徐晉珩,劉麗云,田莉,王愛軍,郝世柱,張志勇

(唐山市工人醫(yī)院 1.病理科,2.腫瘤外科,河北 唐山 063000)

結(jié)直腸癌是我國常見的惡性腫瘤之一，居我國惡性腫瘤的第4位。近年來相關(guān)數(shù)據(jù)表明，結(jié)直腸癌的發(fā)病率有逐年上升的趨勢，嚴重威脅著人們健康[1]。結(jié)直腸癌的發(fā)生過程十分復(fù)雜，同時牽涉多個腫瘤相關(guān)基因的參與[2]。臨床上發(fā)現(xiàn)，參與結(jié)直腸癌發(fā)生的分子途徑主要有染色體不穩(wěn)定性途徑(CIN)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)。在結(jié)直腸癌患者中CIN占80%左右，而導(dǎo)致CIN發(fā)生因素有癌基因、抑癌基因突變，經(jīng)過多階段、多因素而致癌[3]。MSI主要是由錯配修復(fù)基因缺陷造成。目前臨床上發(fā)現(xiàn)的錯配修復(fù)蛋白(MMRP)共有7種，臨床上主要研究的蛋白只有4種，而這些蛋白表達水解后的產(chǎn)物均為一種核酸水解酶，這種水解酶能糾正DNA復(fù)制過程中錯配的堿基，使基因在復(fù)制過程中更具有保真性[4]。除此之外，還有研究[5]表明錯配修復(fù)基因與腫瘤患者某些臨床病理特征存在一定的相關(guān)性。因此，本研究以680例散發(fā)性結(jié)直腸癌患者作為研究對象，探討MMRP和nm23蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系及兩者相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年8月至2017年1月本院存檔的680例手術(shù)切除散發(fā)性結(jié)直腸癌標本。納入標準：根據(jù)患者臨床癥狀以及相關(guān)檢查病理檢查，確診為散發(fā)性結(jié)直腸癌患者。排除標準：(1) 符合Amsterdam Ⅱ診斷標準的遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(HNPCC)；(2) 在手術(shù)治療前經(jīng)過放化療治療的患者。本組患者中男380例，女300例；年齡38～68歲，平均(48.34±7.54)歲。

1.2 研究方法

標本采用10%甲醛固定、常規(guī)脫水、取材、石蠟包埋、HE染色。根據(jù)HE切片選取病灶區(qū)域，用記號筆定位。用采樣針從標記好的蠟塊組織中取 2～4 mm長的組織條，打入42孔(6×7)蠟塊微陣列中。其中第1行后2個孔作為空白及定位標識。

1.3 指標檢測

對MLH1、PMS2、MSH2、MSH6以及nm23進行染色，采用羅氏全自動免疫組化儀執(zhí)行，MLH1、PMS2、MSH2、MSH6以及nm23抗體均由中杉金橋公司提供。

1.4 判斷標準

每張切片選取陽性率高的區(qū)域10個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞。(1) MMRP各蛋白表達檢測：MLH1、PMS2、MSH2和MSH6均在細胞核內(nèi)表達，采用半定量積分法檢測。0分表示無陽性，1分表示陽性細胞占≤10%，2分表示陽性細胞占11%～50%，3分表示陽性細胞占51%～80%，4分表示陽性細胞所占比例≥81%；0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。兩種得分結(jié)果相乘，0分表示蛋白缺失，1分表示蛋白低表達，≥2分表示蛋白陽性，缺失與蛋白低表達按照陰性表達計算。(2) nm23：表達于細胞質(zhì)，細胞質(zhì)呈黃色或是棕黃色為表達陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 MMRP在散發(fā)性結(jié)腸癌組織中的表達

本組MMRP陽性者605例，表達缺失者75例，缺失率為11.03%。其中MLH1缺失11例(14.67%)，PMS2缺失5例(6.67%)，MSH2缺失6例(8.00%)，MSH6表達缺失3例(4.00%)；MLH1聯(lián)合PMS2表達缺失19例(25.33%)，MSH2聯(lián)合MSH6表達缺失12例(16.00%)， MLH1聯(lián)合MSH2表達缺失5例(6.67%)，MLH1聯(lián)合MSH6表達缺失3例(4.00%)，MSH2聯(lián)合PMS2表達缺失3例(4.00%)，MLH1聯(lián)合MSH2、MSH6表達缺失2例(2.67%)，MSH2聯(lián)合MSH6、PMS2表達缺失3例(4.00%)，4種表達均缺失者有3例(4.00%)。見圖1。

圖1MMRP表達定位于腫瘤細胞核(×100)

Fig1MMRPexpressionlocatedinthetumorcellnucleus(×100)

2.2 nm23在散發(fā)性結(jié)腸癌癌組織中的表達

本組nm23陰性表達278例(40.88%)，其中MSI組43例，MSS組235例；陽性表達402例(59.12%)，其中MSI組32例，MSS組370例。見圖2。

2.3 MSI表達情況與散發(fā)性結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

MSI表達情況與年齡、腫瘤部位、臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織類型等指標存在差異(P<0.05)，見表1。

2.4 nm23表達情況與散發(fā)性結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

nm23表達情況與組織類型、遠處轉(zhuǎn)移、浸潤深度、大體分型等指標存在差異(P<0.05)，見表2。

圖2nm23表達定位于腫瘤細胞質(zhì)(×100)

Fig2nm23expressionlocatedinthetumornucleus

表1MSI表達情況與散發(fā)性結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系例

Tab 1 The relationship between MSI expression and clinical and pathological characteristics of patients with sporadic colorectal cancercases

續(xù)表

2.5 相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman分析得出，MSI與nm23呈正相關(guān)(r=0.563，P<0.001)。

3 討 論

表2nm23表達情況與散發(fā)性結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系例

Tab 2 The relationship between clinical and pathological characteristics of patients with sporadic colorectal cancercases

續(xù)表

綜上所述，在散發(fā)性結(jié)直腸癌患者中存在MMRP缺失，并且MLH1、PMS2缺失表達較MSH2和MSH6多見；MSI及nm23與散發(fā)性結(jié)直腸臨床病理特征關(guān)系密切，對散發(fā)性結(jié)直腸癌的預(yù)測以及惡性程度的評估具有參考價值，并且兩者呈正相關(guān)，可能參與散發(fā)性結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程。