沈 妮,張程程,何成自菁,王姍姍,于海寧,沈生榮,*

(1.浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院,浙江杭州 310058;2.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院,浙江杭州 310014)

n-3多不飽和脂肪酸在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化中,α-亞麻酸(α-linolenic acid,ALA,18∶3)經(jīng)Δ6和Δ5脫氫酶以及鏈延長(zhǎng)酶轉(zhuǎn)化成二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA,20∶5),EPA代謝形成前列腺素3系,血栓素3系和白三烯5系的前體,EPA進(jìn)一步經(jīng)鏈延長(zhǎng)酶催化作用轉(zhuǎn)化為二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid,DPA,22∶5),DPA經(jīng)鏈延長(zhǎng)酶、Δ6脫氫酶和β-氧化作用轉(zhuǎn)化為二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA,22∶6)[1-4]。多不飽和脂肪酸除經(jīng)去飽和及鏈延長(zhǎng)作用在體內(nèi)相互轉(zhuǎn)化外,還可作為底物經(jīng)環(huán)氧合酶(cyclooxygenase,COX)、脂氧合酶(lipoxygenases,5-,12-,15-LOX)等酶代謝轉(zhuǎn)化為更復(fù)雜的產(chǎn)物[5]。DHA和EPA不僅可以生成前列腺素(prostaglandins,PGs)、血栓素(thromboxanes,TXs)和白三烯(leukotrienes,LTs)的各類前體,還可形成脂氧素(LXs)、消散素(resolvins)、保護(hù)素(protectins)和巨噬細(xì)胞源消散素(maresins)的前體[6],這些代謝產(chǎn)物在炎癥和腫瘤過(guò)程中有著重要作用。總的來(lái)說(shuō),PGs,TXs和LTs具有促炎活性和免疫抑制作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,而LXs,消散素(RSVs)和保護(hù)素具有抗炎作用,脂肪酸的這兩類代謝產(chǎn)物在生物體內(nèi)的平衡將最終影響炎癥和癌癥的發(fā)展程度[5,7]。

部分研究認(rèn)為多不飽和脂肪酸的細(xì)胞毒性作用可歸功于其代謝提高了體內(nèi)PGs,TXs和LTs水平,然而這一觀點(diǎn)目前仍存在較大爭(zhēng)議[8-9]。本實(shí)驗(yàn)以結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116為研究對(duì)象,分析n-3系PUFAs(ALA,EPA,DHA)在癌細(xì)胞內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化及代謝產(chǎn)物的表達(dá)變化,進(jìn)一步探究n-3脂肪酸對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞毒性作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116 中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù);RPMI 1640 培養(yǎng)基 美國(guó)Gibco公司;新生牛血清 杭州四季青;胰蛋白酶(≥2500 units/mg) 上海生物工程有限公司;LTB4、PGE2、LXA4標(biāo)準(zhǔn)品Cayman;ALA、EPA、DHA、5-氟尿嘧啶、MTT、油紅O染料 Sigma;Annexin V-FITC試劑盒 碧云天生物技術(shù)研究所;LTB4、PGE2、LXA4、COX-2 酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒 上海西唐生物科技;Bardford蛋白檢測(cè)試劑 上海貝博試劑公司;其余試劑 均為色譜純或分析純。

MD29SpectraMax酶標(biāo)儀 芬蘭Thermal Lab System公司;FC500MCL流式細(xì)胞儀 美國(guó)Beckman Coulter公司;倒置顯微鏡 日本Nikon;7890A氣相色譜分析儀 安捷倫科技(中國(guó))有限公司;DB-23(0.25 mm×60 m×0.25μm)色譜柱 安捷倫科技(中國(guó))有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116培養(yǎng)于含10%低毒無(wú)支原體新生牛血清的pH為6.5的1640培養(yǎng)基中。細(xì)胞培養(yǎng)液中還應(yīng)該加有100 UI/mL的青霉素和鏈霉素,以防培養(yǎng)過(guò)程中可能出現(xiàn)的污染。細(xì)胞置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),隔天換液,每隔3～4 d傳代一次。

