亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        補(bǔ)充低聚糖對運動誘導(dǎo)的動情周期抑制大鼠HPO軸激素的影響

        2018-08-06 05:45:24王人衛(wèi)劉曉麗洪潤肖
        上海體育學(xué)院學(xué)報 2018年4期
        關(guān)鍵詞:動情周期低聚糖陰道

        李 合, 王人衛(wèi), 趙 璨, 劉曉麗, 洪潤肖

        (1. 上海師范大學(xué) 體育學(xué)院,上海 200234;2. 上海體育學(xué)院 運動科學(xué)學(xué)院,上海 200438;3. 湖北民族學(xué)院 體育學(xué)院,湖北 恩施 445300)

        由于長期處于高強(qiáng)度的運動訓(xùn)練應(yīng)激,女性運動員發(fā)生月經(jīng)周期紊亂的比例要遠(yuǎn)高于普通人[1]。長期月經(jīng)周期紊亂可影響骨代謝,不利于骨骼健康[2-4],并且會對運動員以后的生育健康埋下隱患[5]。研究發(fā)現(xiàn),長期高強(qiáng)度運動訓(xùn)練狀態(tài)下,機(jī)體攝入的能量遠(yuǎn)不能滿足運動所需要的能量,造成機(jī)體可利用能量的負(fù)平衡是引起月經(jīng)周期紊亂的起始因素[6-7]。因此,增加可利用能量的攝入和降低運動量及強(qiáng)度是緩解月經(jīng)周期紊亂的方法[8]。在實際訓(xùn)練中,為了提高或維持運動能力,采用降低運動量及強(qiáng)度對于運動員而言不現(xiàn)實,而通過增加可利用能量攝入的方法具有實用意義[9]。本文通過補(bǔ)充低聚糖的方法,探討在外源性能量補(bǔ)充的情況下,是否可以緩解動情周期抑制大鼠的HPO軸(hypothalamus-pituitary-ovarian axis)激素釋放紊亂,為運動員月經(jīng)周期紊亂的防治提供理論基礎(chǔ)。

        1 研究對象與方法

        1.1 研究對象 選取由上海實驗動物資源中心西普爾-必凱實驗動物有限公司提供的健康成熟2月齡雌性SD大鼠36只,平均體質(zhì)量為(200.0±5.9) g。將符合國家飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的嚙齒類動物飼料(由上海仕林生物科技有限公司提供,產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號為Q/TJCX 1-2007)作為基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)飼料(1 337 kJ/100 g,每100 g飼料中含有脂肪4 g、蛋白質(zhì)19 g、糖類52 g)。低聚糖干預(yù)組所用的低聚糖由河北華辰淀粉糖有限公司提供,生產(chǎn)許可證號為QS130123010057,質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書編號為00109Q23299R0M/1300。本實驗設(shè)計通過上海市營養(yǎng)學(xué)會醫(yī)學(xué)倫理委員會的鑒定,并接受其監(jiān)督([倫審]2013-002)。

        1.2 研究方法

        1.2.1 分組及干預(yù)方法 選取2月齡SD雌性大鼠36只,在適應(yīng)運動2周后,隨機(jī)分為4組,每組9只。為了全面觀察實驗組的干預(yù)效果,對照組設(shè)計為2組,分別為陰性對照組(negative control group,Nco組),該組為常規(guī)對照組,不進(jìn)行運動訓(xùn)練,以維持正常的動情周期;陽性對照組(postive control group,Pco組),該組為動情周期抑制模型組,進(jìn)行9周運動訓(xùn)練,前6周為遞增負(fù)荷訓(xùn)練,后3周為恒定負(fù)荷訓(xùn)練,以維持動情周期抑制狀態(tài)。

