趙晟珣 陳輝 劉菊

武漢市第一醫(yī)院老年病科，湖北 武漢 430000

目前全世界約有2億人患有骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)，其患病率已躍居常見(jiàn)疾病的第7位[1,2]。在以往研究中，對(duì)于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的研究較多，而老年男性骨質(zhì)疏松癥并沒(méi)有得到應(yīng)有的重視，有報(bào)道顯示老年男性骨質(zhì)疏松的危害并不亞于老年女性，其傷殘率和死亡率均明顯高于老年女性[3]。因此確定老年男性骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)因素有助于預(yù)防及減少老年男性人群骨折發(fā)生率及致殘率，從而提高晚年生活質(zhì)量。

有研究發(fā)現(xiàn)，OP 46%～62% 由遺傳因素決定，38%～54%取決于后天因素[4,5]，因此，從基因?qū)W角度研究十分必要，Klotho基因首次是由Kuro-o于1997年發(fā)現(xiàn)的，被報(bào)道與OP的發(fā)生密切相關(guān)，主要集中于G395 A、 F352 V、C1818T基因位點(diǎn)等[6]， 而不同國(guó)家、地區(qū)、民族、性別間的研究結(jié)果不盡相同[7-11]。

本研究通過(guò)病例-對(duì)照研究分析武漢地區(qū)漢族老年男性骨質(zhì)疏松癥的危險(xiǎn)因素，并重點(diǎn)分析Klotho G-395 A位點(diǎn)基因分布差異。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

回顧性調(diào)查：收集武漢第一醫(yī)院老年科2015年2月至2016年10月住院的武漢地區(qū)漢族老年男性人群(年齡≥60歲)作為研究對(duì)象，共計(jì)195例，符合下列入選標(biāo)準(zhǔn)：所有病例均排除嚴(yán)重腦血管病、急性心肌梗死、腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全、急性感染及應(yīng)激等影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的疾病。

將195例實(shí)驗(yàn)對(duì)象隨機(jī)分為兩組：1.符合WHO原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[12](即雙能X 線測(cè)得骨密度值≤青年健康人群骨密度-2.5SD)，除外繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥老年男性患者(平均年齡78.71±6.17)110例，作為原發(fā)性骨質(zhì)疏松組OP組；2.同期住院無(wú)骨質(zhì)疏松癥(即雙能X線測(cè)得骨密度值>青年健康人群骨密度-1SD)老年男性人群(平均年齡74.27±7.14)85例，作為骨質(zhì)疏松癥對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1臨床資料

收集入選病例的年齡、測(cè)量身高、體重、計(jì)算體重指數(shù)(BMI)，測(cè)量收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)，清晨空腹采血化驗(yàn)血糖(FBG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C) 等各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.2骨密度測(cè)定

應(yīng)用法國(guó)DMS公司生產(chǎn)的DEXA檢測(cè)腰椎前后位和(或)髓關(guān)節(jié)BMD,每日開(kāi)機(jī)后用體模對(duì)設(shè)備進(jìn)行BMD校準(zhǔn),當(dāng)體模測(cè)量值的變異系數(shù)(腰椎為1.2%,股骨近端為2.0%)在正常范圍內(nèi)時(shí)即可開(kāi)始檢測(cè),每部位重復(fù)操作3次,每次均重新定位。骨密度檢測(cè)人員是經(jīng)過(guò)專門培訓(xùn)的同一個(gè)技術(shù)人員,骨密度分析系統(tǒng)可自動(dòng)獲得BMD結(jié)果。

1.2.3Klotho基因SNP檢測(cè)

用Taqman等位基因特異性雜交分析進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型。參照Klotho基因序列(NCBI序列號(hào):AL161898)及文獻(xiàn),由合成引物和Taqman探針,上游引物:TAGGGCCCGGCAGGAT,下游引物CCTGGAG-CGGCTTCGTC,FAM標(biāo)記探A:CCCCAAGT-CGGGAAAAGTTGGTC,HEX標(biāo)記探針G:CCC-CCAAGTCGGGGAAAGTTGGTC。采用20 μl反應(yīng)體系,上下游引物濃度均為0.8 μmol/L,探針A和G終濃度分別為75 nmol/L和250 nmol/L,反應(yīng)條件:95°預(yù)變性3 min,95°15 s、60°1 min共40個(gè)循環(huán),在熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

建立數(shù)據(jù)庫(kù)，將資料統(tǒng)一錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，利用SPSS18.0軟件，對(duì)連續(xù)變量的危險(xiǎn)因素進(jìn)行t檢驗(yàn)，將非連續(xù)變量危險(xiǎn)因素的暴露等級(jí)分為兩級(jí)(有、無(wú))，計(jì)算每個(gè)因素的OR值及95%CI，應(yīng)用多元Logistic回歸分析武漢市漢族老年骨質(zhì)疏松的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較

