趙蕾，韓雪蓮，許德義，卜曉東，沈傳陸

(東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)系，江蘇 南京 210009)

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物

1.2 藥品和試劑

注射用雷貝拉唑鈉，白色粉末(南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所與揚(yáng)州奧賽康藥業(yè)有限公司)；0.9%氯化鈉注射液(南京小營制藥有限公司)。用0.9%氯化鈉注射液將雷貝拉唑鈉配制成2.5%、0.5%和0.1%雷貝拉唑鈉氯化鈉注射液，消毒滅菌處理，不含防腐劑等其他成分，注射液每周配制1次。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

本實(shí)驗(yàn)設(shè)靜脈注射雷貝拉唑鈉高(25 mg·kg-1·d-1)、中(5 mg·kg-1·d-1)、低(1 mg·kg-1·d-1)3個(gè)劑量組和等體積生理鹽水對照組，每組Beagle犬雌雄各3只。前肢頭靜脈注射給藥4周，給藥體積1 ml·kg-1。觀察各組Beagle犬的生命體征、體質(zhì)量變化和飲食飲水情況，檢測血細(xì)胞及血生化改變，行尿常規(guī)檢測，給藥結(jié)束后動(dòng)物麻醉、放血、解剖取臟器，測定內(nèi)臟質(zhì)量以及標(biāo)本送組織病理學(xué)檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)描述用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 毒性癥狀

雷貝拉唑鈉25 mg·kg-1·d-1高劑量組注射藥物過程中雌雄犬均出現(xiàn)掙扎，注射結(jié)束后犬立即出現(xiàn)惡心嘔吐癥狀；回籠后2 h內(nèi)側(cè)臥，四肢肌張力下降，活動(dòng)減少，反應(yīng)遲鈍；給藥次日起可見雌雄犬出現(xiàn)流涎癥狀，給藥2周后進(jìn)食量減少，糞便松散、不成形，可見眼結(jié)膜廣泛充血，瞳孔未見明顯縮小，無結(jié)膜潰瘍，且上述癥狀持續(xù)到給藥結(jié)束。靜脈注射雷貝拉唑鈉5 mg·kg-1·d-1中劑量組，雌雄犬也出現(xiàn)短暫的肌張力下降，活動(dòng)減少，但很快恢復(fù)，未見惡心嘔吐癥狀；大便成形，無進(jìn)食量減少現(xiàn)象，各犬出現(xiàn)結(jié)膜充血，但不及高劑量組明顯。雷貝拉唑鈉1 mg·kg-1·d-1低劑量組在注射過程中和注射后犬均未出現(xiàn)任何毒性癥狀。對照組與給藥組犬在給藥4周內(nèi)未出現(xiàn)死亡，高劑量組雌雄犬在給藥2周后進(jìn)食量減少，但結(jié)合給藥前與給藥后每周稱質(zhì)量數(shù)據(jù)，雄犬體質(zhì)量減低，但雌犬未見與給藥有關(guān)的體質(zhì)量改變。停藥10 d后高劑量組雌雄犬結(jié)膜充血消失。各組犬給藥前后心電圖均未見異常。

2.2 血液、血生化和尿常規(guī)檢查

雷貝拉唑鈉給藥各組和生理鹽水對照組比較，低、中劑量組犬給藥前后的血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)和尿常規(guī)檢查均無明顯差異。高劑量組雌雄犬的血液學(xué)指標(biāo)紅細(xì)胞[(5.86±1.27)×1012L-1]、白細(xì)胞[(7.3±2.7)×109L-1]和血小板[(290±37)×109L-1]計(jì)數(shù)較其他組減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 臟器質(zhì)量和臟器系數(shù)

肝、腎、肺等器官的臟器質(zhì)量和系數(shù)，僅見雷貝拉唑鈉高劑量組與對照組比較有顯著差異。其中雌犬腎質(zhì)量、雌雄犬肺質(zhì)量和雄犬腎上腺質(zhì)量增加，但臟器系數(shù)無顯著差異。雷貝拉唑高劑量組雌犬肝臟質(zhì)量與對照組雌犬比重94%，臟器系數(shù)大49%，雷貝拉唑高劑量組雄犬肝臟與對照組雄犬比重99.56%，臟器系數(shù)大97%。見表1、2。

2.4 組織病理學(xué)觀察

鏡下觀察心、肝、脾、肺、腎、腦、食管、胃、小腸、大腸、垂體、脊髓、骨髓、淋巴結(jié)、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢、胸腺、腎上腺、視神經(jīng)、甲狀腺、甲狀旁腺、唾液腺、膽囊、胰腺、氣管、主動(dòng)脈、前列腺、乳腺、坐骨神經(jīng)、眼及給藥局部等器官和組織。對照組與雷貝拉唑鈉各劑量組組織病理學(xué)比較，僅有雷貝拉唑鈉高劑量組雌雄犬可見甲狀腺濾泡上皮呈扁平狀，略有增生；可見不同程度的胃內(nèi)腺體改變，腺體排列稀疏，壁細(xì)胞數(shù)量減少；其中有1雄犬小腸黏膜內(nèi)出現(xiàn)小出血灶。其他器官和組織未見異常。見圖1。