        實驗組設(shè)計為2組,前6周均采用遞增負(fù)荷訓(xùn)練,后3周采取不同的干預(yù)方式,其中后3周不再進(jìn)行運動訓(xùn)練,只進(jìn)行安靜休息的為安靜休息組(rest intervention group,Res組),用于觀察安靜休息的干預(yù)方法對動情周期抑制的緩解作用,并與補(bǔ)充低聚糖的干預(yù)方法進(jìn)行效果比較;繼續(xù)進(jìn)行3周恒定負(fù)荷訓(xùn)練,采用低聚糖進(jìn)行補(bǔ)充的為低聚糖補(bǔ)充組(oligosaccharide intervention group,Oli組)。實驗組的運動負(fù)荷方案同Pco組一致,后3周采用的恒定訓(xùn)練負(fù)荷是第6周的訓(xùn)練負(fù)荷(圖1)。

        圖1 實驗設(shè)計Figure 1 Experimental design

        本實驗?zāi)M運動訓(xùn)練中周期性耐力跑的方式,參照Bedford大鼠運動負(fù)荷標(biāo)準(zhǔn)[10]和王人衛(wèi)教授建立的大鼠動情周期抑制模型時的運動方案[11],采用段氏PT98型鼠類跑臺進(jìn)行訓(xùn)練。每籠3只,每周連續(xù)訓(xùn)練6 d,然后休息1 d,每天上、下午各訓(xùn)練1次(訓(xùn)練負(fù)荷見表1),第9周最后一天下午訓(xùn)練結(jié)束后,晚上再加訓(xùn)1次。對照組和實驗組前6周均采用普食喂養(yǎng),每天固定為每籠投喂相同量的飼料(每天早上稱量對照組一天消耗的飼料量,然后以此為參考,給實驗組進(jìn)行喂食)和200 mL飲用純凈水;后3周,Oli組在普食喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上,每天下午飲用含有24 g低聚糖(17.2 kJ/g)的100 mL溫水(第二天早上補(bǔ)充100 mL飲用純凈水,以保障每組每天飲水總量相同)其余組仍200 mL飲用純凈水??傮w上,Oli組平均每天增加能量攝入17.2 kJ/g×24 g/3只=137.6 kJ/只。

        表1 大鼠運動負(fù)荷的設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)

        1.2.2 大鼠陰道脫落細(xì)胞學(xué)檢查 參考Marcondes的方法[12],為避免造成待檢查大鼠應(yīng)激反應(yīng),檢查的大鼠和待檢查的大鼠分置于不同的實驗室。待檢查大鼠放置動物手術(shù)臺后,安撫并清理大鼠毛上的墊料,用拇指和食指捏住大鼠尾巴,其余三指輕壓其后腰背部,翻起尾巴露出陰道口,清理糞便后,用醫(yī)用棉簽蘸少許生理鹽水,在大鼠陰道按照順時針方向輕轉(zhuǎn)一周。將采集物涂于玻璃載玻片后,在無水乙醇中浸泡10 min,采用常規(guī)HE染色,通過普通光學(xué)顯微鏡觀察陰道脫落細(xì)胞的狀況。

        1.2.3 激素指標(biāo)檢測 為了消除運動應(yīng)急對內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生的不必要影響,大鼠處死前安靜休息36 h,并禁食12 h。大鼠稱重后,采用體積分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛作為麻醉劑,按照每千克大鼠注射40 mg麻醉劑的量進(jìn)行麻醉。待大鼠完全麻醉后,將大鼠四肢固定在手術(shù)臺,迅速打開腹腔,剝離下腔靜脈,用一次性負(fù)壓真空管采血5~8 mL,低溫離心(3 000 r/min)15 min,取上清液置于-80 ℃的冰箱中,待測GnRH、FSH、LH、E2、P及PRL。GnRH采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定,試劑盒由美國R & D公司提供。

        E2的測定采用免疫化學(xué)發(fā)光法,試劑盒由 Beckman Coulter 公司提供,采用Beckman Coulter 公司生產(chǎn)的 Access 2 immunoassay system(全自動化學(xué)發(fā)光免疫測定系統(tǒng))進(jìn)行測試。采用雙抗體放射免疫分析法測定FSH、LH、P、PRL,放射免疫分析試劑盒由第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供。

        1.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 20.0數(shù)據(jù)軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理,所有結(jié)果均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示。采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較,采用LSD法進(jìn)行兩兩比較。P<0.05表示具有顯著性差異。