1.2.2 MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率 取190 μL對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞懸液接種于96孔板,每孔設(shè)置等體積培養(yǎng)液對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)24 h,細(xì)胞充分貼壁后,分別加入不同濃度的ALA、EPA、DHA和5-FU,對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液,繼續(xù)分別培養(yǎng)24、48、72 h。處理時(shí)間到,立刻取出96孔板,棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液,每孔加入20 μL MTT,放入37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4 h。而后取出96孔板,每孔加入150 μL DMSO,置于水平振動(dòng)器使紫色甲臜晶體充分溶解,用酶標(biāo)儀讀取490 nm處吸光值。每組處理細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下:

1.2.3 Annexin V-FITC凋亡檢測(cè) 取3.8 mL對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞懸液接種于6孔板內(nèi),繼續(xù)培養(yǎng)24 h使細(xì)胞充分貼壁。分別加入多不飽和脂肪酸和5-FU處理液,對(duì)照組加入等體積細(xì)胞培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,用胰蛋白酶溶液消化細(xì)胞,細(xì)胞懸液于4 ℃ 1500 r/min條件下離心5 min,棄去液體。底部細(xì)胞用預(yù)冷的PBS洗滌兩次,再次于4 ℃ 1500 r/min條件下離心5 min,棄去PBS。用400 μL Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞,輕輕吹打均勻后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至流式細(xì)胞管中,加入5 μL Annexin V-FITC染液,輕輕混勻后于2～8 ℃下避光染色15 min。而后加入10 μL PI染液,輕輕混勻后于2～8 ℃下避光孵育5 min,于1 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.4 油紅染色分析細(xì)胞對(duì)脂肪酸的吸收量 細(xì)胞培養(yǎng)及處理過(guò)程同步驟1.2.2,培養(yǎng)結(jié)束后,棄去培養(yǎng)液,PBS清洗2次,用10%的甲醛固定液固定10 min。隨后用PBS洗滌細(xì)胞3次,室溫下晾置20 min后用0.5 ml油紅O工作液進(jìn)行染色。細(xì)胞充分浸沒(méi)于染液中30 min后棄去油紅O染液,接著用60%異丙醇洗滌細(xì)胞2次,超純水洗滌細(xì)胞3次。最后將細(xì)胞置于倒置顯微鏡下觀察、拍照。

1.2.5 細(xì)胞脂肪酸組成成分分析 細(xì)胞培養(yǎng)及處理過(guò)程同步驟1.2.2,培養(yǎng)結(jié)束后,用胰蛋白酶消化細(xì)胞并離心收集,PBS清洗2次后再次于4 ℃ 1500 r/min條件下離心并收集,重懸于0.5 mL超純水中。甲酯化:將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到具塞玻璃試管內(nèi),快速加入3 mL 5%鹽酸甲醇(w/v),振蕩后放入100 ℃恒溫箱甲酯化反應(yīng)3 h,冷卻至室溫,加入1 mL超純水和1 mL正己烷強(qiáng)力振蕩1 min后靜置,回收上層正己烷層,水層用2 mL正己烷萃取2次。合并正己烷相并用等體積超純水洗滌一次,收集正己烷相,無(wú)水硫酸鈉干燥,過(guò)濾后用高純氮?dú)獯蹈?100 μL正己烷回溶脂肪酸甲酯,待測(cè)。

GC色譜條件:氣相色譜分析儀進(jìn)行檢測(cè),色譜柱DB-23(0.25 mm×60 m×0.25 μm),載氣高純氮?dú)饬魉?.5 mL/min,進(jìn)樣口溫度250 ℃,FID檢測(cè)器溫度250 ℃,程序升溫條件:130 ℃保持1 min,6.5 ℃/min升至170 ℃,接著2.75 ℃/min升至225 ℃并停留10 min。采用脂肪酸甲酯混標(biāo)進(jìn)行外標(biāo)法定量。

