趙留濤 ，袁之潤(rùn) ，吳洪銀 ，吳冠連 ，吳春麗

（1.商丘愛己愛牧生物科技股份有限公司，河南虞城476300；2.鄭州愛己愛牧生物技術(shù)有限公司，河南鄭州450001；3.鄭州大學(xué)藥學(xué)院，河南鄭州450001）

北芪五加顆粒為黃芪和刺五加混合提取物配制而成中藥復(fù)方制劑，文獻(xiàn)報(bào)道黃芪和刺五加均具有增強(qiáng)免疫的功效[1,2]。同時(shí)，試驗(yàn)研究證明黃芪刺五加合劑能提高免疫抑制小鼠的TNF、NK細(xì)胞殺傷活性及IL-2水平[3]。本試驗(yàn)以健康仔豬為試驗(yàn)動(dòng)物，通過(guò)檢測(cè)豬瘟抗體效價(jià)和血清中IL-2、IFN-γ含量，觀察北芪五加顆粒對(duì)仔豬豬瘟疫苗免疫應(yīng)答的影響，評(píng)價(jià)其免疫增強(qiáng)作用。通過(guò)臨床試驗(yàn)，進(jìn)一步考察該藥的療效和毒副反應(yīng)，為該藥的大規(guī)模生產(chǎn)及應(yīng)用提供合理、科學(xué)的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)豬選用100仔豬，由河北省晉州市利杰原種豬場(chǎng)提供，豬只健康狀況良好。

1.1.2 試驗(yàn)藥品和試劑 北芪五加顆粒(每1g含生藥1g)，商丘愛己愛牧生物科技股份有限公司提供，試制批號(hào)：20110203；黃芪多糖粉，北京生泰爾生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20111123；豬瘟疫苗，廣東永順生物制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：2011046：豬瘟正向血凝診斷抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清及稀釋液由中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所提供， 批號(hào)分別為 20121009、20121003和20121003；豬血清IL-2 ELISA檢測(cè)試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司；豬瘟血清IFN-γ ELISA檢測(cè)試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 酶標(biāo)儀（RT 2100C），美國(guó)雷杜公司；電子天平（MR200A），上海第二天平儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及處理 將體重相近、健康仔豬100頭，隨機(jī)分為5組：試驗(yàn)組北芪五加顆粒（高、中、低）三個(gè)劑量組、黃芪多糖對(duì)照組和空白對(duì)照組，每組20頭。試驗(yàn)分組及處理詳見表1。試驗(yàn)組于平均31日齡（免疫前3天）開始，北芪五加顆粒按高、中、低三個(gè)劑量（8g/kg、4g/kg、2g/kg?飼料）拌料添加1周；黃芪多糖對(duì)照組同時(shí)段拌料添加黃芪多糖200mg/kg；空白對(duì)照組不添加任何藥物。平均日齡34天用1頭份劑量進(jìn)行豬瘟疫苗首免，于平均日齡65天用1頭份劑量進(jìn)行豬瘟疫苗二免。并分別于平均日齡34天 、48天和60天稱量各豬只體重，計(jì)算料重比；靜脈采血5 mL，分離血清，備用。

1.2.2 測(cè)定指標(biāo)及方法 豬瘟抗體效價(jià)檢測(cè)：分別于平均34日齡 、48日齡和60日齡試驗(yàn)豬靜脈采血5 mL，析出血清，采用正向間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)豬瘟抗體水平。血清中IL-2和IFN-γ含量的檢測(cè)：對(duì)34日齡 、48日齡和60日齡試驗(yàn)豬靜脈采血制備的血清，用ELISA試劑盒檢測(cè)IL-2和IFN-γ的含量。生長(zhǎng)性能測(cè)定：34日齡和60日齡時(shí)分別稱重，計(jì)算出初始平均體重、結(jié)束時(shí)的平均體重和平均增重；逐日逐欄稱量記錄飼料消耗量，計(jì)算飼料報(bào)酬（料重比）。料重比=飼養(yǎng)期內(nèi)所耗標(biāo)準(zhǔn)飼料量（kg）/同期增重（kg）。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 采用獨(dú)立性檢驗(yàn)法對(duì)試驗(yàn)豬在免疫前及首免后豬瘟抗體效價(jià)、血清中IL-2和IFN-γ含量進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。采用方差分析法對(duì)試驗(yàn)豬的增重、飼料報(bào)酬進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表1 試驗(yàn)分組