3 討 論

本研究使用的注射用雷貝拉唑鈉的劑量主要參考重復(fù)給藥毒性實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[10]，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室前期的雷貝拉唑鈉急性毒性試驗(yàn)，依據(jù)5倍劑量的比值設(shè)定為1、5、25 mg·kg-1·d-1。

連續(xù)4周給予Beagle犬注射用雷貝拉唑鈉后，低劑量組未發(fā)現(xiàn)任何毒性癥狀，重要實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，如血、尿常規(guī)，心電圖，血清生物化學(xué)，出凝血時(shí)間，臟器標(biāo)本質(zhì)量和系數(shù)以及組織病理學(xué)觀察，與生理鹽水對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示其為臨床可用參考安全劑量。中劑量組出現(xiàn)短暫的肌張力下降，活動(dòng)減少，并于給藥2周后出現(xiàn)輕度的眼結(jié)膜充血，停藥很快恢復(fù)，實(shí)驗(yàn)室檢查、臟器標(biāo)本巨檢和組織病理學(xué)觀察未發(fā)現(xiàn)異常。高劑量組在給藥早期就出現(xiàn)流涎，行走無力、喜臥，惡心嘔吐，大便稀軟不成形，雄犬體質(zhì)量逐漸降低，可能與藥物引起犬食欲降低有關(guān)；血常規(guī)檢查可見紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板減少，雖與其他組無顯著性差異，亦提示用藥中應(yīng)注意檢測血液學(xué)改變；臟器標(biāo)本巨檢可見腎、肺、腎上腺和肝質(zhì)量以及肝臟器系數(shù)明顯升高，雖未見組織病理學(xué)改變，亦提示臟器損害可能；甲狀腺濾泡上皮呈扁平狀，略有增生，膠質(zhì)減少，胃內(nèi)腺體排列疏松，壁細(xì)胞減少，提示注射高劑量雷貝拉唑鈉損害的靶器官為甲狀腺和胃腺體；因僅有1雄犬出現(xiàn)腸黏膜小出血灶，無法判斷是否為藥物毒性。

表1雌犬靜脈注射雷貝拉唑鈉25mg·kg-1·d-1對臟器質(zhì)量及臟器系數(shù)的影響

臟 器臟器質(zhì)量/g臟器系數(shù)對照組(n=3)高劑量組(n=3)對照組(n=3)高劑量組(n=3)心63.2±5.369.3±5.50.88±0.030.747±0.03腦76.9±3.974.8±8.71.08±0.070.802±0.08肝218±12.5423±53a3.06±0.284.56±0.37a腎34.1±1.340.7±3.3a0.48±0.040.439±0.019脾18.3±221.7±20.25±0.0120.234±0.012肺63.7±3.976.2±3a0.9±0.080.82±0.009腎上腺1±0.20.5±0.10.014±0.00.005 4±0.0胸腺5.7±0.36.7±10.079±0.0050.072±0.008卵巢1.37±0.262.07±0.50.05±0.030.022±0.005子宮1.70±0.261.78±0.050.023±0.001 60.019±0.002

與對照組比較，aP<0.05

表2雄犬靜脈注射雷貝拉唑鈉25mg·kg-1·d-1對臟器質(zhì)量及臟器系數(shù)的影響

臟 器臟器質(zhì)量/g臟器系數(shù)對照組(n=3)高劑量組(n=3)對照組(n=3)高劑量組(n=3)心63.8±3.666.7±3.40.736±0.050.73±0.01腦79.5±9.572.7±7.60.95±0.070.89±0.04肝230±13.6459±14.4a2.64±0.125.21±0.11a腎35.1±2.136.2±2.30.4±0.0140.41±0.03脾24±123.9±3.20.28±0.040.27±0.02肺73.1±3.688.9±9.5a0.84±0.051.0±0.09腎上腺0.96±0.111.4±0.05a0.010 1±0.0020.015±0.005胸腺8.8±6.77.4±1.150.10±0.030.08±0.01睪丸12.1±5.615.5±1.70.139±0.050.18±0.012附睪2.4±0.053.4±0.550.032±0.0060.038±0.005

與對照組比較，aP<0.05

圖1對照組與雷貝拉唑鈉高中低劑量組胃和甲狀腺組織病理學(xué)的改變

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)依據(jù)4組Beagle犬4周連續(xù)用藥，證實(shí)靜脈注射25 mg·kg-1·d-1雷貝拉唑鈉的臨床毒性靶器官為甲狀腺和胃腺體，無任何毒性癥狀和臟器損害的安全劑量為1 mg·kg-1·d-1。