1.2.6 ELISA分析LTB4、PGE2、LXA4表達(dá) 細(xì)胞培養(yǎng)及處理過(guò)程同步驟1.2.2,培養(yǎng)結(jié)束后,收集細(xì)胞培養(yǎng)液并在4 ℃下3000 r/min離心5 min,收集上清液用于LTB4、PGE2、LXA4含量測(cè)定。檢測(cè)用對(duì)應(yīng)商品化ELISA Kit測(cè)定,檢測(cè)方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。另需用胰酶消化收集細(xì)胞用于蛋白測(cè)定,參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。LTB4、PGE2、LXA4含量結(jié)果需用胰酶進(jìn)行校正,本文最終結(jié)果為各處理組LTB4、PGE2、LXA4含量相對(duì)于空白對(duì)照組百分比。

1.2.7 LTB4、PGE2、LXA4對(duì)癌細(xì)胞增殖的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞懸液接種于96孔板,每孔設(shè)置等體積培養(yǎng)液對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)24 h,細(xì)胞充分貼壁后,細(xì)胞進(jìn)行無(wú)血清饑餓12 h(即采用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞12 h)。加入不同濃度(5、50、500 nmol/L)的脂肪酸代謝產(chǎn)物L(fēng)TB4、PGE2、LXA4,對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液,繼續(xù)分別培養(yǎng)24 h采用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率,由此評(píng)價(jià)脂肪酸代謝產(chǎn)物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 ALA、EPA、DHA和5-FU對(duì)細(xì)胞存活率的影響

如圖1所示,不同劑量的n-3多不飽和脂肪酸和5-FU對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的生長(zhǎng)均有不同程度的抑制,且具有明顯的時(shí)間和劑量效應(yīng)。MTT結(jié)果顯示,24 h后低濃度脂肪酸(0～25 μmol/L)幾乎不影響HCT116細(xì)胞的正常生長(zhǎng),并且還能輕微地促進(jìn)其生長(zhǎng)。ALA、EPA、DHA和5-FU的濃度為200、160、120、10 μmol/L時(shí),48 h后細(xì)胞存活率分別為53.8%、57.3%、58.6%和54.1%。由此可以看出,來(lái)源于海洋魚(yú)類不飽和程度更高的脂肪酸EPA和DHA較來(lái)源于植物油的ALA表現(xiàn)出更強(qiáng)的抗結(jié)腸癌活性。

圖1 不同劑量脂肪酸和5-FU對(duì)HCT116細(xì)胞存活率的影響Fig.1 Effect of ALA,DHA,EPA and 5-FU concentration on HCT116 cell viability

2.2 ALA、EPA、DHA和5-FU對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

利用Annexin V/PI雙染色法可在流式細(xì)胞儀區(qū)分正常細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞。如圖2所示,結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116在未經(jīng)藥物處理時(shí)(CK組)表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)狀態(tài),細(xì)胞中未見(jiàn)明顯的凋亡和死亡。當(dāng)DHA、EPA、ALA和5-FU作用48 h后,細(xì)胞發(fā)生了一定程度的凋亡,DHA、EPA、ALA和5-FU處理組的凋亡率分別為29.2%、21.8%、7.9%和10.4%,DHA和EPA促結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的效果優(yōu)于ALA,與MTT結(jié)果相符。

圖2 ALA、EPA、DHA和5-FU對(duì)HCT116細(xì)胞凋亡的影響Fig.2 Effect of ALA,DHA,EPA and 5-FU on the apoptosis of HCT116 cells 注:ALA、EPA、DHA、5-FU濃度分別為200、160、120、10 μmol/L,圖3同；B1代表死亡細(xì)胞；B2代表早期凋亡細(xì)胞；B3代表正常細(xì)胞；B4代表晚期凋亡細(xì)胞。

