澤仁達(dá)瓦林朝展

（1.西藏藏醫(yī)學(xué)院，西藏拉薩850000；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)臨床藥理研究所，廣東 廣州 510405）

藏藥“阿夏塞爾郡”又名打箭菊，為菊科匹菊屬植物川西小黃菊 Pyrethrumta tsienense（Bur.Et France.）Ling的干燥花序，主產(chǎn)于中國青海、四川、云南和西藏等地，是藏族常用藥，具有活血散瘀、祛風(fēng)除濕、消炎止痛的功效，臨床上常用于治療頭痛、頭傷、跌撲損傷、濕熱、瘡瘍、傷口流黃水、黃水瘡、肝炎等［1-2］。打箭菊具有抗缺氧［3］、保肝［4］、抗炎鎮(zhèn)痛［5］等藥理活性，目前報(bào)道較多的成分主要是黃酮類化合物，建立打箭菊總黃酮部位化學(xué)成分的分析方法對于其質(zhì)量檢測和控制具有重要的意義。

1 儀器與試劑

AB Sciex Triple TOF5600+（美國Sciex公司），Peak View數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。乙腈為色譜純（德國Merck公司），甲酸為色譜純（北京Dikma公司），實(shí)驗(yàn)用水為超純水。打箭菊于2014年6月采自西藏林芝地區(qū)，并經(jīng)西藏藏醫(yī)學(xué)院康薩·索朗其美教授鑒定為菊科匹菊屬川西小黃菊Pyrethrumta tsienense（Bur.Et France.）Ling，憑證標(biāo)本（PT-201406）現(xiàn)保存于廣州中醫(yī)藥大學(xué)臨床藥理研究所。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品提取

取打箭菊藥材粗粉2.0 kg，依次加入20倍量和15倍量80%乙醇，加熱回流提取兩次，合并提取液，減壓回收至無醇味，濕法上樣于4.0kg大孔樹脂柱（內(nèi)徑15cm，裝柱高35cm，柱體積約3L），水洗6個(gè)柱體積后用30%乙醇洗脫，洗脫至流出液澄清，收集30%乙醇洗脫液，回收溶劑，冷凍干燥備用，用紫外分光光度法［6］測定總黃酮純度為65.94%.

取30%乙醇洗脫部位適量，加甲醇溶解，配置成10μg∕mL的供試品溶液，待測。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件

色譜條件：phenomenex Luna 5μm C18（2）100A 150mm×2.0mm色譜柱；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈，梯度洗脫程序：0-5 min，80%A 20%B；5-10 min，70%A 30%B；10-15 min，60%A 40%B；15-20 min，40%A 60%B；20-25 min，20%A 80%B；25-30 min，0%A 100%B 保持 5 min。流速 0.5 ml∕min；進(jìn)樣量：5 μl，柱溫：25 ℃。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子掃描模式；噴霧電壓為4500 V；干燥器溫度：500℃，干燥氣流速：5 L∕min；霧化氣壓力：45 psi；毛細(xì)管電壓：3500 V；碎裂電壓：100 V；一級碰撞能量：5 V，二級碰撞能量：45 V。質(zhì)譜掃描范圍為m∕z 100-1000。

2.3 UPLC-Triple TOF MS∕MS分析

打箭菊總黃酮部位的UPLC-Triple TOF MS∕MS分析的總離子流色譜圖如圖1所示，18個(gè)主要的色譜峰得到較好的分離。由于打箭菊中主要的化學(xué)成分是黃酮類化合物，用負(fù)離子電噴霧做質(zhì)譜檢測所得的總離子流圖有較好的信噪比，對應(yīng)化合物的一級質(zhì)譜圖都呈現(xiàn)出很強(qiáng)的準(zhǔn)分子離子峰。根據(jù)一級質(zhì)譜給出的準(zhǔn)分子離子峰信息，和二級質(zhì)譜的結(jié)構(gòu)碎片信息，并結(jié)合UPLC的保留時(shí)間以及參考文獻(xiàn)報(bào)道，共推測出了13個(gè)化學(xué)成分的可能結(jié)構(gòu)，這些成分在打箭菊及菊科植物化學(xué)成分分析中都曾有報(bào)道［7-12］。其中通過與對照品的保留時(shí)間、一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜信息進(jìn)行比對，5號(hào)、6號(hào)、9號(hào)、10號(hào)、15號(hào)和18號(hào)峰得到了確證，分別是7，8-二羥基香豆素、咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、木犀草素或山奈酚，對照品色譜圖見1，圖2為6個(gè)對照品的質(zhì)譜圖。其余推測化合物信息見表1。表1給出已鑒定和已推測的化合物的保留時(shí)間、一級質(zhì)譜、二級質(zhì)譜和分子式信息。

表1 打箭菊總黃酮的化學(xué)成分分析

3 討論

打箭菊是藏藥中最常用的藥材之一，其黃酮類成分是其主要藥效成分類群之一，實(shí)驗(yàn)研究了打箭菊總黃酮的化學(xué)成分，建立了UPLC-Triple TOF MS∕MS分析打箭菊總黃酮的方法。UPLC-Triple TOF MS∕MS聯(lián)用方法能夠在線獲得準(zhǔn)確的分子量信息和化合物的結(jié)構(gòu)信息，從而能快速、準(zhǔn)確對打箭菊藥材進(jìn)行成分分析檢測，為該藥材的進(jìn)一步研究提供了參考依據(jù)。

圖1 總離子流色譜圖

圖2 對照品質(zhì)譜圖