李忠?guī)? 王騰 單洪偉 馬甡

摘 要：為探究南極磷蝦（Euphausia superba）作為餌料生物在凡納濱對蝦養(yǎng)殖中對其生長、蛻皮及代謝水平的影響，進行了間隔投喂試驗，設(shè)置對照組（全程投喂配合飼料）、間4組（1天磷蝦鮮肉和4天配合飼料間隔投喂）、間2組（1天磷蝦鮮肉和2天配合飼料間隔投喂）、間1組（1天磷蝦鮮肉和1天配合飼料間隔投喂）及全蝦組（全程投喂磷蝦鮮肉），養(yǎng)殖試驗持續(xù)36 d。結(jié)果表明，間1組、間2組和間4組對蝦體長（Lt）、體重（Wt）、特定生長率（SGR）、相對增重率（WGR）均高于對照組，但都與對照組無顯著性差異（P>0.05），間4組和間2組對蝦成活率（SR）較對照組分別升高5%和10%，全蝦組對蝦Lt、Wt、SGR、WGR、SR均顯著低于對照組（P<0.05）。投喂磷蝦鮮肉能夠刺激對蝦的蛻皮，其中，投喂磷蝦鮮肉各組對蝦平均日蛻皮率（ADMR）均高于對照組，在對蝦日蛻皮率（DMR）≥10%天數(shù)上，全蝦組>間1組>間4組>對照組>間2組。間1組和全蝦組對蝦血淋巴中膽固醇（T-CHO）水平顯著高于對照組（P<0.05），而全蝦組葡萄糖（GLU）水平顯著低于對照組（P<0.05）。投喂磷蝦鮮肉影響了對蝦肝胰腺中代謝相關(guān)酶活力，其中，間2組和間1組對蝦肝胰腺中磷酸果糖激酶（PFK）活力顯著高于對照組（P<0.05），全蝦組對蝦肝胰腺中丙酮酸激酶（PK）活力顯著高于對照組（P<0.05），間1組、間2組和全蝦組對蝦肝胰腺中乳酸脫氫酶（LDH）活力和琥珀酸脫氫酶（SDH）活力均顯著低于對照組（P<0.05）。綜合以上結(jié)果，適量投喂南極磷蝦鮮肉能夠一定程度提高凡納濱對蝦的生長、蛻皮，影響對蝦代謝水平。此外，南極磷蝦鮮肉不宜投喂過多，以1天磷蝦鮮肉和4天配合飼料間隔投喂為宜。

關(guān)鍵詞：南極磷蝦（Euphausia superba）；生長；蛻皮；代謝水平

餌料生物在對蝦養(yǎng)殖中一直發(fā)揮著重要作用，相比于配合飼料，具有營養(yǎng)高、來源廣、成本低等優(yōu)點。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，投喂餌料生物利于對蝦生長，具體表現(xiàn)在促進蝦苗的變態(tài)發(fā)育[1]、保證對蝦的正常蛻皮[2]、提高蝦體的免疫能力[3]等方面。另外，由于飼料中蛋白源的供應(yīng)主要來自魚粉，而水產(chǎn)行業(yè)對于魚粉的需求日漸增加，導(dǎo)致魚粉價格連年上漲，動物性蛋白源的不足已經(jīng)成為了制約水產(chǎn)飼料發(fā)展的一大障礙[4]。餌料生物蛋白含量較高，開發(fā)餌料生物資源對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展有著重要的意義。

南極磷蝦（Euphausia superba）主要生活在南極洲水域，儲量豐富，生物量約為6.5億～10億t，是地球上生物量最大的多細胞生物之一。由于其含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，因此被稱為“人類未來的動物蛋白庫”。研究發(fā)現(xiàn)南極磷蝦體內(nèi)含有大量的不飽和脂肪酸和水產(chǎn)動物所需的必需氨基酸[5]。另外，南極磷蝦特殊的生長環(huán)境使其基本不攜帶任何病原，這成為其推廣應(yīng)用的重要優(yōu)勢。

