臺(tái)凡力 黃如渠 岑建明 廖春燕

（廣東湛江農(nóng)墾畜牧有限公司，廣東湛江 524022）

2018年春季，生豬價(jià)格低迷，養(yǎng)豬行業(yè)虧損嚴(yán)重，豬場(chǎng)開始減少對(duì)豬群的投入以節(jié)約成本。這種情況很容易造成重大疫病的發(fā)生和流行。為了解規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)豬群的免疫狀況以及豬群的健康狀態(tài)，對(duì)廣東湛江地區(qū)8家規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行抽血檢測(cè)，調(diào)查豬群的免疫狀況、健康程度。采集251頭經(jīng)產(chǎn)母豬血清，進(jìn)行豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）和豬偽狂犬病（PR）等4種豬病毒病的免疫抗體檢測(cè)和分析。

1 材料和方法

1.1 材料

2018年4月，在廣東湛江地區(qū)8個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)采集251頭經(jīng)產(chǎn)母豬血清。

采用美國IDEXX公司生產(chǎn)的豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病毒抗體檢測(cè)試劑盒（gB）、豬偽狂犬病毒抗體檢測(cè)試劑盒（gE）和韓國金諾公司生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒病檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。

主要試驗(yàn)用儀器有MK3酶標(biāo)儀、MK2自動(dòng)洗板儀、Milli-Q-A超純水機(jī)、單道微量移液器、多道微量移液器、渦旋混合儀等。

1.2 樣品采集

每個(gè)豬場(chǎng)一次采集血樣不少于30份。血樣采集后及時(shí)進(jìn)行常規(guī)血清分離，冷凍備檢。

1.3 抗體測(cè)定

1.3.1 CSFV抗體測(cè)定

取50 μL血清，按照CSF病毒抗體檢測(cè)試劑盒的說明進(jìn)行抗體檢測(cè)，讀取450 nm處樣本的吸光度值。有效的檢測(cè)結(jié)果為陰性對(duì)照平均OD450＞0.500，陽性對(duì)照的阻斷率大于50%。如果被檢樣品阻斷率≥40%，則判為陽性；如果被檢樣品的阻斷率≤30%，則判為陰性；如果被檢樣品的阻斷率在30%～40%之間，則判為可疑，需重復(fù)檢測(cè)。如果重測(cè)結(jié)果仍可疑，就使用血清中和試驗(yàn)進(jìn)行最終確認(rèn)。

1.3.2 PRRSV抗體測(cè)定

取10 μL血清，按照PRRS病毒抗體檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行抗體檢測(cè)，讀取630 nm處樣本的吸光度值。陰性對(duì)照平均OD630≤0.150，陽性對(duì)照的平均值減去陰性對(duì)照的平均值≥0.150時(shí)，檢測(cè)結(jié)果有效。被檢樣品阻斷率≥40%，判為陽性；被檢樣品的阻斷率≤30%，判為陰性；如果被檢樣品的阻斷率在30%～40%之間，判為可疑，需重復(fù)檢測(cè)。

1.3.3 PCV2抗體測(cè)定

取10 μL血清，按照PCV2病毒抗體檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行抗體檢測(cè)，讀取450 nm處樣本的吸光度值。陰性對(duì)照的平均OD450≤0.30，陽性對(duì)照的平均值≥0.50時(shí)，檢測(cè)結(jié)果有效。如果被檢樣品S/P值≥0.40，判為陽性；被檢樣品的S/P值≤0.30，判為陰性；如果被檢樣品的0.3≤S/P≤0.4之間，判為可疑，需重復(fù)檢測(cè)。

1.3.4 PRV（gB/gE）抗體測(cè)定

取50 μL血清，分別按照PRV gB和gE病毒抗體檢測(cè)試劑盒的說明進(jìn)行抗體檢測(cè)，讀取630 nm處樣本的吸光度值。陰性對(duì)照的平均OD630減去陽性對(duì)照平均值＞0.3，檢測(cè)結(jié)果有效。被檢樣品阻斷率≥0.70，判為陰性；被檢樣品的阻斷率≤0.60，判為陽性；如果被檢樣品的阻斷率在0.60～0.70之間，判為可疑，需重復(fù)檢測(cè)。

1.4 離散度分析

離散度（CV）采用變異系數(shù)表示。被檢測(cè)豬場(chǎng)免疫抗體的離散度≤40%，判為豬場(chǎng)免疫抗體比較整齊，防疫工作比較扎實(shí)。反之，離散度＞40%，認(rèn)為豬場(chǎng)免疫水平參差不齊，免疫效果不理想。

2 結(jié)果與分析

2.1 CSFV免疫抗體的檢測(cè)結(jié)果與分析

2018年4月，抽檢豬血清248份，CSFV免疫抗體陽性數(shù)229份，陽性率為92.33%。優(yōu)勢(shì)抗體（S/N≥60%）190份，占群體比重76.61%。離散度平均為25.26%（表 1）。