        2 實驗結(jié)果

        2.1 大鼠體質(zhì)量的變化情況 由圖2可見,在前6周建立動情周期抑制狀態(tài),未進(jìn)行任何干預(yù)措施前,各組大鼠的體質(zhì)量的自然生長發(fā)育變化基本一致;動情周期抑制建立后,自第7周開始,體質(zhì)量的不同變化趨勢開始顯現(xiàn),Res組體質(zhì)量開始迅速增加;而Oli組也呈增長趨勢,但無Res組明顯;Nco組體質(zhì)量基本不再變化;Pco組體質(zhì)量下降明顯。

        圖2 大鼠體質(zhì)量的變化Figure 2 Changes of body weight of rats

        2.2 大鼠內(nèi)臟脂肪情況 禁食12 h后對大鼠進(jìn)行處死,處死前測量大鼠的體長、體質(zhì)量;處死后取大鼠內(nèi)臟周圍的脂肪進(jìn)行稱量。由表2可見,各組大鼠的體長無組間統(tǒng)計學(xué)意義,但體質(zhì)量、內(nèi)臟脂肪含量均有統(tǒng)計學(xué)意義。為了避免體質(zhì)量對內(nèi)臟脂肪質(zhì)量的影響,將內(nèi)臟脂肪質(zhì)量/體質(zhì)量×100作為衡量大鼠體脂率的指標(biāo)。經(jīng)過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn):Pco組大鼠體脂率顯著低于Nco組,但無統(tǒng)計學(xué)意義;Oli組大鼠體脂率顯著低于Nco組;Res組合Oli組大鼠體脂率顯著高于Pco組;Oli組大鼠體脂率低于Res組,但無統(tǒng)計學(xué)意義。

        表2 大鼠形態(tài)指標(biāo)比較(M±SD)

        注:*表示與Nco組比較,P<0.05;#表示與Pco組比較,P<0.05

        2.3 大鼠陰道脫落細(xì)胞情況 大鼠的動情周期一般為4~5 d,圖3(a)~(d)為Nco組大鼠一個動情周期的陰道脫落細(xì)胞HE染色結(jié)果,該組為動情周期正常組。由圖3可見,不同動情周期階段表現(xiàn)出不同的陰道脫落細(xì)胞特征:圖3(a)為動情前期,該階段以大量有核表層細(xì)胞為特征;圖3(b)為動情期,該階段以大量無核表層細(xì)胞為特征;圖3(c)為動情后期,該階段以大量有核表層細(xì)胞和白細(xì)胞為特征;圖3(d)為動情間期,該階段以出現(xiàn)大量白細(xì)胞為特征。

        實驗開始2周后,每2天進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞學(xué)檢查,結(jié)果顯示:運動訓(xùn)練第3周后,實驗干預(yù)組各組陰道涂片出現(xiàn)中層細(xì)胞和少量底層細(xì)胞;第4~5周時,出現(xiàn)大量的中層細(xì)胞和相對少量的底層細(xì)胞;第6周時,出現(xiàn)大量底層細(xì)胞和相對少量的中層細(xì)胞,并且陰道脫落細(xì)胞數(shù)量明顯較前幾周減少(圖3(e)、(f))。這表明,經(jīng)過6周的遞增負(fù)荷訓(xùn)練,動情周期開始出現(xiàn)抑制,這與王人衛(wèi)等[11]觀察到的一致。

        在第7周開始進(jìn)行干預(yù),陰道脫落細(xì)胞學(xué)觀察發(fā)現(xiàn):Res、Oli組陰道脫落細(xì)胞數(shù)量開始增加(圖3(g));至第9周后,以上2組大鼠陰道脫落細(xì)胞數(shù)量同Nco組無顯著性差異(圖3(h));隨著運動的繼續(xù),Pco組陰道脫落細(xì)胞顯著減少。

        圖3 大鼠陰道脫落細(xì)胞HE染色結(jié)果Figure 3 Results of HE staining of vaginal exfoliated cells in rats

