姜德相，王立文，董桂紅

（吉林省畜牧業(yè)學校，吉林 白城 137000）

以往認為綿羊對結核病原體易感性差，臨床病歷不常見，很少有人報道和進行深入研究。由于近些年養(yǎng)羊業(yè)特別是育肥羊行業(yè)的興起，飼養(yǎng)規(guī)模和密度增大使結核病在羊群中進行傳播，同時還威脅著人類的身心健康。作者通過臨床解剖收集27只具有典型病理變化的病歷進行歸納總結，希望能夠認清結核病在綿羊群中的流行情況并對結核病防治提供幫助。

1 綿羊結核病的實驗室診斷和病原體類型

目前，按結核病病原體對易感動物的易感性，將其分為人型、牛型和禽型。關于綿羊結核病病原體沒有具體表述，作者把近5年來自不同飼養(yǎng)場臨床送檢的27只病理變化典型的實驗動物進行實驗室診斷和分型。

1.1 實驗室診斷

1.1.1 直接厚涂片法

（1）制片 取疑似結核結節(jié)內的干酪樣、膿樣標本0.05～0.1g，放于玻片中央，涂成20mm×25mm橢圓形，取不同結核結節(jié)至少涂2張片子，進行微火固定。其中有化膿性腹膜炎的病歷，取膿樣標本也同時進行檢測。

（2）染色 滴加5%石炭酸復紅液于玻片上，加溫至有蒸汽出現(xiàn)后放置5～10min，水洗。之后，加5%鹽酸酒精脫色數(shù)次，至淡紅色為止，水洗，加美蘭復染2～3min，水洗，自然干燥后鏡檢。

（3）鏡檢及報告 鏡檢至少檢查100個視野，不得少于3～4min，未找到抗酸菌者為Z（-）。100個視野找到抗酸菌1～2條者，實報菌數(shù)。100個視野找到抗酸菌3～9條者報O（+）。100個視野找到抗酸菌10～39條者報T（++）。每個視野找到抗酸菌～10條者報N（+++）。每個視野找到抗酸菌10條以上者報 M（++++）。

（4）統(tǒng)計結果 以時間先后排序（干：代表干酪物，膿：代表膿汁）見表1。

（5）結果 27只臨床病理變化典型病例，檢出陽性率達77.8%，可見綿羊對結核病的病原體易感性較強。

1.1.2 分離培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)基 常用于結核桿菌的分離培養(yǎng)基有改良羅氏培養(yǎng)基、酸性改良羅氏培養(yǎng)基、丙酮酸培養(yǎng)基和小川培養(yǎng)基。

（2）病料預處理法 酸處理法：此法適用改良羅氏培養(yǎng)基和丙酮酸培養(yǎng)基。取痰液標本或其它標本（剪碎后研磨）加2～4倍量4%硫酸液，室溫處理20min，其間振蕩2～3次，促進液化。堿處理法：取標本加2～4倍量的2%NaOH溶液，37℃處理30min。此法適用于酸性改良羅氏培養(yǎng)基和小川培養(yǎng)基。

（3）接種 取混勻的消化的病料液0.1mL，均勻地接種于培養(yǎng)基斜面上，每份標本至少接種兩管。接種后，將試管斜放，1d后，豎立直于試管架上。也可以將消化的病料離心后，取沉淀接種效果更好。

（4）結果判定 接種后置37℃培養(yǎng)，每周觀察一次，陽性者隨時報告，陰性者在8周時報告之。陽性者報告抗酸菌培養(yǎng)陽性或以菌落數(shù)報告。菌落數(shù)占據(jù)培養(yǎng)基面1/4以下者為（+）；菌落數(shù)占據(jù)培養(yǎng)基面1/4以上，1/2以下者為（++）；菌落數(shù)占據(jù)培養(yǎng)基面1/2以上、3/4以下者為（+++）；菌落數(shù)占據(jù)全斜面者為（++++）。陰性者報告抗酸性菌培養(yǎng)陰性。

表1 涂片鏡檢結果

表2 菌型鑒定

根據(jù)結核分枝桿菌和其他分枝桿菌的鑒別依據(jù)：結核分枝桿菌（L－J：+ PNB：－ T2H：+），牛分枝桿菌（L－J：+ PNB：－ T2H：－），其他分枝桿菌（L－J：+ PNB：+ T2H：+）。

1.2 菌型鑒定

分離出抗酸性菌后，為了確定是哪一個型的分枝桿菌，則必須進一步進行鑒定。

鑒定培養(yǎng)基：改良羅氏培養(yǎng)基（L－J）。對氨基苯甲酸培養(yǎng)基（PNB），按0.5mg/mL（最終濃度）的PNB加入小川培養(yǎng)基。噻吩二羧酸酰肼培養(yǎng)基（T2H），取T2H 50mg，加入蒸餾水100mL中，使成為500μg/mL，取其1mL加入小川培養(yǎng)基中，混勻分裝，凝固滅菌，最終濃度5μg/mL。

將21個陽性菌株制成懸液，按濕菌10μm重接種于鑒定培養(yǎng)基。觀察結果見表2。

經過鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后的結果和其他分枝桿菌鑒別對照，發(fā)現(xiàn)21個結核陽性病歷均為牛型分枝桿菌感染，因為這些病歷是來自不同時間，歷時5年，又來自不同地區(qū)和不同飼養(yǎng)場搜集，整理，經過實驗獲得，可以說明綿羊的結核病基本上都是由牛型分枝桿菌的病原體感染造成的。

1.3 展望

加強對綿羊結核病調查和研究，摸清病原的特點，探索病原的流行和演化規(guī)律，制定相應的防治方法；加強對綿羊結核病耐藥機制的研究，研制新型抗結核藥物和新型疫苗。

隨著綿羊結核病檢測水平的不斷提高、預警預報監(jiān)測體系的不斷完善和牛分枝桿菌功能基因組研究的深入，必將為綿羊結核病的防治帶來更多的機遇，但也面臨著巨大的挑戰(zhàn)，對綿羊結核病的研究仍然是任重而道遠。