段亞玲，楊 浪，李景壯，何 鈺，楊鴻波，譚 紅

（貴州省分析測(cè)試研究院，貴陽(yáng) 550000）

烯丙苯噻唑是由日本明治制果株式會(huì)社研究開發(fā)的苯并噻唑類化合物，最初作為殺菌劑應(yīng)用。20世紀(jì)末期，隨著活化酯的上市應(yīng)用，抗病激活劑的理論也隨之誕生。烯丙苯噻唑通過激發(fā)作物系統(tǒng)獲得抗性，抵御病原菌侵害，實(shí)現(xiàn)防病效果[1]。烯丙苯噻唑用于防治水稻稻瘟病，由于其低毒，對(duì)水稻安全，已經(jīng)成為東南亞稻區(qū)使用面積最廣的抗病激活劑[2]。烯丙苯噻唑的相關(guān)研究主要集中在合成[1,3]、對(duì)稻瘟病的防治效果等[4-9]。關(guān)于烯丙苯噻唑殘留的液相色譜分析方法報(bào)道較少，其殘留分析主要采用氣相色譜法[10-13]。氣相色譜檢測(cè)法雖然檢測(cè)限低，但樣品前處理較復(fù)雜，耗時(shí)多，且成本高。為評(píng)價(jià)烯丙苯噻唑在土壤環(huán)境中的安全性，本試驗(yàn)以3種具有代表性的土壤（黑土、水稻土和紅壤）為研究材料，建立液相色譜法測(cè)定烯丙苯噻唑在土壤中的殘留。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀，美國(guó)Waters公司；超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；LT1002T電子天平，常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司；XSE105DU電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；移液槍，德國(guó)Eppendorf股份公司。

烯丙苯噻唑標(biāo)準(zhǔn)品（99%），國(guó)家農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心；乙腈（色譜純），德國(guó)Merck公司；甲醇（色譜純），美國(guó)Honeywell公司。

1.2 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)以黑土、水稻土、紅壤為試驗(yàn)土樣，其中黑土采集于吉林省集安市，水稻土采集于貴州省關(guān)嶺縣稻田，紅壤采集于云南省宣威市。土壤樣品采集后，揀出碎石、砂礫及植物殘?bào)w等，風(fēng)干后，研磨使其過2 mm篩，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｍ寥赖睦砘再|(zhì)見表1。

表1 土壤理化性質(zhì)

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

稱取20.0 g土壤（黑土、紅壤和水稻土）于250mL具塞三角瓶中，加入50 mL乙腈，將其置于超聲波中水浴超聲提取10 min，靜置后取上清液過0.45 μm有機(jī)濾膜，HPLC定量分析。

1.3.2 儀器條件

色譜柱：Shim-pack CLC-ODS（M）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：V（乙腈）∶V（水）=70∶30；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)器：PAD；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

采用Waters e2695高效液相色譜儀-二極管陣列檢測(cè)器對(duì)烯丙苯噻唑的標(biāo)樣溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。結(jié)果顯示，在210 nm波長(zhǎng)附近，烯丙苯噻唑吸收峰最大，且土壤樣品在此波長(zhǎng)下無(wú)干擾峰，靈敏度滿足分析的要求。因此，烯丙苯噻唑的檢測(cè)以210 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜柱的選擇

烯丙苯噻唑色譜分析方法的報(bào)道相對(duì)較少，而關(guān)于其液相色譜分析方法的報(bào)道更少。試驗(yàn)比較了填料為C18和ODS的色譜柱在液相色譜儀上的分離情況。結(jié)果表明，填料為ODS的色譜柱分離效果較好，峰形對(duì)稱，出峰時(shí)間快。因此，選用Shim-pack CLC-ODS（M）色譜柱分析土壤中的烯丙苯噻唑。烯丙苯噻唑標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1。

圖1 烯丙苯噻唑標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2.3 提取溶劑的選擇

烯丙苯噻唑在丙酮、乙腈、甲醇中均具有較好的溶解性。姜忠濤等[11]在提取糙米中的烯丙苯噻唑時(shí)，先加入水超聲振蕩混勻10 min，再加入丙酮振蕩提取。劉照清等[13]提取土壤中烯丙苯噻唑時(shí)，加入10 g NaCl、100 mL乙腈于振蕩器上振蕩提取2 h。2種溶劑均具有較高的回收率，為85.8%～99.1%。本試驗(yàn)比較了乙腈和甲醇對(duì)烯丙苯噻唑的提取效率。結(jié)果表明：烯丙苯噻唑在乙腈和甲醇中的平均回收率分別為97.1%和83.7%，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。相對(duì)而言，乙腈的提取效率更高。因此，提取土壤中烯丙苯噻唑選擇乙腈為提取溶劑。

