孟茜　呂曉虹

【摘要】本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞（MACO）模型，阻斷血流時(shí)間改進(jìn)延長(zhǎng)至2 h，之后給予尼卡地平進(jìn)行治療，觀察一下大鼠的腦梗死的面積和鏡下的細(xì)胞凋亡的程度，用顯微計(jì)數(shù)尺對(duì)大鼠的海馬CA1區(qū)面積為1 mm范圍內(nèi)正常的神經(jīng)元以及凋亡神經(jīng)元進(jìn)行計(jì)數(shù)。從而探究尼卡地平對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】尼卡地平；腦缺血損傷；腦缺血再灌注損傷

【中圖分類號(hào)】R965 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2018.11..02

1 實(shí)驗(yàn)原理

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，缺血性腦血管病已經(jīng)成為危害人類健康的最主要疾病之一，他的治療方式原則是及時(shí)有效的恢復(fù)缺血區(qū)的血液再次灌注。然而在有些情況下腦缺血之后血流的再灌注不僅沒(méi)有能夠使得使組織功能恢復(fù)，反而使缺血所導(dǎo)致的功能的障礙和結(jié)構(gòu)的破壞進(jìn)一步加重，這種現(xiàn)象就是缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury），抑制腦的缺血再灌注損傷已成為了缺血性腦損傷治療的重要環(huán)節(jié)[1]。常見(jiàn)的藥物治療主要是以下方面：自由基清除劑、鈣通道阻滯劑、抑制興奮性氨基酸毒性作用、制過(guò)量NO生成、抑制白細(xì)胞作用等[1]。

尼卡地平能夠加快動(dòng)脈血流速度，由于尼卡地平對(duì)基底動(dòng)脈及冠狀動(dòng)脈藥理反應(yīng)十分靈敏，因此在臨床應(yīng)用中對(duì)腦缺血患者使用尼卡地平類藥物，不僅具有降低血壓的作用，還可以改善心，腦等重要臟器的血流量[2]。尼卡地平作為二氫吡啶類鈣離子拮抗藥在抗腦缺血再灌注損傷方面，國(guó)內(nèi)外研究較少。有研究表明：尼卡地平為一種比較新型的L型Ca2+拮抗劑，它能減少腦缺血之后細(xì)胞Ca2+內(nèi)流，從而降低腦缺血再灌注損傷過(guò)程中的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，可能有腦保護(hù)作用[3] 。

2 技術(shù)設(shè)計(jì)

沙土大鼠30只

實(shí)驗(yàn)組：20只，采用栓線法制備大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型阻斷2 h，于再灌注前20 min，再灌注后1 h，3 h，6 h，分別給予腹腔內(nèi)注射尼卡地平（1 mg/kg）

假手術(shù)組：5只，除不插栓線外其余步驟同上。并于再灌注前20 min，再灌注后12 h、1 d、2 d、3 d給予腹腔注射等量的等滲生理鹽水。

對(duì)照組：5只，采用栓線法制備大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型，于再灌注前20 min，再灌注后12 h、1 d、2 d、3 d給予腹腔注射等量的等滲生理鹽水。

取腦組織做以下檢查：

1、腦組織大體病理變化

2、腦組織顯微鏡下的病理變化

3、正常、凋亡神經(jīng)元計(jì)數(shù)

2.1 模型的制備

選取沙土鼠30只，制備大鼠右側(cè)MCAO模型采用Zealonga改良線栓法。

沙土鼠用10%水合氯醛采用腹腔內(nèi)注射麻醉。以仰臥位來(lái)固定，采用頸部正中線切口，沿著胸鎖乳突肌的內(nèi)側(cè)緣分離肌肉和筋膜，分離出左側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），在CCA的遠(yuǎn)心端和近心端ECA處來(lái)掛線備用。采用微動(dòng)脈夾暫時(shí)性的夾閉ICA，然后在近心端處結(jié)扎CCA、ECA，然后再在距CCA分叉部大約4 mm處剪開(kāi)一個(gè)小口，將栓線插入到ICA處，這時(shí)用繞在CCA遠(yuǎn)心端處的細(xì)線輕輕的系牢栓線。用眼科鑷來(lái)輕輕推動(dòng)栓線，從血管的分叉處來(lái)開(kāi)始算距離，在插人深度為18 mm的時(shí)候，緊緊的系牢CCA遠(yuǎn)心端處的細(xì)線。阻斷其血流2 h后，再抽出栓線，從而實(shí)現(xiàn)再灌注。

2.2 標(biāo)本的采集

對(duì)照組和尼卡地平處理組在缺血再灌注前20 min，再灌注后1h 3h 6h分別處理。

以0.5%戊巴比妥鈉40 mg/kg對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行腹腔注射麻醉后，打開(kāi)胸腔，從而暴露心臟，然后先以生理鹽水150 mL來(lái)快速的沖洗，再把血液全部沖洗掉，接著可以用4%的多聚甲醛（0.1 mmol/L，pH7.4）150 mL來(lái)緩慢的灌注，從而充分固定腦組織。接著取下腦組織，用4%的多聚甲醛來(lái)再固定12～24 h，從而在前囟后1 mm處冠狀切取2 mm的腦組織塊，來(lái)常規(guī)石蠟包埋做病理的切片（5微米）。按照需要挑相鄰的兩片，其中一片用于HE染色，另外一片用于TUNEL染色。

3 數(shù)據(jù)收集

4 結(jié)果結(jié)論

尼卡地平對(duì)腦缺血再灌注損傷有一定抗凋亡作用。尼卡地平處理組正常錐體細(xì)胞數(shù)最多，受損細(xì)胞數(shù)量較少。原因可能是：腦缺血再灌注會(huì)損害腦組織，而采用尼卡地平可以避免這種情況發(fā)生；腦缺血癥狀緩解后鈣離子會(huì)快速回流到細(xì)胞內(nèi)，從而促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝，恢復(fù)大腦正常供血。

參考文獻(xiàn)

[1] 王向慧，王 迪.尼莫地平對(duì)大鼠急性腦缺血再灌注損傷NF-κB和caspase- 3蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)生化藥物雜志，2015（1）：10-13.

[2] 劉 賦，張 強(qiáng)，張 宇，等.腦缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)病理變化與細(xì)胞凋亡的研究[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志》，2007，36（4）：395-397.

本文編輯：王雨辰