崔星羽 ，梁從碧 ，陳慧芳 ，艾文倩 ，羅清

(1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330006；2、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006)

抗線粒體抗體 （antimitochondrial antibody，AMA）是針對(duì)線粒體兩層生物膜蛋白的抗體，多種組織（肝、腎、胃、心臟）細(xì)胞內(nèi)都含有線粒體膜蛋白，但該抗體主要在原發(fā)性膽汁性膽管炎（primary biliary cirrhosis，PBC）病人中特征出現(xiàn)[1]。 PBC 是一種由自身免疫介導(dǎo)的膽汁淤積性肝病，組織學(xué)從最初的小葉間膽管炎逐步發(fā)展為匯管區(qū)周圍炎、小葉間隔纖維化，最終進(jìn)展為膽汁淤積性肝硬化[2]。該病多見于中年女性，患者血清中常常出現(xiàn)AMA，尤其以M2型抗體陽(yáng)性為主要特征。自從AMA檢測(cè)被廣泛應(yīng)用于臨床后，發(fā)現(xiàn)PBC絕不是一種罕見疾病，近年來發(fā)現(xiàn)我國(guó)PBC發(fā)病率呈逐步增高趨勢(shì)，且在自身免疫性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等其他自身免疫性疾病患者血清中陸續(xù)檢測(cè)到AMA。本文通過間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）和線性印跡法對(duì)6804例患者血清進(jìn)行了AMA和AMA－M2檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 回顧統(tǒng)計(jì)分析南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2015年1月1日至2017年6月26日住院和門診6804例患者AMA檢測(cè)結(jié)果以及2015年1月1日至2017年6月26日AMA陽(yáng)性住院患者臨床診斷，其中PBC確診參照2015年更新的膽汁淤積性肝病診斷治療專家共識(shí)[3]，自身免疫性肝炎確診是依據(jù)2010美國(guó)肝病學(xué)會(huì)的診療指南[4]，其他自身免疫疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5，6]。

1．2 方法

1．2．1 血清抗AMA抗體檢測(cè) 采用德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司自身抗體檢測(cè)抗原片 （肝臟馬賽克）IIF檢測(cè)患者血清AMA抗體。血清1：100稀釋后與抗原基質(zhì)片反應(yīng)30min（同時(shí)設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照），用磷酸鹽緩沖液浸泡5min，加入熒光標(biāo)記的二抗避光孵育30min，再同上浸泡5min，加甘油封片后熒光顯微鏡下判讀結(jié)果。以抗體滴度≥1：100為陽(yáng)性。

1．2．2 血清AMA－M2使用線性印跡法，檢測(cè)試劑盒由德國(guó)歐蒙診斷公司生產(chǎn)。在第一次溫育時(shí)，已稀釋的血清(按試劑盒要求進(jìn)行1：100稀釋)標(biāo)本與固定在膜條上的靶抗原反應(yīng)，如果標(biāo)本陽(yáng)性，特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG抗體反應(yīng)，加入底物顯色，肉眼直接觀察結(jié)果，嚴(yán)格按試劑盒說明書要求操作。

1．2．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用四格表χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 6804例患者的AMA總陽(yáng)性率 在6804例患者中，AMA陽(yáng)性率為2．35%。其中，男性AMA陽(yáng)性率為0．65%；女性 AMA陽(yáng)性率為5．27%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=146．884，P＜0．001)， 見表 1。 在160例AMA陽(yáng)性患者中，AMA亞型AMA－M2陽(yáng)性 151 例，陽(yáng)性率 94．38%(151/160)。

表1 6804例患者AMA陽(yáng)性率性別分布比較[n(%)]

2．2 不同年齡組中AMA陽(yáng)性率分析 本文將研究人群分為3個(gè)年齡組≤20歲組、21～49歲組和≥50歲組[7，8]，采用卡方檢驗(yàn)分析各組以及男女之間AMA的陽(yáng)性率，結(jié)果顯示，不同年齡組陽(yáng)性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=52．278，P＜0．001)；21～49 歲組和≥50歲組中的不同性別間AMA陽(yáng)性率差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=70．695、63．927，P＜0．001)，見表 2。

表2 AMA陽(yáng)性患者不同性別、年齡組中AMA陽(yáng)性率比較[n(%)]

