李 崢

(四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072)

高遷移率族蛋白B1(HMGB1)為細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的一種DNA結(jié)合蛋白，能夠由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等通過(guò)囊泡介導(dǎo)的分泌通路分泌到細(xì)胞外[1]。相關(guān)研究報(bào)道，細(xì)胞外的HMGB1是炎癥因子之一，可以選擇性地與Toll受體、糖基化終末產(chǎn)物受體等多種受體相結(jié)合，激活內(nèi)皮細(xì)胞、T細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及自然殺傷細(xì)胞等，導(dǎo)致趨化因子、炎性因子等多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，參與免疫、炎癥等相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[2-3]。亦有研究指出，HMGB1參與了燒傷后患者多器官功能障礙綜合征(MODS)、膿毒癥的病理過(guò)程，有可能成為改善患者預(yù)后的一個(gè)重要干預(yù)靶標(biāo)[4]。本研究探討了嚴(yán)重?zé)齻l(fā)MODS患者血清HMGB1水平的變化，并分析了HMGB1與患者細(xì)胞免疫功能的關(guān)系?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取醫(yī)院2014年1月—2017年1月收治的46例嚴(yán)重?zé)齻颊咦鳛檠芯繉?duì)象，年齡均在18歲以上，燒傷面積均在30%以上，受傷之前均無(wú)嚴(yán)重心、肝、腎等臟器疾患。MODS的診斷參照Marshall標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[5]：①循環(huán)功能衰竭，收縮壓在12 kPa，且持續(xù)時(shí)間在1 h以上或者需要應(yīng)用血管活性類(lèi)藥物以維持血壓；②中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能衰竭，哥斯拉昏迷評(píng)分在7分以下；③胃腸功能衰竭：出現(xiàn)明顯上消化道出血，且24 h出血量在400 mL以上；④肝功能衰竭，谷丙轉(zhuǎn)氨酶高于正常值2倍，膽紅素>34.2 μmol/L；⑤腎衰竭，血肌酐>176.8 μmol/L；⑥呼吸系統(tǒng)衰竭，氧合指數(shù)<200 mmHg，肺動(dòng)脈楔壓<2.4 kPa，X射線胸片可見(jiàn)雙肺存在斑片狀陰影。46例患者中，男34例，女12例；年齡20～65(39.29±8.47)歲；并發(fā)MODS 17例，無(wú)MODS 29例。根據(jù)是否并發(fā)MODS分為MODS組和無(wú)MODS組，MODS組男13例，女4例；年齡21～63(39.06±8.51)歲；燒傷面積35%～90%。無(wú)MODS組男21例，女8例；年齡20～65(39.67±8.79)歲；燒傷面積32%～93%。2組患者性別、年齡、燒傷面積比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。選取同時(shí)期門(mén)診健康體檢者40例作為對(duì)照組，男24例，女16例；年齡20～65(40.12±8.61)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)研究同意，并與患者及家屬簽署知情同意書(shū)。

1.2方法 分別于傷后第1，3，5，7，14天抽取患者空腹靜脈血5 mL，對(duì)照組則于體檢時(shí)抽取空腹靜脈血5 mL，抗凝后以2 500 r/min離心，離心20 min后提取血清，放置于-20 ℃ 冰箱中保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定HMGB1水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司，嚴(yán)格按參照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。采用噻唑藍(lán)法測(cè)定T淋巴細(xì)胞增殖活性，酶標(biāo)儀為美國(guó)Bio-Rad伯樂(lè)-680型全自動(dòng)酶標(biāo)儀。通過(guò)美國(guó)BD公司生產(chǎn)流式細(xì)胞儀及其熒光標(biāo)記抗體測(cè)定受試者的CD4+、CD8+，計(jì)算CD4+/CD8+比值。

2 結(jié) 果

2.13組血清HMGB1、T淋巴細(xì)胞增殖活性及CD4+/CD8+比較 3組間血清HMGB1、T淋巴細(xì)胞增殖活性及CD4+/CD8+均存在明顯差異(P均<0.05)；MODS組、無(wú)MODS組血清HMGB1水平均明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)，T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)；MODS組血清HMGB1水平明顯高于無(wú)MODS組(P<0.05)，T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+均明顯低于MODS組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組血清HMGB1、T淋巴細(xì)胞增殖活性及CD4+/CD8+比較

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與MODS組比較，P<0.05。

2.2患者組不同時(shí)間點(diǎn)血清HMGB1水平比較患者組傷后第3天血清HMGB1水平均明顯高于第1天(P<0.05)；MODS組傷后第1，3，5，7，14天血清HMGB1水平均明顯高于無(wú)MODS組(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 患者組不同時(shí)間點(diǎn)血清HMGB1水平比較

