陳盛文，潘 杰，陳麗萍，柳小強，王自強，張險朋★

（1.廣東省東莞市長安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523846；2.東莞市動物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

豬流感（Swine influenza，SI）是由豬流感病毒(Swine influenza virus，SIV)引起豬的急性呼吸道傳染病，是一種人畜共患傳染病。豬流感病毒屬于正黏病毒科，A型流感病毒屬。豬群中流行的豬流感毒株主要是經(jīng)典型H1N1、類人型H3N2、類禽型 H1N1，另外 H1N2、H1N7、H3N6 等亞型的毒株也有報道。目前，世界廣泛流行的豬流感血清型主要是H1N1、H1N2和H3N2，其中，豬群中H1N1亞型豬流感流行最為普遍，全球有25%的豬群受到過H1N1亞型豬流感病毒的感染。豬感染豬流感病毒以后主要的臨床特征是突發(fā)、高熱、咳嗽、呼吸困難、高發(fā)病率、低死亡率。豬流感在單獨感染的情況下，死亡率很低，如果是繼發(fā)或混合感染其他呼吸道細菌、病毒感染可以使豬的病情加重，死亡率增加，從而引起養(yǎng)豬業(yè)的重大經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將豬流感列為法定報告動物疫病，我國將其列為三類動物疫病。1918年首先在美國報告了豬流感的疫情，隨后世界各大洲均有本病的發(fā)生和流行。2009年3月，墨西哥發(fā)生了人感染H1N1亞型豬流感疫情，并很快傳入多個國家，剛開始世界衛(wèi)生組織（WHO）稱為人感染豬流感，后來我國將其更名為“甲型H1N1流感”。由于豬是豬流感、禽流感和人流感病毒的“混合器”，豬流感也可以傳染給人，在A型流感的流行、傳播和病毒遺傳變異中起到很特殊的作用，因此豬流感在公共衛(wèi)生中具有很重要的意義。為了掌握H1N1亞型豬流感在東莞市的流行情況，在2015～2017年在東莞市豬養(yǎng)殖場采集豬血清進行調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 被檢血清 2015～2017年采自東莞市豬養(yǎng)殖場，共937份。采用豬前腔靜脈采血，3000r/min,分離出血清，-20℃保存，備檢。

1.1.2 試劑 H1N1亞型豬流感抗體ELISA試劑盒，購自加拿大Biovet公司。

1.1.3 儀器設(shè)備 Sunrise酶標儀購自奧地利Tecan公司，移液器購自eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 用洗滌液1：10稀釋待檢血清。按照順序依次加入50μL的陽性、陰性對照血清和稀釋的血清，封板，室溫（23±2℃）下孵育1h。

1.2.2 棄去孔內(nèi)所有液體，每孔加入300μL的洗滌液進行泡洗，重復洗板4次，最后一次在吸水紙上拍干孔內(nèi)液體。

1.2.3 每孔加入50μL工作濃度的單克隆抗體，封板，室溫（23±2℃）下孵育15min。棄去孔內(nèi)所有液體，上述方法洗板。

1.2.4 每孔加入50μL工作濃度的HRP酶標二抗，封板，室溫（23±2℃）下孵育1h。棄去孔內(nèi)所有液體，棄去孔內(nèi)所有液體，上述方法洗板。

1.2.5 每孔加入100μL的底物顯色劑，室溫（23±2℃）下避光孵育10min。

1.2.6 每孔加入100μL的終止液，15min內(nèi)在450nm波長下讀取吸光度值。

1.2.7 抑制率的計算：抑制率（%）=[1-(樣品OD值÷陰性對照平均值)]×100

1.2.8 結(jié)果判定

陰性標準對照血清的OD平均值必須大于0.8，而且陽性標準對照血清的抑制率必須大于85%，試驗結(jié)果成立。當樣品的抑制率大于或者等于30%，判為H1N1亞型豬流感病毒抗體陽性；當樣品的抑制率小于30%，判為H1N1亞型豬流感病毒抗體陰性。

2 結(jié)果

2015～2017年共檢測豬養(yǎng)殖場點個次68個，937份豬血清，抗體陽性數(shù)411份，抗體陽性率為43.86%，其中2015～2017年的抗體陽性率分別為 62.83%、57.08%、26.06%，詳細結(jié)果見表1。年度抗體陽性率，有顯著的差異，從2015～2017年，H1N1亞型豬流感病毒抗體有下降的趨勢，趨勢圖（見圖1）。