2．3 160例AMA陽(yáng)性者的科室分布 在各科室的送檢標(biāo)本中，中醫(yī)科和普外科的陽(yáng)性率最高，原因可能為送檢標(biāo)本數(shù)較少。風(fēng)濕免疫科（6．63%）、神經(jīng)內(nèi)科（4．82%），消化科（5．40%）陽(yáng)性率較高，見表 3。

2．4 88例AMA陽(yáng)性患者臨床診斷結(jié)果分析 在88例AMA陽(yáng)性住院患者的臨床診斷結(jié)果中，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析可得：56例AMA陽(yáng)性患者確診為PBC；10例AMA陽(yáng)性患者確診為自身免疫性肝炎；7例AMA陽(yáng)性患者確診為其他自身性免疫疾?。贿€可見于乙肝、腫瘤等其他疾病，經(jīng)過比較，AMA在PBC中的陽(yáng)性率最高，見表4。

表3 160例陽(yáng)性患者的科室分布[n(%)]

2．5 88例AMA－M2陽(yáng)性與陰性住院患者的臨床診斷結(jié)果分析 結(jié)果顯示，AMA－M2真陽(yáng)性率在不同疾病中存在一定的差異。見表4。

表4 88例AMA陽(yáng)性的臨床診斷結(jié)果[n(%)]

3 討論

6804份臨床就診患者AMA檢測(cè)標(biāo)本中的陽(yáng)性率為2．35%，陽(yáng)性患者中女性與男性的陽(yáng)性率比為3．52：1。AMA總體陽(yáng)性率與國(guó)內(nèi)的報(bào)道結(jié)果一致[9]。且分析不同年齡階段AMA陽(yáng)性率發(fā)現(xiàn)≥50歲女性組的陽(yáng)性率最高，這與該病常見于中年女性是相符的[10]。

本研究表明AMA陽(yáng)性的患者除了出現(xiàn)在中醫(yī)科 （8．89%）、 風(fēng)濕免疫科 （6．63%）、 消化科（5．40%），其在普外科、干部病房和神經(jīng)內(nèi)科的陽(yáng)性檢出率也較高。其原因是在本院以AMA為特征性抗體的PBC主要納入中醫(yī)科、風(fēng)濕免疫科和消化科就診治療[11]，而普外科、干部病房和神經(jīng)內(nèi)科檢出率高是因?yàn)槠渌蜋z率低。旨在提示臨床工作者加大對(duì)AMA檢測(cè)的關(guān)注，準(zhǔn)確判斷AMA陽(yáng)性出現(xiàn)與PBC的關(guān)聯(lián)性，以防誤診、漏診。

通過對(duì)160例AMA陽(yáng)性患者的分析，本研究發(fā)現(xiàn)AMA的亞型AMA－M2陽(yáng)性的患者為151例，陽(yáng)性率為94．38%，其原因是AMA存在M2、M4、M8等9個(gè)亞型，以M2特異性最高[12]，故臨床上也以檢測(cè)AMA-M2為主。此外，調(diào)查88例AMA陽(yáng)性住院患者的診斷結(jié)果，發(fā)現(xiàn)56例AMA陽(yáng)性患者確診為PBC。雖然AMA陽(yáng)性對(duì)PBC的確診有一定的意義，但其診斷敏感性和特異性為90%～95%[13]。結(jié)合此次數(shù)據(jù)分析，AMA陽(yáng)性對(duì)PBC預(yù)測(cè)傾向性不高。繼而對(duì)上述88例AMA陽(yáng)性住院患者中AMA亞型AMA-M2做進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：在56例PBC確診患者中，55例AMA-M2檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，真陽(yáng)性率達(dá)到98.21%。研究結(jié)果與其他研究報(bào)道是一致[14-16]，AMA-M2對(duì)于PBC的診斷較AMA更特異，疾病傾向性高。因此，AMA-M2對(duì)于PBC的早期診斷具有巨大的應(yīng)用價(jià)值。故臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)和AMA、AMA-M2的聯(lián)合檢測(cè)來提高PBC的確診率，有效地避免誤診和漏診。

通過本次分析，了解了AMA在男女及其各年齡階段中的分布，研究了AMA陽(yáng)性患者在各科室中的分布及其陽(yáng)性率的差異，探討了AMA陽(yáng)性住院患者的疾病類別及AMA和AMA-M2在不同疾病中的陽(yáng)性率，檢測(cè)AMA及AMA-M2在PBC的早期診斷與治療具有重要意義，因此臨床工作中應(yīng)重視AMA及AMA-M2在疾病診斷中的臨床價(jià)值。