陳偉，渠慎

摘 要：建立奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判定標準，能夠有效確定現(xiàn)有畜牧行業(yè)內(nèi)部數(shù)據(jù)條件，并為奶牛飼養(yǎng)工作提供良好的病情判斷依據(jù)，以確保后續(xù)奶制產(chǎn)品的質(zhì)量優(yōu)勢滿足市場環(huán)境需求，并確保奶牛健康程度具備可持續(xù)協(xié)調(diào)的前提。本文基于奶牛乳房炎早期診斷試劑盒實驗特性展開分析，確定有效的染色條件和體細胞數(shù)目統(tǒng)計條件，通過完善的數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)系統(tǒng)鞏固判定標準，為后續(xù)劃分區(qū)間的制定提供良好數(shù)據(jù)參照。

關(guān)鍵詞：奶牛乳房炎；早期診斷；試劑盒判定；標準制定

奶牛乳房炎是當(dāng)前奶牛生產(chǎn)環(huán)境中較為嚴重的疾病，不但動搖了相關(guān)企業(yè)在現(xiàn)有市場中的經(jīng)濟地位，更在產(chǎn)品質(zhì)量上對食品安全造成不良影響。故而，在實際監(jiān)測工作開展時，需要針對有效的判定標準進行構(gòu)建，這樣才能夠確保奶牛市場環(huán)境穩(wěn)定，并為后續(xù)畜牧業(yè)提供完善的功能統(tǒng)籌條件。

1 實驗材料與儀器

實驗材料：奶牛乳汁、甲基綠、碘化鉀、冰醋酸、醋酸鈉、美藍染色液。

試驗儀器：顯微鏡、滅菌管、玻片、溫箱。

2 實驗方法及結(jié)果

2.1 乳樣試劑制備

在開展乳樣采集工作中，應(yīng)當(dāng)針對牧場內(nèi)部奶牛進行隨機選取，通過專用的奶牛乳頭藥浴液進行清理，確保藥液作用滿足20～30s持續(xù)性條件下，使用一次性消毒紙巾對乳頭和基部進行仔細擦干處理，而后在第三把奶中進行收集，并利用滅菌管進行承接。

2.2 顯微鏡計數(shù)方法

（1） 樣本制備。充分搖勻乳樣試劑，以便確保實際顯微鏡審查過程中具備深入分析的條件，而后使用微量加樣器針對滅菌管內(nèi)部乳汁進行精細提取，并將乳樣滴在審查玻片中心，在通過無菌環(huán)境內(nèi)部攤涂工作后，確定實驗觀察面積滿足1cm2面積的乳膜審查條件。（2）樣本處理。在制備好乳膜樣品之后，應(yīng)當(dāng)將其置于37°C溫箱環(huán)境內(nèi)，確保已經(jīng)干燥再利用二甲苯進行脫脂工作，待貫徹完全便置于95%濃度的乙醇溶液環(huán)境中，固定5～10min時間便可確保觀察樣本內(nèi)部環(huán)境穩(wěn)定，具備實際染色審查的條件。（3）樣本染色。在玻片干燥處理之后，選用美蘭染色液進行染色，確保滲透時間滿足5min，再進行水洗，確保95%乙醇脫色數(shù)分鐘，進行干燥處理，并展開顯微鏡觀察。（4）觀察計數(shù)。在生物顯微鏡觀察環(huán)境中，可利用10倍目鏡展開貫徹，確保視野環(huán)境中滿足100個細胞數(shù)，再依據(jù)實際染色條件和相應(yīng)系數(shù)進行分析，以確保每毫升乳液中體細胞數(shù)量。

2.3 試劑盒檢測乳樣顏色變化

以移液裝置進行奶牛乳汁樣品提取，而后再加入相對計量參數(shù)的裂解液，確保靜置時間滿足2min后，再通過甲基綠染色液進行染色工作，經(jīng)由3min時間進行顏色變化記錄，并確保相應(yīng)記錄條件的準確性。

2.4 制定有效的判斷標準

將顯微鏡技術(shù)結(jié)果與甲基綠染色記錄相結(jié)合，針對其中奶牛乳房炎早期診斷試劑盒變化進行比對，通過數(shù)據(jù)信息統(tǒng)一細胞數(shù)進行結(jié)果記錄，另外將染色條件關(guān)系進行關(guān)聯(lián)，從而依據(jù)其中功能條件確定有效的標準環(huán)境。

