李 炯，葉 圳，顧宏剛，蔡 濱

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032；2. 上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 200032）

膿毒癥是指由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征。盡管抗感染治療和器官功能支持技術(shù)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，膿毒癥的病死率仍高達(dá)30%～70%。中醫(yī)藥治療作為治療手段的一種，在膿毒癥的治療中日益引起醫(yī)家的重視。本研究采用中藥復(fù)方錦紅湯干預(yù)來(lái)觀察其對(duì)膿毒癥大鼠血清炎癥介質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 健康，雄性SD大鼠，清潔級(jí)，192只，體質(zhì)量220～250 g，由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 模型制備 膿毒癥動(dòng)物模型的建立采用國(guó)際公認(rèn)的盲腸結(jié)扎穿孔CLP膿毒癥模型。標(biāo)準(zhǔn)步驟主要參考Rittirsch等的報(bào)道[1]。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 錦紅湯由大黃9 g（后下），紅藤30 g，蒲公英30 g組成，由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院中藥房提供。注射用亞胺培南針，由杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)。

1.4 動(dòng)物分組與處理 將192只大鼠常規(guī)適應(yīng)性喂養(yǎng)后按照每組32只隨機(jī)分為正常對(duì)照組（正常組）、膿毒癥模型組（模型組）、假手術(shù)組、錦紅湯治療組（中藥組）、亞胺培南治療組（西藥組）、亞胺培南+錦紅湯組（聯(lián)合組）等6組。藥物劑量以成人用藥劑量按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體型系數(shù)換算法計(jì)算，參照陳奇主編《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，得錦紅湯6.3 g/（kg·d），及亞胺培南180 mg/（kg·d）。治療組造模后即予相應(yīng)藥物干預(yù)，其余組均以等量生理鹽水干預(yù)，每組大鼠再按術(shù)后0、2、6、24 h分為4個(gè)亞組，每亞組8只。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本，所有大鼠于標(biāo)本采集完畢后處死。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之前死亡的大鼠被排除在研究之外。

1.5 標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)大鼠常規(guī)麻醉固定于手術(shù)臺(tái)上，腹部脫毛，常規(guī)消毒鋪巾，無(wú)菌條件下打開(kāi)胸腹腔。取心臟血2 mL，取材時(shí)均使用單獨(dú)無(wú)菌器械以避免交叉污染。

1.6 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

1.6.1 各組大鼠大體情況觀察。

1.6.2 血清炎癥介質(zhì)（CRP、ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α）檢測(cè) 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELⅠSA)測(cè)定。所有試劑盒均購(gòu)自上海廣銳生物科技有限公司。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 大鼠大體情況觀察結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠反應(yīng)靈活，活動(dòng)敏捷，皮光澤，毛緊貼皮膚，密集，鼻、唇濕潤(rùn)干凈，眼睛明亮，大小便正常。模型組大鼠毛蓬松，活動(dòng)遲緩，反應(yīng)遲鈍。假手術(shù)組、抗生素組、錦紅湯組和聯(lián)合用藥組行為學(xué)表現(xiàn)方面與模型組比較有改善，但仍未能達(dá)到正常對(duì)照組水平。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，未發(fā)生動(dòng)物死亡。

2.2. 各組大鼠血清CRP結(jié)果比較（x± s ） 6組不同觀察時(shí)間點(diǎn)之間CRP表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同組別和觀察時(shí)間之間沒(méi)有交互作用（P＞0.05）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢(shì)，其中模型組持續(xù)維持在高位，中藥組在6 h達(dá)到了高峰后快速下降，西藥組亦在6 h后開(kāi)始出現(xiàn)了下降，聯(lián)合組在2 h出現(xiàn)高峰后即開(kāi)始下降。各治療組在24 h時(shí)均明顯低于模型組。見(jiàn)表1。

表1 各組不同時(shí)間點(diǎn)CRP比較（μg/L，n = 6）

2.3 各組大鼠血清ⅠL-6結(jié)果比較（x± s ） 結(jié)果顯示，6組不同觀察時(shí)間點(diǎn)之間ⅠL-6表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同組別和觀察時(shí)間之間有交互作用（P＜0.05）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢(shì)，其中模型組持續(xù)維持在高位，隨時(shí)間變化，中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后表達(dá)持續(xù)下降，聯(lián)合組始終低于中藥組、西藥組表達(dá)。各治療組在術(shù)后24 h的表達(dá)均明顯低于模型組。見(jiàn)表2。