2.4 提取方式的選擇

試驗(yàn)比較了超聲和振蕩2種方式下烯丙苯噻唑的提取回收率。結(jié)果表明，超聲10 min、20 min和30 min時(shí)的提取回收率無(wú)顯著差異，且與振蕩30 min的回收率相當(dāng)，均超過95%?？紤]時(shí)間等因素，故采用超聲10 min的方式來(lái)提取土壤中的烯丙苯噻唑。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

準(zhǔn)確稱取0.105 3 g（準(zhǔn)確至0.1 mg）烯丙苯噻唑（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%）于稱量瓶中，用乙腈少量多次溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容，搖勻制得1 000 mg/L烯丙苯噻唑母液，冷藏備用。分別移取不同體積的母液，配制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg/L的系列標(biāo)樣溶液。以烯丙苯噻唑的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），響應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)（y），進(jìn)行線性回歸，見圖2。

圖2 烯丙苯噻唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)果表明，烯丙苯噻唑的峰面積與質(zhì)量濃度具有良好的線性相關(guān)性，線性方程為y=84 055 x＋884.79，R2=1.00。此條件下土壤中烯丙苯噻唑的保留時(shí)間約為4.0 min。

2.6 儀器的精密度

在1.3.2儀器條件下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)對(duì)同一質(zhì)量濃度的烯丙苯噻唑標(biāo)樣溶液（5.0 mg/L）進(jìn)行6次平行測(cè)定，進(jìn)樣量為10 μL，結(jié)果見表2。

表2 儀器精密度試驗(yàn)

峰面積的變異系數(shù)（RSD）為0.67%，保留時(shí)間的RSD為0.09%。該方法重現(xiàn)性好，儀器精密度高。

2.7 方法的準(zhǔn)確度和精密度

方法的準(zhǔn)確度和精密度通過添加回收率和變異系數(shù)來(lái)表示[14]。在3種土壤中分別加入0.20 mL質(zhì)量濃度為100.0、1 000.0 mg/L的烯丙苯噻唑標(biāo)樣溶液，使添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.0、10.0 mg/kg，每組設(shè)5個(gè)平行試樣。土壤樣品經(jīng)處理后，HPLC測(cè)定3種土壤中烯丙苯噻唑殘留量，結(jié)果見表3。由表3可以看出，烯丙苯噻唑在黑土、水稻土和紅壤中的平均添加回收率分別為96.2%～98.4%、98.0%～98.2%和96.4%～97.1%，RSD分別為1.3%～1.4%、0.8%～1.3%和1.1%～1.7%。方法的準(zhǔn)確度和精密度均滿足農(nóng)藥殘留分析要求[15]。烯丙苯噻唑在土壤中的添加色譜圖見圖3。

表3 烯丙苯噻唑在3種土壤中的平均添加回收率

圖3 烯丙苯噻唑在土壤中的添加回收譜圖（a—黑土、b—水稻土、c—紅壤）

2.8 最小檢出量和最低檢測(cè)濃度

以S/N=3和S/N=10計(jì)算最小檢出量（LOD）和最低檢測(cè)質(zhì)量濃度（LOQ）。本方法中烯丙苯噻唑的LOD為1.0×10-9g，LOQ為0.2 mg/L。

3 結(jié)論

本文建立了一種液相色譜分析方法測(cè)定土壤中烯丙苯噻唑的殘留量。土壤樣品經(jīng)乙腈超聲提取，靜置后過有機(jī)濾膜，HPLC-PAD直接測(cè)定。當(dāng)添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0～10.0 mg/kg時(shí)，烯丙苯噻唑在3種土壤中的平均添加回收率為96.2%～98.4%，RSD為0.8%～1.7%。方法最小檢出量為1.0×10-9g，最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為0.2 mg/L。方法分析速度較快，前處理簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求，可用于土壤中烯丙苯噻唑殘留量的檢測(cè)。