注：①與第1天比較，P<0.05。

2.3患者組不同時(shí)間點(diǎn)T淋巴細(xì)胞增殖活性比較患者組傷后第3天T淋巴細(xì)胞增殖活性均明顯低于第1天(P均<0.05)；MODS組傷后第1，3，5，7，14天T淋巴細(xì)胞增殖活性均明顯低于無(wú)MODS組(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4患者組不同時(shí)間點(diǎn)CD4+/CD8+比較 MODS組傷后第1，3，5，7，14天CD4+/CD8+均明顯低于無(wú)MODS組(P均<0.05)。見(jiàn)表4。

表3 患者組不同時(shí)間點(diǎn)T淋巴細(xì)胞增殖活性比較

注：①與第1天比較，P<0.05。

表4 患者組不同時(shí)間點(diǎn)CD4+/CD8+比較

2.5HMGB1與T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，HMGB1與T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+均呈顯著負(fù)相關(guān)性(r=-2.796，-3.042；P均<0.05)。

3 討 論

MODS是嚴(yán)重?zé)齻颊叱Ｒ?jiàn)的一種并發(fā)癥，是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。隨著對(duì)燒傷患者病理生理認(rèn)識(shí)以及燒傷救治水平的不斷提高，整體燒傷治愈率明顯提高，但是燒傷后并發(fā)MODS的預(yù)防及治療仍然需要不斷地總結(jié)及探索。臨床研究指出，HMGB1參與了膿毒癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程，是細(xì)菌以及其他毒素致死效應(yīng)的一個(gè)重要細(xì)胞因子[6]。由于膿毒癥會(huì)進(jìn)一步加重造成MODS的發(fā)生，因而這為燒傷并發(fā)MODS發(fā)生發(fā)展機(jī)制以及干預(yù)治療提供了新的思路。

本研究中，嚴(yán)重?zé)齻颊哐錒MGB1水平明顯升高，且在傷后第3天時(shí)達(dá)到高峰。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，隨著干預(yù)治療的開(kāi)展，患者組血清HMGB1水平均明顯降低，不過(guò)在傷后的第1，3，5，7，14天，MODS組患者血清HMGB1水平均顯著高于無(wú)MODS組患者，無(wú)MODS組患者血清HMGB1水平降低程度更加明顯，而MODS組患者血清HMGB1水平則相對(duì)處于較高水平，提示血清HMGB1水平與嚴(yán)重?zé)齻颊卟l(fā)MODS有密切關(guān)系。嚴(yán)重?zé)齻鸬募?xì)菌感染以及休克等因素，使得體內(nèi)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞被激活，導(dǎo)致大量炎癥因子生成和釋放，進(jìn)而促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等大量分泌HMGB1并進(jìn)入血液中，從而提高了血清HMGB1水平；同時(shí)，燒傷之后造成組織缺血缺氧，進(jìn)而使得受損或者壞死的細(xì)胞核內(nèi)的HMGB1分泌至細(xì)胞外，從而引起血清HMGB1水平在傷后的第1，3天內(nèi)不斷升高[7-8]。早期相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究亦指出，通過(guò)給予HMGB1抑制劑治療，可顯著降低膿毒癥大鼠HMGB1表達(dá)水平，有助于防治膿毒癥及MODS[9]。因此，HMGB1可能在嚴(yán)重?zé)齻颊進(jìn)ODS發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了重要作用。

本研究中，MODS組患者傷后第1，3，5，7，14天T淋巴細(xì)胞增殖活性以及CD4+/CD8+均明顯低于無(wú)MODS組，提示燒傷后并發(fā)MODS的患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能受到嚴(yán)重?fù)p害。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，HMGB1與T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+均呈顯著負(fù)相關(guān)性，即血清HMGB1水平越高，患者細(xì)胞免疫功能越差，提示HMGB1與嚴(yán)重?zé)齻颊呒?xì)胞免疫功能紊亂有密切關(guān)系，但其具體作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究證實(shí)。李俊聰?shù)萚10]的研究指出，通過(guò)抑制HMGB1過(guò)表達(dá)，可減輕嚴(yán)重?zé)齻笫笃⑴K的T細(xì)胞免疫功能。由于免疫功能紊亂是造成嚴(yán)重?zé)齽?chuàng)傷患者發(fā)生全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥以及MODS的重要因素，因而在臨床中對(duì)于嚴(yán)重?zé)齻颊呖山o予HMGB1抑制劑類(lèi)藥物，以改善免疫功能，減少膿毒癥及MODS的發(fā)生，從而改善患者預(yù)后[11]。

綜上所述，嚴(yán)重?zé)齻l(fā)MODS患者血清HMGB1水平明顯升高，HMGB1可能參與了嚴(yán)重?zé)齻颊進(jìn)ODS及細(xì)胞免疫功能損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。