        2.4 HPO軸激素濃度情況 通過陰道脫落細(xì)胞學(xué)檢查確認(rèn)大鼠的動情周期抑制狀態(tài)建立后,再進(jìn)行3周恒定負(fù)荷訓(xùn)練,并采取不同的干預(yù)措施。結(jié)果顯示,HPO軸釋放的各激素濃度均有組間統(tǒng)計學(xué)差異(表3)。兩兩比較的結(jié)果顯示,Pco組的GnRH、FSH、LH、E2及P濃度均顯著低于Nco組,而Pco組的PRL濃度則顯著高于Nco組。Res組和Oli組的GnRH、FSH、LH、E2及P濃度均低于Nco組,而Nco組的PRL濃度高于Res組和Oli組,但均無統(tǒng)計學(xué)意義。Res組和Oli組的GnRH、FSH、LH、E2及P濃度均顯著高于Pco組,而Res組和Oli組的PRL濃度則顯著低于Pco組。Oli組同Res組比較發(fā)現(xiàn),除釋放的GnRH濃度顯著高于Res組外,其余激素濃度,Res組和Nco組均無統(tǒng)計學(xué)差異(表4~表9)。

        表3 HPO軸激素濃度情況比較(M±SD)

        表4 GnRH組間比較結(jié)果

        注:*表示P<0.05,具有統(tǒng)計學(xué)意義;表5~表9同此

        表5 FSH組間比較結(jié)果

        表6 LH組間比較結(jié)果

        表7 E2組間比較結(jié)果

        表8 P組間比較結(jié)果

        表9 PRL組間比較結(jié)果

        3 分析與討論

        動情周期是有胎盤類哺乳動物擁有的一種經(jīng)常性的生理變化,與人類的月經(jīng)周期相似,是受身體性腺軸釋放的性激素影響而產(chǎn)生的周期性變化。動情周期抑制類似于女性的閉經(jīng),是一種病理狀態(tài),長期處于這種狀態(tài),不僅會影響身體健康,還會抑制生殖功能。本文以大鼠動情周期抑制模型模擬女性閉經(jīng),通過補(bǔ)充低聚糖,增加外源性能量攝入,觀察是否可以促進(jìn)HPO軸激素釋放恢復(fù)正常,以逆轉(zhuǎn)動情周期抑制狀態(tài)。

        3.1 對內(nèi)臟脂肪含量的影響 體質(zhì)量是早期衡量月經(jīng)周期是否規(guī)律的直觀指標(biāo)。早期學(xué)者發(fā)現(xiàn)從事形體類運動項目的運動員,如體操運動員[13],普遍存在體質(zhì)量過輕,月經(jīng)周期不規(guī)律的問題,體質(zhì)量與月經(jīng)周期存在密切的相關(guān)性。本文各組雌性大鼠體質(zhì)量在前6周未采取干預(yù)措施前,隨著自然生長發(fā)育體質(zhì)量變化基本一致,但當(dāng)動情周期抑制形成后,隨著不同干預(yù)措施的施行,大鼠的體質(zhì)量呈現(xiàn)不同的變化。主要原因是由于運動訓(xùn)練負(fù)荷的降低和外源性可利用能量的補(bǔ)充,使得安靜休息組和補(bǔ)充低聚糖組大鼠的體質(zhì)量得以繼續(xù)維持生長,而運動強(qiáng)度和飲食保持不變的陽性對照組(即動情周期抑制模型組)則由于缺乏足夠的外源性能量補(bǔ)充,體質(zhì)量呈現(xiàn)下降趨勢。