3 實驗結(jié)果

3.1 顯微鏡計數(shù)與奶牛乳房炎染色變化的比對

顯微鏡計數(shù)結(jié)果與奶牛乳房炎早期診斷試劑盒顏色變化比對試驗結(jié)果表明，體細胞數(shù)量變化區(qū)間對應(yīng)著DNA染色的顏色變化梯度，體細胞數(shù)越多，綠色越深。其中，乳樣體細胞數(shù)低于2.9×105個/mL時，對應(yīng)顯色顏色為淺藍綠色；體細胞數(shù)在3.0×105～4.9×105個/mL范圍內(nèi)時，對應(yīng)顯色顏色為淺綠色；體細胞數(shù)在5.0×105～7.9×105個/mL范圍內(nèi)時，對應(yīng)顯色顏色為淡綠色；體細胞數(shù)在8.0×105～14.9×105個/mL范圍內(nèi)時，對應(yīng)顯色顏色為綠色體細胞數(shù)在15.0×105～49.9×105個/mL范圍內(nèi)，對應(yīng)顯色顏色為深綠色；體細胞數(shù)多于50.0×105個/mL時，對應(yīng)顯色顏色為墨綠色。

3.2 判定標準的制定

“-”為陰性，淺藍綠色（體細胞數(shù)為0～2.9×105個/mL）；“±”為疑似，淺綠色（體細胞數(shù)為3.0×105～4.9×105個/mL）；“+”為弱陽性，淡綠色（體細胞數(shù)為5.0×105～7.9×105個/mL）；“++”為陽性，綠色（體細胞數(shù)為8.0×105～14.9×105個/mL）；“+++”為強陽性，深綠色（體細胞數(shù)為15.0×105-49.9×105個/mL）；“++++”為極強陽性，墨綠色（體細胞數(shù)多于50×105個/mL）。具體參見表1。

4 實驗分析結(jié)論

4.1 奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標準，是以目前檢測奶牛是否患有乳房炎最為準確的顯微鏡直接計數(shù)法為設(shè)定標準依據(jù)，對同一樣品同時用顯微鏡計數(shù)法和早期診斷試劑盒進行檢測，比較體細胞數(shù)目多少和試劑盒染色深淺變化關(guān)系，確定早期診斷試劑盒的反應(yīng)范圍，從而制定出早期診斷試劑盒的判定標準。

4.2 本試驗中，診斷試劑盒的顏色變化隨著體細胞數(shù)量的變化而變化，而且呈正相關(guān)，隨著乳汁中體細胞數(shù)量的增多，診斷試劑盒的顏色越變越深，符合規(guī)律性變化。

4.3 本試驗制定的奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標準是按照國際上通用的乳汁中體細胞數(shù)變化范圍對應(yīng)試劑盒的顏色變化程度而確定，其判斷標準符合奶牛乳房炎的發(fā)生程度，與我國及國際對奶牛乳房炎的判斷一致，符合奶牛乳房炎的診斷標準斷標準，是以目前檢測奶牛是否志有乳房炎最為準確的顯微鏡細胞計數(shù)法為設(shè)定標準依據(jù)，以染色顏色深淺與體細胞中DNA含量多少成正比、DNA含量多少與體細胞數(shù)量成正比的數(shù)量關(guān)系做對比，制定的奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判定標準。判定標準準確、劃分區(qū)間細致，能夠以明確的顏色變化準確快速判別奶牛乳房炎發(fā)生的程度。

該試劑盒判定結(jié)果準確反映體細胞數(shù)量變化區(qū)間，能夠快速判定出奶牛乳房炎發(fā)生的程度。其標準規(guī)范、操作簡便，判定迅速準確，便于攜帶和現(xiàn)場應(yīng)用，為判定乳汁中體細胞數(shù)目、DNA數(shù)量及食品安全行業(yè)提供了一種經(jīng)濟、便捷、有效、現(xiàn)場、適時、及時的檢測手段。適用于養(yǎng)殖場自主大規(guī)模批量檢測篩查，也適用于平時對疑似隱性乳房炎奶牛隨時判定。比對目前判斷奶牛乳房炎結(jié)果最為準確的體細胞計數(shù)法，該試劑盒顯色正確指示了體細胞數(shù)量變化關(guān)系，進而對應(yīng)判斷出奶牛的健康情況。同時它還規(guī)避了體細胞計數(shù)法（SCC）、PCR檢測法和乳汁電導(dǎo)率檢測法需要在實驗室中檢測的局限性，也規(guī)避了乳汁PH值檢測法和乳汁電導(dǎo)率檢測法的不準確性。

5 結(jié)束語

奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標準的有效制定能夠確保整體奶牛功能體系環(huán)境中具備有效審查的條件，并基于食品健康安全提供了更加豐富識別方法，并依據(jù)相應(yīng)判斷數(shù)據(jù)強弱，提供有效的治療條件，這樣才能夠確保在后續(xù)企業(yè)經(jīng)濟發(fā)展環(huán)境中，具備可持續(xù)延伸的條件，并能夠?qū)⒆陨斫?jīng)濟財產(chǎn)損失有效降低。故而，在落實奶牛乳房炎判斷標準過程中，應(yīng)當(dāng)基于功能環(huán)境確定檢測條件，這樣才能夠應(yīng)用到更加廣泛的檢測環(huán)境中，并為畜牧產(chǎn)業(yè)質(zhì)量提升埋下扎實基礎(chǔ)。

參考文獻

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