2.3 ALA、EPA、DHA和5-FU促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)脂滴積累

油紅O染色法可觀察HCT116細(xì)胞經(jīng)多不飽和脂肪酸處理后細(xì)胞質(zhì)中脂滴分布情況,結(jié)果如圖3所示。從圖3中可以看出,未經(jīng)藥物處理過(guò)的癌細(xì)胞幾乎沒(méi)有脂滴積累。經(jīng)5-FU處理后,HCT116細(xì)胞出現(xiàn)少數(shù)顆粒較小的脂滴,說(shuō)明細(xì)胞被損傷后有部分脂肪進(jìn)入胞質(zhì)。而經(jīng)ALA、EPA、DHA處理后,癌細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量明顯增加、體積明顯增大,說(shuō)明添加的脂肪酸在細(xì)胞質(zhì)中以脂滴的形式積累。

圖3 HCT116細(xì)胞經(jīng)ALA、EPA、DHA和5-FU處理48 h后細(xì)胞內(nèi)脂滴積累的油紅染色圖(100×)Fig.3 The pictures of oil red straining with the accumulation of lipid droplets in HCT116 cells after the addition of ALA,DHA,EPA and 5-FU for 48 h(100×)

2.4 ALA、EPA、DHA和5-FU對(duì)癌細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成的影響

如表1所示,n-3多不飽和脂肪酸處理改變了結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116內(nèi)的脂肪酸組成比例。很明顯,經(jīng)ALA、EPA、DHA處理后,HCT116細(xì)胞內(nèi)對(duì)應(yīng)的脂肪酸含量顯著升高(p<0.05)。額外補(bǔ)充ALA(200 μmol/L)、EPA(160 μmol/L)和DHA(120 μmol/L)后,細(xì)胞內(nèi)對(duì)應(yīng)的脂肪酸含量可分別由對(duì)照組的0%、0.79%±0.01%、2.40%±0.17%增加到11.75%±1.16%、36.41%±0.38%、39.84%±1.30%。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),ALA的添加使得HCT116細(xì)胞內(nèi)大量累積EPA(從0.79%±0.01%上升到4.09%±0.24%)和DHA(從2.40%±0.17%上升到21.57%±1.94%),EPA的添加使得HCT116細(xì)胞內(nèi)大量累積DHA(從2.40%±0.17%上升到19.21%±0.03%),而DHA的添加卻未明顯提高胞內(nèi)ALA和EPA含量,說(shuō)明在HCT116細(xì)胞內(nèi)從ALA轉(zhuǎn)化為EPA再轉(zhuǎn)化為更長(zhǎng)鏈的脂肪酸DHA的轉(zhuǎn)化效率很高,且不可逆[23]。另一方面,作為母體脂肪酸,ALA還能在HCT116細(xì)胞內(nèi)少量轉(zhuǎn)化為n-6系脂肪酸亞油酸(從2.43%±0.22%上升到5.14%±0.04%)和花生四烯酸(從2.99%±0.45%上升到4.96%±0.07%),DHA和EPA則無(wú)此功能。陽(yáng)性藥物5-FU的添加對(duì)HCT116細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成變化與空白對(duì)照組整體上無(wú)明顯差異,說(shuō)明5-FU引起的細(xì)胞凋亡未造成細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成變化。

表1 ALA、EPA、DHA和5-FU處理48 h后HCT116細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸分析結(jié)果Table 1 Fatty acid analysis of HCT116 cells with ALA,DHA,EPA and 5-FU for 48 h

