盧繼華

（朝陽市朝牧種畜場有限責任公司，遼寧 朝陽 122000）

發(fā)展現(xiàn)代肉羊產(chǎn)業(yè)，改進經(jīng)營管理方式，完善產(chǎn)業(yè)鏈條和提升肉羊品牌，對進一步促進農(nóng)牧業(yè)結構優(yōu)化升級、保護生態(tài)、增加農(nóng)民收入、加快綠色農(nóng)畜產(chǎn)品生產(chǎn)建設具有戰(zhàn)略意義和現(xiàn)實意義。朝陽市種羊場于2012年引進了鮮胚移植技術，其優(yōu)點為：統(tǒng)一飼養(yǎng)、整齊度高，減少勞動力，有利于市場銷售，利于訂單農(nóng)業(yè)的發(fā)展。本著為國家肉羊核心育種場提供技術資料儲備，同時培訓改良服務分站技術人員的目的，我場進行了不同年齡不同品種肉羊鮮胚移植妊娠率比對試驗。

1 材料與方法

1.1 供體羊 選擇遺傳素質(zhì)優(yōu)秀、繁殖性能良好、營養(yǎng)狀況良好、體格健壯、沒有疾病的羊作為供體羊。本試驗選取了50只不同月齡的白頭杜泊羊和50只白頭薩福克羊作為供體羊分組并標記：3月齡白頭杜泊羊10只，分為第一組；5月齡白頭杜泊羊10只，分為第二組；9月齡白頭杜泊羊10只，分為第三組；11～23月齡白頭杜泊羊20只，分為第四組；11～23月齡白頭薩?？搜?0只，分為第五組。

1.2 藥品及器材 藥品：胚胎培養(yǎng)液、冰袋、生理鹽水、苯扎氯銨、碘酒、獸用青霉素、黃嘌呤粉、FSH、孕馬血清、CIDR、羊用陰道海綿塞、氯前列醇（PG）、黃體酮、麻醉劑（2%安靜松）、蘇醒靈等。器材：高壓滅菌器、20 mL注射器、10 mL注射器、5 mL注射器、1 mL注射器、胚胎移植手術架、手術刀片、醫(yī)用縫合線、立體顯微鏡、紅胚管、收集方盤、培養(yǎng)玻璃皿、衛(wèi)生紙、醫(yī)用小噴壺、有色標記筆、宮頸擴張器、胚胎移植裝置、獸用剪刀、獸用手術剪、獸用解剖刀、長止血鉗、毛巾夾、持針器、獸用手術銼、獸用縫合針、傷口巾、止血紗布、脫脂棉、臉盆等。

1.3 時間和地點2017年8～10月在朝陽市朝牧種羊場進行。

1.4 超數(shù)排卵處理 供體母羊超排采用促卵泡素（FSH）遞減注射配合PMSG的方法。在同期發(fā)情后第10天開始，連續(xù)3 d，2次/d，間隔12 h注射FSH。第1次注射FSH的同時注射PMSG。第5次注射FSH的同時撤栓并肌肉注射PG。第6次注射FSH之前對供體母羊進行試情，對發(fā)情的供體母羊頸靜脈注射黃體生成素（LH）。

1.5 供體受體羊發(fā)情鑒定 受體母羊取出海綿塞后，將公羊放入母羊群中，通過試情方法測試母羊發(fā)情情況，每天早晚各1次。挑選發(fā)情母羊，登記耳號，標記后分組；供體母羊撤去CIDR栓后采用同樣的試情方法進行發(fā)情鑒定，挑出發(fā)情母羊，記錄耳號，同時頸靜脈注射促黃體生成素，并在12 h后人工輸精。

1.6 子宮角輸精 手術前1 d停止喂食，自由飲水，并清潔手術部位。術前采用硬膜外麻醉聯(lián)合局部浸潤麻醉。手術部位皮膚先用2%～4%碘酒消毒，干燥后，用75%酒精棉擦去碘酒。將創(chuàng)巾固定在手術區(qū)域并暴露手術區(qū)域。使用外科手術刀將皮膚切開4～6 cm切口，沿著肌纖維的方向通過鈍性分離剝開肌肉，最后切開腹膜。切口時注意及時止血。操作者將食指和中指從切口插入腹腔中以接觸子宮角，用兩個手指夾住并將子宮角引導至傷口表面。觀察卵巢表面的排卵點和卵泡發(fā)育情況并記錄。子宮拉出切口，將稀釋的高質(zhì)量精液送入子宮角。在輸精前觀察卵巢的卵泡發(fā)育情況和排卵點情況，以確定輸精量是否輸精。子宮角一側通常推入0.2～0.6 mL精液。

1.7 閉合手術 行子宮角受精后，手術部位，特別是出血或凝血部位，用含有青霉素的生理鹽水沖洗。凝塊清除后，進行縫合。在第一層中，用10～12根絲線縫合腹膜，然后散布少量青霉素。在第二層中，對皮膚和肌肉進行結扎和縫合?？p合過程要注意傷口封閉以避免傷口退化和外翻?？p合針和針之間的距離約為0.5 cm，距離應均勻，所有結打在同一側。最后，用鑷子處理切口中的真空皮膚以對齊傷口邊緣，然后切口用5%碘酒消毒。