        體質(zhì)量的變化只是直觀現(xiàn)象,內(nèi)臟脂肪含量的變化才是客觀原因。研究表明,內(nèi)臟脂肪對維持正常的動情周期具有重要作用??偨Y(jié)已有的研究[14-16],學(xué)者認(rèn)為:①內(nèi)臟脂肪是能量存儲器,可以為動情周期的維持提供必需的可利用能量;②內(nèi)臟脂肪也具有分泌瘦素(leptin)的作用,能直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的leptin受體,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)釋放進(jìn)行機(jī)體能量儲存的信號,并且與下丘腦GnRH脈沖性釋放密切相關(guān),從而直接影響HPO軸。本文發(fā)現(xiàn),雖然補(bǔ)充低聚糖組的內(nèi)臟脂肪含量低于安靜休息組和陰性對照組(均無統(tǒng)計學(xué)差異),卻顯著高于陽性對照組,表明通過補(bǔ)充低聚糖可以有效阻止內(nèi)臟脂肪的消耗,并達(dá)到與安靜休息近似的效果。3.2 對陰道脫落細(xì)胞學(xué)的影響 研究發(fā)現(xiàn),長期力竭運動致動情周期紊亂大鼠的卵巢顆粒細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于正常對照組[17]。對動情周期正常的大鼠進(jìn)行遞增負(fù)荷訓(xùn)練時發(fā)現(xiàn):當(dāng)訓(xùn)練進(jìn)行到第3周時,陰道涂片出現(xiàn)中層細(xì)胞和少量底層細(xì)胞,卵巢功能開始表現(xiàn)出輕度低落;當(dāng)訓(xùn)練至第7周時,則出現(xiàn)大量底層細(xì)胞和相對少量的中層細(xì)胞,表現(xiàn)為卵巢功能大幅下降[11]。經(jīng)過6周遞增負(fù)荷訓(xùn)練后發(fā)現(xiàn),陰道脫落細(xì)胞的數(shù)量急劇減少,與已有研究結(jié)果[11]基本一致,表明第6周后,動情周期抑制模型已成功建立。隨后進(jìn)行為期3周的不同手段的干預(yù),根據(jù)陰道脫落細(xì)胞學(xué)可知:陽性對照組的底層細(xì)胞數(shù)量顯著增加,表明動情周期抑制狀態(tài)加深;而安靜休息組和補(bǔ)充低聚糖組陰道脫落細(xì)胞數(shù)量逐漸增加,開始出現(xiàn)無核表層細(xì)胞,表明動情周期抑制狀態(tài)逐步解除。

        3.3 對HPO軸合成分泌激素的影響 HPO軸是由下丘腦-垂體-性腺軸組成的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng),控制女性發(fā)育、正常月經(jīng)和性功能,因此又稱性腺軸。HPO軸的每個環(huán)節(jié)均有其獨特的神經(jīng)內(nèi)分泌功能,并且彼此調(diào)節(jié)和影響。下丘腦分泌的GnRH作用于腦垂體,促使其分泌FSH、LH和PRL;卵巢在FSH和LH的作用下分泌E2、P;子宮內(nèi)膜的周期性變化又受卵巢分泌的E2、P的控制;卵巢分泌的E2、P又可通過負(fù)反饋抑制下丘腦GnRH的釋放,從而使HPO軸重新調(diào)整相應(yīng)激素的釋放[18]。

        通過比較血清激素檢查結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),陽性對照組的GnRH、FSH、LH、E2及P濃度均顯著低于其余各組,而PRL則顯著高于其余各組。研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)分泌系統(tǒng)由多條內(nèi)分泌軸組成,每條內(nèi)分泌軸對運動負(fù)荷的反應(yīng)不一致,從而引起內(nèi)分泌穩(wěn)態(tài)失衡,導(dǎo)致HPO軸分泌出現(xiàn)紊亂[19]。有研究報道,長期高強(qiáng)度的劇烈運動可導(dǎo)致多巴胺神經(jīng)元活性降低[19]。多巴胺神經(jīng)元是下丘腦和腦垂體間重要的神經(jīng)遞質(zhì),可以通過Kp(神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生的一類多肽類激素)保持GnRH的脈沖頻率。過高的PRL通過短路反饋影響下丘腦多巴胺神經(jīng)元活性,由于機(jī)體長期處于負(fù)能量平衡狀態(tài),易導(dǎo)致下丘腦弓狀核神經(jīng)元的老化、凋亡及神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞出現(xiàn)障礙,從而抑制GnRH的合成與釋放,破壞其正常的脈沖分泌[20]。當(dāng)PRL分泌升高時,其通過破壞GnRH的正常脈沖式分泌導(dǎo)致FSH和LH分泌的減少,使卵巢合成的E2及P分泌也減少,從而造成月經(jīng)周期紊亂和閉經(jīng)等問題。