2.5 脂肪酸代謝產(chǎn)物PGE2、LTB4、LXA4含量變化

研究表明LTB4和PGE2具有促炎作用,可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲,提高細(xì)胞遷移能力,上調(diào)VEGF表達(dá),抑制癌細(xì)胞凋亡和免疫功能[8,10]。反之,LXA4是一類抗炎分子,具有與PGE2相反的生物活性,可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,侵襲和遷移能力[11]。如圖4A、圖4B所示,ALA、EPA和DHA處理明顯促進(jìn)HCT116細(xì)胞PGE2和LXA4的分泌(p<0.05),而陽(yáng)性藥物5-FU處理組卻明顯下調(diào)LXA4分泌,對(duì)PGE2的分泌未造成影響。LXA4/PGE2含量比可在一定程度上反映脂肪酸代謝產(chǎn)物,即促炎因子和抗炎因子在細(xì)胞內(nèi)的平衡更趨向于哪方[5]。如圖4D所示,對(duì)于HCT116細(xì)胞,所有脂肪酸處理組(5-FU組除外)的LXA4/PGE2的比例較空白對(duì)照組顯著上調(diào)(p<0.05)。另外,如圖4C所示,HCT116細(xì)胞的所有脂肪酸處理組(ALA、EPA、DHA)的LTB4分泌量被明顯下調(diào),僅5-FU處理組的LTB4分泌量較空白對(duì)照組有了顯著的提升(p<0.05)。

圖4 ALA、EPA、DHA和5-FU處理對(duì)HCT116細(xì)胞PGE2、LTB4、LXA4、LXA4/PGE2含量變化的影響Fig.4 Effect of ALA,DHA,EPAand 5-FUon the content of PGE2,LTB4,LXA4,LXA4/PGE2 in HCT116 cells注:ALA、EPA、DHA、5-FU濃度分別為200、160、120、10 μmol/L,脂肪酸和5-FU處理組分別進(jìn)行顯著性分析,柱狀圖上的不同字母表示數(shù)據(jù)間有顯著差異(p<0.05),圖5同。

2.6 脂肪酸代謝產(chǎn)物PGE2、LTB4、LXA4對(duì)癌細(xì)胞增殖的影響

如圖5所示,將HCT116細(xì)胞暴露于不同處理濃度的PGE2(5、50、500 nmol/L),LTB4(5、50、500 nmol/L),LXA4(0.5、5、50 nmol/L)中,細(xì)胞存活率不同。低濃度的PGE2基本不影響結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖,當(dāng)濃度升高至500 nmol/L可抑制HCT116細(xì)胞增殖。與此相反的是,LTB4促進(jìn)結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞的增殖。而當(dāng)癌細(xì)胞暴露于LXA4中,細(xì)胞存活率顯著下降(p<0.05),隨著濃度的增加逐漸抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)。

圖5 PGE2、LTB4、LXA4對(duì)HCT116細(xì)胞存活率的影響Fig.5 Effect of PGE2,LTB4 and LXA4 on HCT116 cell viability注:“-”表示未添加,“+”表示添加濃度為5 nmol/L,“++”表示添加濃度為50 nmol/L,“+++”表示添加濃度為500 nmol/L。

3 討論

癌細(xì)胞中的Δ5和Δ6脫氫酶活力低于正常細(xì)胞,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸GLA,AA,EPA和DHA含量相對(duì)較少[12-15],經(jīng)研究結(jié)果表明結(jié)腸癌HCT116脂肪酸主要為飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸(>90%)。多不飽和脂肪酸極易誘發(fā)自由基的聚積和脂質(zhì)過(guò)氧化進(jìn)程而對(duì)癌細(xì)胞有毒性作用[16],因此,腫瘤細(xì)胞內(nèi)較低的脫氫酶活力是其保護(hù)自我的防御機(jī)制。外源性添加多不飽和脂肪酸(ALA,DHA,EPA),通過(guò)細(xì)胞膜以脂滴形式儲(chǔ)存于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),改變癌細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸組成,提高不飽和脂肪酸比例,抑制HCT116細(xì)胞增殖。本研究發(fā)現(xiàn),外源添加n-3 PUFAs(ALA,DHA,EPA)顯著提高了癌細(xì)胞內(nèi)DHA和EPA的含量(p<0.05)。EPA和DHA既能在癌細(xì)胞內(nèi)代謝生成促炎因子PGs、TXs、LTs,又能產(chǎn)生抗炎分子脂氧素LXs、消散素RSVs、保護(hù)素PTs、巨噬細(xì)胞源消散素,此二類代謝產(chǎn)物在生物體內(nèi)的平衡決定著腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力[5,11]。HCT116細(xì)胞中LTB4的分泌量在脂肪酸添加后較空白對(duì)照組下降,而PGE2和LXA4的水平上升。值得注意的是,盡管DHA、EPA和ALA處理組中PGE2和LXA4的含量均被提高,但LXA4/PGE2的比例較空白對(duì)照組顯著上升(p<0.05),表明DHA、EPA和ALA對(duì)癌細(xì)胞的毒性作用更主要的是提升LXA4含量,使癌細(xì)胞趨向于抗炎狀態(tài)。