近年來，南極磷蝦在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用研究較多，但主要集中在以磷蝦粉替代蛋白[6]，且研究對象多以魚類為主。本文以南極磷蝦鮮肉為餌料間隔投喂凡納濱對蝦，研究其對對蝦生長、蛻皮和代謝水平的影響，旨在為探討南極磷蝦鮮肉在對蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗飼料 本試驗使用的南極磷蝦購自中水集團遠洋股份有限公司，其規(guī)格為體長2.45±0.13 cm，使用前去頭洗凈，蝦肉撕碎用于投喂。配合飼料為天津通威飼料有限公司購買的對蝦配合飼料8831。

1.1.2 試驗用蝦 本試驗所用的凡納濱對蝦購買自山東省乳市養(yǎng)殖場，對蝦生長良好，體色正常，其規(guī)格為體長6.55±0.23 cm，體重5.88±0.14 g，購回后馴養(yǎng)一周。

1.2 試驗條件

所用水族箱規(guī)格為50 cm×35 cm×35 cm，水體積約為50 L，為室內(nèi)自動循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)。

1.3 試驗設(shè)計與管理

本試驗設(shè)置對照組（全程投喂配合飼料）、間4組（1天磷蝦鮮肉和4天配合飼料間隔投喂）、間2組（1天磷蝦鮮肉和2天配合飼料間隔投喂）、間1組（1天磷蝦鮮肉和1天配合飼料間隔投喂）、全蝦組（全程投喂磷蝦鮮肉），每個組設(shè)置4個平行，每個平行15尾蝦。

試驗期間每天投喂2餐，過量投喂，時間分別為8：00和20：00，根據(jù)水質(zhì)情況適當換水，水溫25±0.5 ℃，鹽度（31±0.5）‰，pH 8.0±0.1，進行為期36 d的養(yǎng)殖試驗。

1.4 樣品采集與分析

1.4.1 樣品采集 每天記錄各組對蝦死亡數(shù)和蛻皮數(shù)（以頭胸甲數(shù)為準），飼養(yǎng)試驗結(jié)束后測量數(shù)據(jù)包括體長、體重，取樣部位為對蝦的肝胰腺和血淋巴。具體操作如下：在每個處理組中隨機取樣3尾蝦，血淋巴取樣為在冰上用一次性注射器取腹血竇加抗凝劑取血，4 000 r/min離心10 min，取上清液置于-70 ℃保存待測。肝胰腺取樣為用鑷子摘取對蝦肝胰腺，取樣后迅速經(jīng)液氮冷凍，立即置于-70 ℃保存待測。

1.4.2 生長指標測定 生長指標按照以下公式進行計算：

相對增重率（Weight gain rate）：WGR（%）=[（Wt-W0）/W0]×100

特定生長率（Specific growth rate）：SGR（% d-1）=[（lnWt-lnW0）/T]×100

成活率（Survival rate）：SR（%）=Nt/N0×100

式中，W0表示初始質(zhì)量（g）；Wt表示終末質(zhì)量（g）；T表示養(yǎng)殖天數(shù)；N0表示初始數(shù)量；Nt表示終末數(shù)量。

1.4.3 蛻皮數(shù)據(jù)分析 蛻皮指標按照以下公式進行計算：

日蛻皮率（Daily moulting rate）：DMR（%）=Vi/Ni

平均日蛻皮率（Average daily moulting rate）：ADMR（%）=1T∑Ti=1ViNi

式中，Vi表示第i天蛻皮數(shù)；Ni表示第i天對蝦數(shù)量；T表示養(yǎng)殖天數(shù)。

1.4.4 生化指標測定 血淋巴總蛋白（TP）采用考馬斯亮藍法，甘油三酯（TG）采用GPO-PAP酶法，T-CHO采用COD-PAP法，葡萄糖（GLU）采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法進行測定，測定均使用購自南京建成生物工程研究所的試劑盒完成。

1.4.5 代謝酶測定 對蝦肝胰腺中測定指標包括HK（己糖激酶）、磷酸果糖激酶（PFK）、丙酮酸激酶（PK）、乳酸脫氫酶（LDH）、琥珀酸脫氫酶（SDH），以上指標的測定均使用購自南京建成生物工程研究所的試劑盒完成。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差（X±SD）表示，并用SPSS 25.0對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（ANOVA），通過Duncan檢測法進行組間差異顯著性分析，P<0.05為顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦生長及成活率的影響