1.8 胚胎移植 將母羊放在保定架上仰臥保定，切開乳房一側的腹壁，將子宮角和輸卵管拔出切口。如果胚胎來自供體的輸卵管，將包含胚胎的細吸管插入受體的輸卵管口中，緩慢注入輸卵管。從供體子宮角的頂端獲得的胚胎，在距離子宮角頂端12 cm處用鈍針刺破子宮，然后將連接了細導管的注射器裝載胚胎后插入子宮中，輕輕將含有胚胎的注射液推送入子宮，迅速使子宮和輸卵管復位，然后縫合腹壁。

1.9 數(shù)據(jù)處理 使用軟件檢驗分析數(shù)據(jù)。

2 結果與分析

2.1 不同種類和不同月齡的綿羊沖胚效果

表1 不同品種和不同月齡供體羊沖胚情況統(tǒng)計Table 1 Statistics of embryo flushing in different breeds and ages of donors

沖胚結果表明，使用130～140 IU的促卵泡素，10只3月齡的白頭杜泊羊，獲得的頭均胚胎數(shù)為3.8個，可用胚胎數(shù)為3.6個。使用145～155 IU促卵泡素處理的10只5月齡的白頭杜泊羊平均獲得5.5個胚胎，平均可用胚胎數(shù)為5.1枚。使用155～160 IU的促卵泡素處理的10只9月齡的白頭杜泊羊頭均獲得胚胎數(shù)是6.6個，可用胚胎數(shù)5.8個。使用170～180 IU促卵泡素處理的20只11～23月齡的白頭杜泊羊，頭均獲得胚胎數(shù)為7.0個，可用胚胎數(shù)為6.8。使用160～170 IU促卵泡素處理的50只11～23月齡的白頭薩?？搜?，頭均獲得胚胎8.3個，可用胚胎8.1個。統(tǒng)計分析結果顯示，與11～23月齡供體相比，3月齡時的頭均獲得胚胎數(shù)可用胚胎數(shù)相比，差異顯著（P＜0.05）。其他各月齡組之間相比，獲得的胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)均無顯著差異（P＞0.05）。11～~23月齡的白頭薩?？搜蚝?1～23月齡白頭杜泊羊之間，獲得的胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)沒有顯著差異（P＞0.05）。

2.2 移植結果

表2 不同月齡不同品種鮮胚移植妊娠率統(tǒng)計Table 2 Statistics of pregnancy rates in different ages and breeds

3月齡10只白頭杜泊羊共沖出38枚胚胎，可用胚胎為33枚，33枚鮮胚移植33只受體母羊，移植妊娠率為40%。5月齡10只白頭杜泊羊共沖出36枚胚胎，可用胚為33枚，33枚鮮胚移植33只受體母羊，移植妊娠率為48%。9月齡10只白頭杜泊羊共沖出52枚胚胎，可用胚胎為50枚，45枚鮮胚移植45只受體母羊，移植妊娠率為55%。11～23月齡20只白頭杜泊羊共沖出188枚胚胎，可用胚為184枚，184枚鮮胚移植184只受體母羊，移植妊娠率為71%。11～23月齡50只白頭薩?？搜蚬矝_出355枚胚胎，可用胚為346枚，346枚鮮胚移植346只受體羊，移植妊娠率為64%。

3 討論

本試驗對于不同月齡的白頭杜泊進行沖胚，結果表明，3月齡、5月齡、9月齡和11～23月齡白頭杜泊頭均沖胚數(shù)和可用胚數(shù)分別為4.6枚和4.5枚、5.7枚和5.4枚、6.8枚和5.9枚、8.0枚和7.6枚。移植妊娠率分別為40%、48%、55%、71%。進一步統(tǒng)計分析結果表明，3月齡白頭杜泊的沖胚數(shù)和可用胚數(shù)與11～23月齡白頭杜泊沖胚數(shù)和可用胚數(shù)之間存在顯著差異（P＜0.05）。不同月齡白頭杜泊移植妊娠率差異不顯著（P＞0.05）。成年白杜泊沖胚數(shù)和可用胚數(shù)比3月齡和5月齡杜泊高的原因可能是3月齡和5月齡杜泊均為初產(chǎn)母羊，且生殖系統(tǒng)發(fā)育不成熟或處于發(fā)育旺盛期，影響其卵泡發(fā)育數(shù)量及卵母細胞質(zhì)量。不同年齡階段母羊?qū)λ幬锏拿舾行圆煌?1～23月齡白頭杜泊胚胎移植妊娠率相對較高的主要原因可能是成年母羊的卵巢發(fā)育好，沖胚數(shù)高，胚胎質(zhì)量好。成年母畜生殖系統(tǒng)發(fā)育成熟，易于胚胎著床。

4 結論

從本試驗結果可以得出對于11～23月齡白頭杜泊羊和白頭薩?？搜蚴褂?70～180 IU促卵泡素進行超數(shù)排卵效果較好。白頭薩?？搜蜃鞴w母羊比白頭杜泊羊利用價值高，胚胎移植潛力大。對于3月齡白頭杜泊羊使用130～140 IU促卵泡素進行超數(shù)排卵效果不佳，移植妊娠率相對較低。