由表1可見，該地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)CSF免疫抗體水平非常高，對(duì)豬群有保護(hù)作用的合格抗體所占比例大，陽性合格率達(dá)到了國家有關(guān)部門的要求（抗體陽性率大于70%）。特別是優(yōu)勢(shì)抗體（S/N≥60%）所占比重超過半數(shù)，CSF免疫狀態(tài)良好，免疫效果非常理想。CV小于40%，免疫抗體非常整齊。抽檢的8家豬場(chǎng)中有7家豬場(chǎng)免疫合格率超過96.00%，顯示該地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)沒有放松對(duì)豬瘟的免疫。

2.2 PRRSV免疫抗體的檢測(cè)結(jié)果與分析

2018年4月，抽檢血清251份，PRRSV陽性血清抗體221份，陽性率為88.05%。CV為65.15%。有21份血清抗體S/P≥3.0，分布在7個(gè)豬場(chǎng)。

表1 2018年4月份CSFV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

由表2可見，該地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)PRRS免疫抗體水平較高，但免疫抗體的離散度大于40%，說明免疫效果并不理想。7個(gè)豬場(chǎng)中有21份血清抗體S/P≥3.0。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)S/P≥3.0時(shí)，懷疑有野毒感染，因此這7家豬場(chǎng)PRRS野毒感染壓力巨大，PRRS的防治工作不容樂觀。特別是編號(hào)為8號(hào)的豬場(chǎng)，血清抗體陽性率不高，且S/P≥3.0占比非常大，同時(shí)CV大于100；編號(hào)為2號(hào)的豬場(chǎng)，抗體陽性率雖達(dá)100%，但是S/P≥3.0所占比例也非常大?？偟膩碚f，該地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PRRS的免疫工作不到位，防治工作不理想。

表2 2018年4月份PRRSV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 PCV2免疫抗體的檢測(cè)結(jié)果與分析

2018年4月，抽檢血清248份，PCV2血清抗體陽性243份，陽性率為97.98%。CV為17.61%。

由表3可見，該地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)的PCV2抗體水平、陽性抗體合格率很高，抗體離散度非常小。8家豬場(chǎng)中有5家抗體陽性率達(dá)100%，并且CV都很小。另外編號(hào)為5號(hào)和8號(hào)的豬場(chǎng)離散度偏大，抗體滴度偏高，懷疑有野毒活動(dòng)?？偟膩碚f，該地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)PCV2的免疫工作到位，防治工作比較理想。

2.4 PRV免疫抗體的檢測(cè)結(jié)果與分析

2018年4月，8家豬場(chǎng)共抽檢血清251份，gB抗體陽性251份，陽性率為100.00%，CV為27.56%；在抽檢的8家豬場(chǎng)248份血清中，gE陽性93份，分布在4家豬場(chǎng)。

表3 2018年4月份PCV2免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 2018年4月份PRV（gB）免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

由表4可見，該地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PR免疫抗體合格率非常好，免疫合格率高達(dá)100%，并且CV小于40%。說明該地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)PR比較重視，疫苗免疫非常到位。由表5看出，半數(shù)的規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病野毒已經(jīng)轉(zhuǎn)陽，其中有編號(hào)為1、2和4的3個(gè)場(chǎng)野毒檢出率非常高，分別是85.71%、100.00%和95%，說明偽狂犬病野毒非?；钴S，正在發(fā)生或者流行。但是這3個(gè)場(chǎng)gB抗體的離散度非常小，分別為17.85%、24.15%和33.05%，說明豬場(chǎng)已經(jīng)做了補(bǔ)救措施，疫苗免疫到位，并且效果確實(shí)。另外1個(gè)編號(hào)為8號(hào)的場(chǎng)，雖然檢測(cè)結(jié)果為陽性，但是檢出率比較低，同時(shí)gB抗體離散度只有15.20%，懷疑是剛剛感染，也有可能是檢測(cè)誤差。剩余4個(gè)場(chǎng)野毒檢測(cè)均為陰性，其中編號(hào)為3號(hào)和5號(hào)的場(chǎng)gB抗體離散度分別為14.53%和16.05%，說明這2個(gè)場(chǎng)免疫程序合理，免疫效果確實(shí)；編號(hào)為6號(hào)和7號(hào)的2個(gè)場(chǎng)，gB抗體離散度分別為48.52%和51.13%。說明這2個(gè)場(chǎng)雖然免疫的疫苗效果確實(shí)，但是免疫程序還需要稍微調(diào)整。

表5 2018年4月份PRV（gE）免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.5 CSFV、PRRSV、PCV2和PRV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

采集251份血清，其中有3份血清量不足，只檢測(cè)了PRRS和PR項(xiàng)目，而未檢測(cè)CSF和PCVD項(xiàng)目。CSF、PRRS、PCVD和PR免疫抗體合格樣品分別為229、221、243和251份，免疫抗體合格率分別為92.23%、88.05%、97.98%和100.00%，CV分別為25.26%、65.15%、17.61%和27.56%，見表6。

