片，并有大量漂浮細(xì)胞，因此選定細(xì)胞存活率為 50%左右時的照射能量為模型能量，其中HaCaT細(xì)胞光老化衰老模型輻射能量為80 mJ/cm2，HSF細(xì)胞光老化衰老模型輻射能量為90 mJ/cm2。

3.3 在以HSF和HaCaT細(xì)胞體外光老化衰老模型基礎(chǔ)上測定了紅景天4個樣品的效果，通過觀察細(xì)胞存活率、最大濃度下細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞上清液中 SOD、GSH-Px、MDA的含量活性得出結(jié)論，紅景天四大類抗衰老效果分別為：皂苷＞多糖＞黃酮＞揮發(fā)油，其中總皂苷抗衰老修復(fù)效果顯著高于其它3種樣品，且與陽性對照組相比，皂苷組細(xì)胞數(shù)目較多，形態(tài)未發(fā)生明顯變化，并且與其濃度成量效關(guān)系，細(xì)胞上清液中測得的抗氧化酶活性最高；據(jù)文獻(xiàn)報道，紅景天抗光老化衰老效果可能是紅景天皂苷對皮膚角質(zhì)層有很好的親和性和穿透力，能有效進(jìn)至皮膚層，并逐步釋放出來，起到修復(fù)作用，此外皂苷還有促進(jìn)細(xì)胞更新的作用，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長，從而增強(qiáng)皮膚的彈性，延緩皮膚皺紋的發(fā)生，達(dá)到抗光老化衰老的目的；多糖組抗衰老的效果可能是通過增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，提高抗氧化能力，直接清除自由基等途徑；黃酮組的效果可能是紅景天中含有的抗氧化的黃酮類是廣譜ROS清除劑，可提高肝中SOD活性及非酶抗氧化物質(zhì)GSH-Px的含量，減緩機(jī)體中自由基的生成，起到抗光老化衰老的作用；具體紅景天的抗光老化衰老機(jī)制有待進(jìn)一步研究，此項研究只為紅景天在抗衰老，抗輻射方面提供了研究基礎(chǔ)，對于紅景天中具體起作用成分可進(jìn)一步的分離純化，從而更全面地對紅景天進(jìn)行研究。