2 結(jié)果

2.1 北芪五加顆粒對(duì)仔豬豬瘟疫苗免疫應(yīng)答的影響

34日齡，各組豬瘟抗體水平相近，差異不顯著（p＞0.05）。48日齡，豬瘟抗體水平，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05）。60日齡，豬瘟抗體水平，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05 或 p＜0.01）；黃芪多糖組組高于空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果詳見表2。

表2 各組免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 北芪五加顆粒對(duì)仔豬血清IL-2和IFN-γ含量的影響

34日齡，各組仔豬血清IL-2和IFN-γ含量水平相近，差異不顯著（p＞0.05）。 48日齡，血清IL-2含量，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于空白對(duì)照組，差異顯著(p＜0.05)；其他各組，差異不顯著（p＞0.05）。血清IFN-γ含量，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05）；黃芪多糖組和其它各組相比較，差異均不顯著（p＞0.05）。60日齡，血清 IL-2 含量，A組和B組顯著高于C組和E組，差異極顯著（p＜0.01）。血清 IFN-γ含量，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對(duì)照組且差異極顯著（p＜0.01），黃芪多糖組和其它各組相比較差異均不顯著 （p＞0.05）。結(jié)果詳見表3和表4。

表3 北芪五加顆粒對(duì)IL-2含量的影響（單位：pg/ml）

表4 北芪五加顆粒對(duì)IFN-γ含量的影響（單位：pg/ml）

2.3 北芪五加顆粒對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能及飼料利用的影響

34日齡各組仔豬平均體重相近，差異不顯著（p＞0.05）。60日齡平均體重和試驗(yàn)期平均增重，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05）；黃芪多糖組與其它各組相比，無(wú)顯著差異（p＞0.05）。北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組的料重比低于黃芪多糖組，差異顯著 （p＜0.05）；黃芪多糖組低于北芪五加顆粒低劑量組和空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05）。料重比北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組低于黃芪多糖組，差異顯著（p＜0.05）；黃芪多糖組低于北芪五加顆粒低劑量組和空白對(duì)照組，差異顯著（p＜0.05）。試驗(yàn)表明，添加北芪五加顆粒高、中劑量組能促進(jìn)仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育，降低料重比。結(jié)果詳見表5。

表5 對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

3 討論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪含有皂苷類、多糖、氨基酸及微量元素等多種有效成分，其中黃酮類、皂苷類和氨基酸類對(duì)抗疲勞有增強(qiáng)作用；黃酮類和皂苷類對(duì)抗炎有增強(qiáng)作用；多糖類、皂苷類和氨基酸類對(duì)補(bǔ)氣有增強(qiáng)作用[4-6]。近年來(lái)，黃芪作為免疫增強(qiáng)劑的作用日益受到人們的重視[7-8]。刺五加含有多種苷類、多糖、黃酮等藥理成分，此外還含多種微量元素及氨基酸等[9-10]。刺五加可增強(qiáng)機(jī)體非特異性防御能力，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、抗輻射損傷作用[11-12]。關(guān)于刺五加的藥理作用和應(yīng)用研究，從目前文獻(xiàn)報(bào)道來(lái)看主要圍繞人類疾病的預(yù)防和治療等方面，在畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域，刺五加用于豬、雛雞、魚及綿羊等動(dòng)物的生長(zhǎng)性能研究，試驗(yàn)證明刺五加也具有提高機(jī)體抗應(yīng)激能力的作用。試驗(yàn)表明，黃芪刺五加合用使上述兩藥的功能加強(qiáng)，提高了機(jī)體的免疫功能，促使仔豬豬瘟疫苗抗體的產(chǎn)生，這與劉東風(fēng)[13]研究結(jié)果一致。此次試驗(yàn)表明，北芪五加顆粒高、中劑量能促進(jìn)仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育、提高血清中IL-2、IFN-γ含量和豬瘟抗體水平，且高、中劑量組之間差異不顯著。

4 結(jié)論

北芪五加顆粒對(duì)仔豬具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育作用，拌料，推薦劑量為：每公斤飼料加入4g北芪五加顆粒，連續(xù)用藥7天。