由表1可知，投喂磷蝦鮮肉后全蝦組對蝦Lt、Wt、SGR、WGR、SR均顯著低于對照組（P<0.05）。間1組、間2組和間4組Lt、Wt、SGR、WGR均高于對照組，間4組和間2組SR高于對照組，但均無顯著性差異（P>0.05）。

2.2 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦蛻皮的影響

由圖1和圖2可知，隨著磷蝦鮮肉投喂量的增加，各組凡納濱對蝦ADMR呈升高趨勢。在DMR≥10%天數(shù)上，全蝦組>間1組>對照組>間2組>間4組，且全蝦組表現(xiàn)出一定的蛻皮同步性，蛻皮周期在6～7 d。

2.3 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦血淋巴生化指標的影響

由圖1可知，投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦血淋巴TP水平無顯著性差異，全蝦組GLU水平顯著低于其余組（P<0.05）。隨著磷蝦鮮肉投喂比例的增加，各組對蝦血淋巴T-CHO水平呈上升的趨勢，且間1組和全蝦組顯著高于對照組（P<0.05）。各組對蝦血淋巴中TG水平存在差異，間1 組和全蝦組血淋巴TG水平顯著低于對照組（P<0.05）。

圖3 各組凡納濱對蝦血淋巴中總蛋白（TP，A）、葡萄糖（GLU，B）、膽固醇（T-CHO，C）、甘油三酯（TG，D）的變化，不同字母表示具有顯著性差異（P<0.05）

2.4 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦肝胰腺中代謝酶的影響

由圖4可知，投喂磷蝦鮮肉后對照組、間4組和全蝦組對蝦肝胰腺中HK活力顯著高于間2組和間1組（P<0.05），間4組HK活力顯著低于對照組和全蝦組（P<0.05）。對照組和間4組對蝦肝胰腺中PFK活力均顯著低于間2組和間1組（P<0.05）。全蝦組對蝦肝胰腺中PK活力顯著高于其余各組（P<0.05）。投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦肝胰腺中LDH和SDH活力影響顯著，間2組、間1組和全蝦組對蝦肝胰腺中LDH活力均顯著低于對照組和間4組（P<0.05），而對照組與間4組之間無顯著性差異（P>0.05）。間4組、間2組、間1組和全蝦組對蝦肝胰腺中SDH活力均顯著低于對照組（P<0.05）。3 討論

3.1 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦生長及成活率的影響

南極磷蝦鮮肉營養(yǎng)物質(zhì)豐富，富含對蝦生長所需的多種必需氨基酸和必需脂肪酸[1]。 Nunes等[6]研究發(fā)現(xiàn)，南極磷蝦粉可以替代凡納濱對蝦飼料中的魚粉并提高對蝦的成活率和生長性能。在本試驗中，隨著磷蝦鮮肉投喂比例的增加，對蝦SR、SGR和WGR得到一定程度的提高，但效果不顯著。常青等[7]發(fā)現(xiàn)間隔三天投喂一次南極磷蝦粉組的稚魚，其特定生長率高于對照組和間隔一天投喂磷蝦粉組，且間隔一天投喂磷蝦粉組稚魚成活率會顯著降低。本試驗也發(fā)現(xiàn)全蝦組的對蝦成活率和生長性能顯著低于對照組，可見過量投喂單一的磷蝦鮮肉會造成對蝦成活率與生長性能的下降，這與劉石林（2006）[8]使用單一沙蠶投喂凡納濱對蝦會影響對蝦生長的研究結(jié)果相似。

3.2 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦蛻皮的影響

甲殼動物的生長是非連續(xù)性的，其中蛻皮生長是對蝦生長的主要方式，蛻皮指標的高低可以反映對蝦的生長狀況[9]。好的蛻皮同步性可以有效減少養(yǎng)殖中因為蛻皮導(dǎo)致對蝦狀態(tài)不一、以強欺弱的殘食現(xiàn)象，能提高對蝦成活率。本試驗中，從ADMR來看，投喂磷蝦鮮肉能夠有效促進凡納濱對蝦的蛻皮，這一點在全蝦組較對照組更加顯著。從各組的DMR可以發(fā)現(xiàn)全蝦組和間1組促進蛻皮效果明顯?？梢娡段沽孜r鮮肉促進蛻皮的作用突出，對蝦蛻皮率與投喂磷蝦鮮肉量呈正相關(guān)，在日常對蝦養(yǎng)殖中，可在臨近蛻皮高峰時進行營養(yǎng)強化，以促進對蝦蛻皮。另有研究表明甲殼動物不具備合成膽固醇的能力，需要從攝入的食物中獲得生長所需的膽固醇，膽固醇在體內(nèi)經(jīng)過一系列轉(zhuǎn)化以促進其蛻皮[10]。楊建梅等[11]研究發(fā)現(xiàn)卵磷脂對維持細胞結(jié)構(gòu)和功能以及動物的生長和分化具有重要作用。結(jié)合血淋巴T-CHO含量以及磷蝦營養(yǎng)成分推測，磷蝦鮮肉內(nèi)豐富的T-CHO和磷脂可能是促進對蝦蛻皮的原因之一。