表2 各組不同時(shí)間點(diǎn)ⅠL-6比較（ng/L，n = 6）

2.4 各組大鼠血清ⅠL-8結(jié)果比較（x± s） 6組不同觀察時(shí)間點(diǎn)之間表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；不同組別和觀察時(shí)間之間有交互作用（P＜0.01）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢(shì)，其中模型組持續(xù)維持在高位，隨時(shí)間變化模型組、中藥組、西藥組表達(dá)均持續(xù)下降，聯(lián)合組下降較中藥組、西藥組明顯。各治療組在術(shù)后24 h的表達(dá)均明顯低于模型組。見(jiàn)表3。2.5 各組大鼠血清TNF-α結(jié)果比較（x± s） 6組不同觀察時(shí)間點(diǎn)之間TNF-α表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同組別和觀察時(shí)間之間沒(méi)有交互作用（P＞0.05）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢(shì)，其中模型組持續(xù)維持在高位，中藥組、西藥組、聯(lián)合組表達(dá)持續(xù)下降，聯(lián)合組下降較中藥組、西藥組明顯。各治療組在術(shù)后24 h的表達(dá)均低于模型組。見(jiàn)表4。

表3 各組不同時(shí)間點(diǎn)ⅠL-8比較（ng/L，n = 6）

3 討論

CRP作為由肝臟合成的一種急性期反應(yīng)蛋白，在臨床上常用于急性感染性疾病的診斷和鑒別診斷。本實(shí)驗(yàn)在造模后CRP出現(xiàn)了一定程度的升高，經(jīng)治療后能迅速下降。近年來(lái)對(duì)膿毒癥大鼠的研究證實(shí)了膿毒癥早期就出現(xiàn)了TNF-α水平的顯著升高[2-4]。然后其進(jìn)一步作用于巨噬細(xì)胞或樹(shù)突狀細(xì)胞，從而產(chǎn)生大量的ⅠL-6、ⅠL-8等繼發(fā)性細(xì)胞因子。促炎因子及抗炎因子同膿毒癥病情及預(yù)后呈顯著相關(guān)性，膿毒癥死亡組患者TNF-α、ⅠL-6均顯著上升[5]。朱永研究表明，經(jīng)過(guò)治療，膿毒癥患者TNF-α、ⅠL-6 均較治療前顯著下降，癥狀的好轉(zhuǎn)與炎癥因子的下降

表4 各組不同時(shí)間點(diǎn)TNF-α比較（ng/L，n = 6）

存在一定關(guān)系[6]。ⅠL-6與SⅠRS的嚴(yán)重程度以及致死率關(guān)系密切[7]。而且進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清 ⅠL-6濃度變化趨勢(shì)有助于膿毒癥預(yù)后的判斷[8]。在吳媛的研究中，膿毒癥患者ⅠL-6、ⅠL-8 濃度均隨著時(shí)間推移和病情加重而呈現(xiàn)逐漸增高的動(dòng)態(tài)變化[9]，許多研究顯示，膿毒癥患者血中 ⅠL-6 水平明顯增高，且增高幅度與膿毒癥嚴(yán)重程度、膿毒癥休克和不良預(yù)后相關(guān)[10-11]。本實(shí)驗(yàn)在造模后ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α表達(dá)出現(xiàn)了一定程度的升高，經(jīng)治療后與模型組比較下降明顯，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。本項(xiàng)目所采用的中藥復(fù)方錦紅湯是以上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合外科根據(jù)中醫(yī)“六腑以通為用”原理，基于炎癥性急腹癥“臟腑不通、邪熱橫逆脾土、毒熱內(nèi)蘊(yùn)、熱壅腸腑”的基本病機(jī)，在復(fù)方大黃牡丹湯基礎(chǔ)上研制而成，用以外科炎癥性急腹癥的治療，取得良好臨床療效[12-15]。全方由大黃、紅藤、蒲公英組成，具有清熱解毒、通里攻下作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，蒲公英具有抗炎、抗氧化、利尿、利膽、抗風(fēng)濕、抗菌作用[16]；大黃主要成分大黃素能明顯地抑制LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞中NF-κB的活化和ⅠκB的降解來(lái)抑制內(nèi)皮細(xì)胞促炎因子ⅠL-1β和ⅠL-6，趨化因子ⅠL-8和MCP-1的表達(dá)，使LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)減少，并呈時(shí)間依賴性[17-18]；紅藤則具有抗炎、抑菌、抗氧化、抗病毒、耐缺氧、抗過(guò)敏、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和抗凝血的作用[12,15,19]。劉霖研究表明，中西醫(yī)聯(lián)合用藥治療能改善大鼠膿毒癥休克癥狀，其中機(jī)制可能是通過(guò)抑制ⅠL-6的表達(dá)[20]。本研究中，中藥組、西藥組、聯(lián)合組ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α表達(dá)出現(xiàn)下降，且西藥組要優(yōu)于中藥組，而聯(lián)合組要優(yōu)于中藥組及聯(lián)合組。說(shuō)明了中藥錦紅湯對(duì)于抑制ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α的表達(dá)從而達(dá)到治療膿毒癥的作用是有效的。

總之，炎癥因子CRP、ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α是膿毒癥患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的可靠生物學(xué)標(biāo)志，應(yīng)用中藥錦紅湯可顯著抑制炎癥因子，中西醫(yī)結(jié)合治療是治療膿毒癥的有效治療手段，具有重要臨床應(yīng)用價(jià)值。