本研究首次報(bào)道了LXA4在多不飽和脂肪酸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞方面的作用,過(guò)往研究認(rèn)為EPA和DHA主要是通過(guò)抑制COX-2表達(dá)發(fā)揮抑癌作用[9]。DAS等[6]與Polavarapu等[17]研究發(fā)現(xiàn)LXA4對(duì)腫瘤細(xì)胞具有直接抑制作用。將HCT116細(xì)胞暴露于不同處理濃度的PGE2、LTB4、LXA4中,發(fā)現(xiàn)LTB4明顯促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖,而PGE2和LXA4卻能顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖(p<0.05),且LXA4對(duì)癌細(xì)胞的抑制效果明顯強(qiáng)于PGE2,0.5 nmol/L 的LXA4即可使兩細(xì)胞存活率顯著下降(p<0.05)。因而我們推測(cè)PUFAs的抑癌作用關(guān)鍵在于其促進(jìn)了LXA4分泌,抑制了LTB4生成,而與PGE2的關(guān)系不大。

盡管PUFAs和5-FU處理均抑制了結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的生長(zhǎng),但其作用后癌細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成和PGE2、LTB4、LXA4的分泌卻存在較大差異。由此說(shuō)明陽(yáng)性藥物5-FU對(duì)HCT116細(xì)胞的抑制作用不同于n-3 PUFAs,我們需要?dú)w納總結(jié)PUFAs作用機(jī)制。癌細(xì)胞中的Δ5和Δ6脫氫酶活力不足并伴隨著花生四烯酸AA,EPA和DHA含量降低,導(dǎo)致PGE2合成增加作為代償機(jī)制[18]。研究發(fā)現(xiàn)炎性環(huán)境(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、癌癥)下多不飽和脂肪酸含量較低并伴有血液和體液PGE2水平顯著增高[19-21]。Tateishi等[22]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn),患結(jié)腸炎癥的小鼠口服AA后,其LXA4生成量顯著增加,而PGE2分泌量無(wú)明顯變化。以上研究表明,體內(nèi)EPA和DHA水平較低時(shí),外源添加上述脂肪酸可增加LXA4產(chǎn)生,而PGE2的生成量變化不大。由此可見(jiàn),升高LXA4的生成量比PGE2能更有效地終止炎癥狀態(tài)(癌癥也是一種炎癥狀態(tài)),且MTT實(shí)驗(yàn)證明LXA4對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116具有直接抑制作用。

綜上所述,我們推測(cè)多不飽和脂肪酸可通過(guò)改變脂肪酸代謝產(chǎn)物促炎因子PGE2和LTB4和抗炎因子脂氧素、消散素、保護(hù)素和巨噬細(xì)胞源消散素的分泌發(fā)揮細(xì)胞毒性作用。

4 結(jié)論

n-3多不飽和脂肪酸(ALA、EPA、DHA)和5-FU對(duì)HCT116細(xì)胞的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用和誘導(dǎo)凋亡作用,來(lái)源于海洋魚(yú)類不飽和程度更高的脂肪酸EPA和DHA較來(lái)源于植物油的ALA表現(xiàn)出更強(qiáng)的抗結(jié)腸癌活性。ALA、EPA、DHA促進(jìn)HCT116細(xì)胞內(nèi)脂滴積聚狀態(tài),提高不飽和脂肪酸比例,降低LTB4積累,提高LXA4/PGE2比率,使癌細(xì)胞趨向于抗炎狀態(tài),進(jìn)而對(duì)HCT116細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用。