表1 2015-2017年東莞市H1N1亞型豬流感病毒抗體檢測結(jié)果

圖1 2015～2017年東莞市H1N1豬流感抗體陽性率趨勢圖

3 討論

根據(jù)試驗結(jié)果，2015～2017年東莞市H1N1亞型豬流感抗體的陽性率為43.86%，由于東莞市豬養(yǎng)殖場的豬群均未免疫豬流感疫苗，所以試驗結(jié)果表明東莞市的豬群存在H1N1亞型豬流感的感染或曾經(jīng)感染。陳櫻等在2009～2013年對廣西11個地級市的豬群進行血清學調(diào)查，H1N1亞型豬流感的抗體陽性為20.68%；黃秉政等在2012年2月至2013年5月，對來自山東省規(guī)模化豬場進行H1N1亞型豬流感血清學調(diào)查，抗體陽性率為33.31%；施蔡培等在2011～2013年對上海崇明地區(qū)規(guī)模豬場豬流感血清學調(diào)查，H1N1亞型豬流感抗體陽性分別為40.13%、40.24%和48.91%。上述地區(qū)的調(diào)查結(jié)果H1N1亞型豬流感的抗體陽性率有所差異，但結(jié)果都表明，豬群普遍存在H1N1亞型豬流感病的感染或曾經(jīng)感染。

豬的上呼吸道上皮細胞同時具有α-2,3和α-2,6的唾液酸受體分子，其中α-2,3是人流感病毒的受體，α-2,6是禽流感病毒的受體，所以豬是人、豬、禽流感病毒的共同宿主，是不同流感病毒的“混合器”，很多新型的流感病毒都是在豬體內(nèi)混合產(chǎn)生。所以，做好豬流感的防控不僅在降低畜牧業(yè)中經(jīng)濟損失具有很大作用，在公共衛(wèi)生中也具有很重要的意義。做好豬流感的防控，（1）改善豬場的養(yǎng)殖環(huán)境，降低飼養(yǎng)密度，做好豬舍的通風，定期對環(huán)境進行消毒，提高豬群的免疫力；（2）生豬進行調(diào)運時加強檢疫，發(fā)現(xiàn)豬群有流感癥狀，禁止豬群的調(diào)運；（3）加強豬流感的公共衛(wèi)生的宣傳，發(fā)現(xiàn)豬群有流感癥狀的發(fā)生及時上報，做好監(jiān)測，同時，飼養(yǎng)員或養(yǎng)殖場人員出現(xiàn)流感癥狀也禁入豬舍，防止人的流感傳給豬；（4）豬養(yǎng)殖場禁止同時飼養(yǎng)家禽，防止禽流感病毒傳給豬。

目前，檢測豬流感抗體的方法主要是酶聯(lián)免疫吸附試驗和血凝抑制試驗，研究表明這兩種方法的符合性較高。血凝抑制試驗操作比較復雜，試驗過程需要去除非特異性的物質(zhì)，試驗時間較長，抗原的效價和結(jié)果的判定受人為因素的影響，優(yōu)點是血凝抑制的檢測成本較低，不需要貴重儀器，適合基層的推廣。此次試驗采用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗方法，適合大規(guī)模樣品的監(jiān)測，用酶標儀讀數(shù)，人為主觀因素影響小，操作簡便，試驗時間短，缺點是采用商品化試劑盒，檢測的成本較高。

自從2009年暴發(fā)甲型H1N1流感以來，豬流感的研究已經(jīng)得到研究人員的關(guān)注，由于豬流感在在豬體內(nèi)可能會發(fā)生重組的現(xiàn)象，出現(xiàn)新型病毒。豬群的流感和人的流感密切相關(guān)，人群中流行的甲型H1N1流感，在豬群也能很快的就能檢測H1N1亞型豬流感抗體的陽性率大幅上升，豬群中流行的豬流感毒株也可能很快就傳給人。試驗結(jié)果顯示，3年來H1N1亞型豬流感抗體是呈下降趨勢，根據(jù)從衛(wèi)生部門了解到，這兩年來東莞市人流行的甲型流感是以H3N2為主，陽性率下降可能是因為流感流行的優(yōu)勢毒株在轉(zhuǎn)變，豬流感和人流感的相關(guān)性還有待進一步的研究。因此，加強豬流感的監(jiān)測，可以及時發(fā)現(xiàn)新型的毒株，為動物流感和人的流感流行做好預(yù)警和預(yù)測，為豬流感的防控提供可靠的數(shù)據(jù)。