兩研究組 DBP、LDL-C水平無(wú)顯著差異(F值分別為0.393、3.445,P值均>0.05)；OP組年齡、BMI、SBP、FBG水平高于對(duì)照組 (F值分別為6.790、0.360、6.537、10.084，P值均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床資料的比較Table 1 Comparison of clinical data between

2.2 Klotho G-395 A 基因位點(diǎn)分布

OP組AA基因型及A等位基因頻率較對(duì)照組均升高，有顯著性差異(OR值分別為2.429、1.462，P值分別為0.022、0.027)，兩組AG、GG基因型頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均>0.05)見(jiàn)表2。

2.3 應(yīng)用Logistic回歸分析OP危險(xiǎn)因素

以是否患骨質(zhì)疏松為因變量，將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的5個(gè)因素作為自變量選入多因素進(jìn)行Logistic多元回歸分析，結(jié)果顯示，年齡、BMI、SBP、FBG、klotho基因G395 A AA基因型5個(gè)因素均為武漢地區(qū)漢族老年男性患者發(fā)生骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)因素(OR值分別為1.088、1.319、1.055、1.208、2.969，P值分別為 0.002、0.001、0.001、0.049、0.033)，其中AA基因型是武漢地區(qū)漢族老年男性骨質(zhì)疏松的易感基因型。見(jiàn)表3。

表2 Klotho 基因G-395 A多態(tài)性分布[n(%)]Table 2 The polymorphism distribution of Klotho gene G-395 A [n (%)]

表3 OP危險(xiǎn)因素分析(Logistic回歸分析)Table 3 Risk factors analysis of OP (logistic regression analysis)

3 討論

在老年人群中，OP的發(fā)生率高、致殘率高，越來(lái)越成為困擾老年人的疾病之一。骨折作為OP的臨床后遺癥,普遍認(rèn)為主要是絕經(jīng)婦女的健康問(wèn)題[13],但男性也承擔(dān)著巨大的健康負(fù)擔(dān)。50歲以上的男性骨質(zhì)疏松患者的骨折風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)22%左右[13]。和女性不同，男性傾向于緩慢地丟失骨量[14, 15]。因此，研究老年男性骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)因素，有助于指導(dǎo)易感人群預(yù)防骨質(zhì)疏松，減少男性的骨質(zhì)流失和骨折風(fēng)險(xiǎn)[16, 17]。

本研究校正混雜因素后行Logistic回歸分析，顯示年齡、高體重指數(shù)、高收縮壓、高空腹血糖、Klotho G-395 A AA基因型是武漢市漢族老年男性骨質(zhì)疏松的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其中Klotho G-395 A位點(diǎn)中AA基因型可能是武漢漢族老年男性骨質(zhì)疏松的易感基因型，這與MG Pavlatou等研究類似，證明了原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生、發(fā)展可能與Klotho G-395 A基因表達(dá)異常有關(guān)10。目前有關(guān)Klotho G-395 A位點(diǎn)與OP的關(guān)系有不同的研究結(jié)果，分析可能與被研究人群的年齡、地區(qū)和種族差異不同有關(guān)，還需進(jìn)一步的采取不同地區(qū)及種族的大樣本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

增齡是OP的危險(xiǎn)因素，多篇文獻(xiàn)已明確，隨著年齡的增加，成骨細(xì)胞活性減弱、1α羥化酶活性減弱、甲狀旁腺及降鈣素等參與骨形成的激素均減少，從而導(dǎo)致OP的發(fā)生[18]。而B(niǎo)MI與OP的關(guān)系存在爭(zhēng)議，有文獻(xiàn)報(bào)道較高的體質(zhì)量和BMI可以保護(hù)機(jī)體，減少OP的發(fā)生[19]，而本研究顯示高BMI是武漢地區(qū)老年男性O(shè)P危險(xiǎn)因素，可能對(duì)于骨質(zhì)疏松的發(fā)生，體重指數(shù)有相對(duì)安全范圍，過(guò)高、過(guò)低的BMI指數(shù)均為OP的危險(xiǎn)因素。此外，兩組對(duì)比，高收縮壓的老年男性患者更易罹患OP疾病，而兩組舒張壓對(duì)比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能原因?yàn)槔夏耆嗣}壓差增大，多以單純收縮壓升高為主，收縮壓升高會(huì)引起鈣代謝紊亂，尿鈣排泄增多，導(dǎo)致骨骼脫鈣[20]，從而引起OP的發(fā)生。本研究還證實(shí)了高空腹血糖是武漢地區(qū)老年男性O(shè)P的危險(xiǎn)因素，糖尿病與OP的關(guān)系是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，很多學(xué)者認(rèn)為肥胖、高胰島素血癥、氧化應(yīng)激、慢性炎癥反應(yīng)、終末糖基化產(chǎn)物等因素可能導(dǎo)致骨代謝的異常[21]。

綜上所述，年齡、BMI、SBP、FBG、klotho基因G395 A AA基因型可作為武漢地區(qū)漢族老年男性骨質(zhì)疏松的預(yù)測(cè)指標(biāo)，但具體機(jī)制還需做進(jìn)一步的深入研究。