3.3 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦血淋巴生化指標的影響

對蝦在正常生理狀態(tài)下能夠維持各項生理指標的動態(tài)平衡，而血淋巴組成成分的變化在一定程度上能夠反映對蝦的健康狀態(tài)[11]。研究表明，血淋巴中TG與T-CHO的含量變化可以反映出動物體內(nèi)脂類代謝水平，TG是動物體內(nèi)儲存能量的主要形式，T-CHO是很多甲殼動物的必需營養(yǎng)素[12]，是甲殼動物合成蛻皮激素的主要物質(zhì)[13]。試驗結(jié)果表明對蝦血淋巴中T-CHO含量會隨著磷蝦鮮肉投喂量的增加顯著升高，而過量投喂磷蝦鮮肉會顯著降低對蝦TG含量，說明投喂磷蝦鮮肉影響了對蝦的脂類代謝，對蝦能夠從南極磷蝦鮮肉中吸收膽固醇，用以加快蛻皮，同時也會造成對蝦TG分解供能加快。另外，本試驗發(fā)現(xiàn)投喂磷蝦鮮肉會降低對蝦GLU含量，尤其是全蝦組對蝦GLU含量顯著低于對照組，可見投喂磷蝦鮮肉還會影響對蝦GLU代謝水平。

3.4 投喂磷蝦鮮肉對凡納濱對蝦肝胰腺代謝酶的影響

機體內(nèi)直接供能物質(zhì)是葡萄糖，糖酵解途徑是葡萄糖分解代謝過程的第一步，HK、PFK、PK是糖酵解過程的關(guān)鍵酶[14]，其活力的變化不僅對維持機體血糖水平具有重要作用，而且直接影響著整個糖代謝途徑的速度和方向。本試驗發(fā)現(xiàn)，投喂磷蝦鮮肉各組PFK和PK活力均高于對照組，且間2組和間1組的PFK活力顯著高于對照組，全蝦組的PK活力顯著高于對照組，全蝦組HK活力較對照組升高?？梢姡段沽孜r鮮肉能夠顯著提高凡納濱對蝦糖酵解酶活力，促進糖酵解途徑。LDH可催化丙酮酸和乳酸之間的相互轉(zhuǎn)化[15]，它是機體無氧代謝的標志酶，其活力大小在一定程度上反應(yīng)了無氧代謝能力的高低。本研究發(fā)現(xiàn)，全蝦組、間1組、間2組對蝦LDH活力顯著低于對照組，可見過量投喂磷蝦鮮肉會抑制無氧呼吸過程。SDH是檸檬酸循環(huán)中唯一摻入線粒體內(nèi)膜的酶，其活力可在一定程度上反映機體有氧代謝的水平[16]。本試驗發(fā)現(xiàn)，各試驗組的對蝦SDH活力均顯著低于對照組，可見投喂磷蝦鮮肉同樣會抑制有氧呼吸。因此，過量投喂磷蝦鮮肉會降低對蝦的整體糖代謝水平。

4 總結(jié)

投喂南極磷蝦鮮肉能夠影響凡納濱對蝦生長、蛻皮和能量代謝水平。表現(xiàn)在一定的時間間隔投喂磷蝦鮮肉會不同程度地促進對蝦生長、提高對蝦成活率、加快對蝦的蛻皮頻率、影響對蝦血淋巴生化物質(zhì)含量并會抑制糖類的無氧及有氧分解代謝水平。綜合試驗結(jié)果，建議以1天磷蝦鮮肉和4天配合飼料間隔投喂為宜。

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