該地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)抽檢血清的CSF、PRRS、PCVD和PR免疫抗體合格率非常理想，都高于85%，說明該地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)在市場(chǎng)低迷的情況下，并沒有減少對(duì)生物安全措施的投入，免疫程序合理，免疫力度比較大。豬群的免疫抗體水平高，免疫狀態(tài)和健康狀況好。

表6 2018年4月份CSFV、PRRSV、PCV2和PRV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 豬瘟

CSF是由CSFV引起的一種急性熱性全身性敗血性傳染病，各年齡豬均可發(fā)病。現(xiàn)在我國已將該病列為一類傳染病，是當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)重點(diǎn)防控的重要疾病之一。從抽檢結(jié)果看，該地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)對(duì)豬瘟的防治工作比較重視，免疫工作精準(zhǔn)到位，免疫抗體合格率高。豬群比較健康，對(duì)CSFV疫苗的免疫應(yīng)答比較敏感。另外也可推測(cè)，這一地區(qū)市面流行的豬瘟疫苗質(zhì)量比較有保障，效果比較確實(shí)。所以這一地區(qū)豬瘟感染壓力相對(duì)較小。

3.2 豬繁殖與呼吸綜合征

PRRS是由PRRSV引起的一種繁殖與呼吸道癥狀的傳染病。臨床表現(xiàn)為厭食、發(fā)熱、母豬繁殖障礙、懷孕母豬大批流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎，仔豬與育成豬發(fā)生以高死亡率為特征的急性傳染病，我國將其列為二類傳染病。目前對(duì)該病的控制措施主要是疫苗接種，因此對(duì)PRRSV抗體的監(jiān)控成為規(guī)?；i場(chǎng)控制該病的一種重要手段。但是用血清抗體來評(píng)估PRRSV疫苗的免疫效果不科學(xué)，因?yàn)镻RRS具有免疫介導(dǎo)作用。目前主要利用動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和橫向?qū)Ρ葋碓u(píng)估PRRS免疫抗體。在本研究中，該地區(qū)不同的8個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)PRRS免疫抗體差別明顯，PRRS的防治效果差異很大。PRRS屬于豬的免疫抑制性疾病，使得豬群的免疫機(jī)能受到抑制，其他疫苗的免疫效果明顯下降。結(jié)合對(duì)CSFV、PCV2和PRV的檢測(cè)結(jié)果來理解PRRS抗體的水平更有意義。當(dāng)CSF、PCVD和PR 3種病毒病的免疫抗體效果都比較理想時(shí)，說明這一時(shí)期豬場(chǎng)沒有出現(xiàn)免疫抑制性疾病。此時(shí)如果PRRSV抗體水平比較高，基本可以認(rèn)為疫苗免疫效果比較好；如果PRRSV抗體水平比較低，說明疫苗免疫不到位。當(dāng)其他3種病毒病的免疫抗體效果都不理想的時(shí)候，如果PRRSV的抗體水平比較高，或者比較低，抑或比較亂，都可以說明豬場(chǎng)正在流行PRRS。本研究抽檢的8家豬場(chǎng)中，盡管個(gè)別豬場(chǎng)出現(xiàn)一種或兩種病毒病疫苗免疫不合理，但是總體來說，這3種病毒病的抗體還算比較理想。豬群的免疫狀態(tài)不錯(cuò)，并沒有發(fā)生PRRS的流行，但是這一時(shí)期各個(gè)豬場(chǎng)的PRRS的CV都比較大，說明這一時(shí)期疫苗免疫效果不理想。

3.3 豬圓環(huán)病毒病

豬圓環(huán)病毒是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的主要病原，一般在仔豬斷奶后2～3天或1周發(fā)病，病死率可達(dá)10%，耐過豬后期發(fā)育明顯受阻。雖然近年來PCV2一直困擾著養(yǎng)豬業(yè)，但是就本研究抽檢的結(jié)果看，廣東湛江地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)該病的防治比較成功?？贵w合格率都在95%以上，這一地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)對(duì)該病的感染壓力不大。

3.4 豬偽狂犬病

自1956年，我國開始流行偽狂犬病。近年來，該病呈擴(kuò)大趨勢(shì)。從本研究看該病在湛江地區(qū)已經(jīng)流行，抽檢的8家豬場(chǎng)有4家陽性。在該病的疫區(qū)還有4家豬場(chǎng)能夠保持陰性，說明這幾家選擇的疫苗對(duì)豬群具有保護(hù)性。

4 小結(jié)

雖然目前養(yǎng)豬行情比較低迷，但湛江地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)幾種常見的重大疫病，如豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒病、豬偽狂犬病都防疫到位，抗體整齊，且合格率高，有效降低了該地區(qū)重大動(dòng)物疫情流行的風(fēng)險(xiǎn)。