        本文通過補(bǔ)充低聚糖或采取安靜休息的方法發(fā)現(xiàn):補(bǔ)充低聚糖組或安靜休息組分泌的PRL水平顯著低于陽性對照組,而與陰性對照組無統(tǒng)計學(xué)差異;且GnRH、FSH、LH、E2及P濃度均顯著高于陽性對照組,并與陰性對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。表明補(bǔ)充低聚糖或安靜休息后,多巴胺神經(jīng)元活性升高,且神經(jīng)遞質(zhì)傳遞增多,從而緩解了因PRL分泌增加而引起的GnRH脈沖式分泌的抑制,使性腺軸各環(huán)節(jié)激素的合成與釋放恢復(fù)正常,陰道脫落細(xì)胞數(shù)量逐漸增加,無核表層細(xì)胞開始出現(xiàn),動情周期的抑制狀態(tài)得到緩解。

        4 結(jié)論

        通過補(bǔ)充低聚糖,增加大負(fù)荷運動訓(xùn)練狀態(tài)下雌性大鼠的外源性能量攝入,使HPO軸合成分泌激素恢復(fù)正常。由此推斷大鼠能量負(fù)平衡狀態(tài)得到改善,使可利用能量增加,緩解了動情周期抑制狀態(tài)。

        猜你喜歡
        動情周期低聚糖陰道
        加減養(yǎng)精種玉湯通過Rictor/mTORC2通路改善大鼠卵巢儲備功能的機(jī)制研究
        4種哺乳動物乳中低聚糖的定性和定量分析研究進(jìn)展
        盆底儀在陰道分娩后尿潴留治療中的應(yīng)用
        補(bǔ)腎活血方調(diào)節(jié)卵巢儲備功能下降大鼠生殖激素水平的實驗研究
        社會隔離對雌性小鼠動情周期及中樞ERα和TH免疫活性表達(dá)的影響
        大豆低聚糖——多功能的抗癌物質(zhì)
        大豆科技(2016年6期)2016-03-11 15:30:21
        婦產(chǎn)科陰道不規(guī)則出血治療探討
        粘膜下陰道緊縮術(shù)矯正陰道松弛的護(hù)理
        保留陰道黏膜的陰道緊縮術(shù)臨床體會
        果膠低聚糖的制備及其生物活性的研究進(jìn)展
        亚洲香蕉av一区二区蜜桃| 成人无码免费一区二区三区 | 午夜爽爽爽男女免费观看影院| 色噜噜狠狠一区二区三区果冻| 亚洲性啪啪无码AV天堂| 偷柏自拍亚洲综合在线| 日本人妻伦理在线播放| 漂亮人妻被中出中文字幕久久 | 亚洲第一免费播放区| 99蜜桃在线观看免费视频| 午夜天堂精品久久久久| 性饥渴艳妇性色生活片在线播放| 超碰观看| 国产片在线一区二区三区| 国产特级毛片aaaaaa视频| 男女真实有遮挡xx00动态图| 国产丝袜高跟美腿一区在线| 国产一区二区三区激情视频| 色噜噜狠狠狠综合曰曰曰| 久草国产视频| 亚洲国产一区中文字幕| av无码国产精品色午夜| 成人做爰视频www| 久久99久久99精品免视看国产成人| 亚洲国产日韩一区二区三区四区| 国内最真实的xxxx人伦| 国产亚洲日韩欧美一区二区三区| 强d乱码中文字幕熟女1000部| 亚洲av手机在线网站| 尤物网址在线观看| 日本高清中文字幕一区二区三区| 开心五月激动心情五月| 亚洲精品乱码久久久久久不卡 | 亚洲AV永久天堂在线观看| 国产自拍三级黄片视频| 人成午夜免费视频无码| 亚洲肥老太bbw中国熟女| 99久久国产一区二区三区| 在线视频观看国产色网| 97久久香蕉国产线看观看| 被暴雨淋湿爆乳少妇正在播放 |