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1.延邊大學(xué)，吉林 延吉 133000；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130021

參黃養(yǎng)陰膠囊主要由人參、黃芪、黃精、麥冬、丹參、苦參、甘草等7味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血化瘀的功效，用于氣陰兩虛兼血瘀證冠心病的輔助治療[1-6]。其制法為人參、丹參粉碎成粗粉，其余黃芪等五味加水煎煮三次即得。黃芪為方中君藥之一，具有補氣升陽，行滯通痹之功效[7]，黃芪甲苷為其主要成分。研究采用HPLC - ELSD 法測定參黃養(yǎng)陰膠囊中黃芪甲苷的含量，為參黃養(yǎng)陰膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津2010C高效液相色譜儀(Alltech ELSD 2000ES檢測器)；METTLER AG245 十萬分之一天平。

1.2 材料 對照品丹參酮ⅡA、黃芪甲苷、苦參堿、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf人參皂苷Rg1、甘草酸單銨鹽購自中國藥品生物制品檢定所；對照藥材麥冬、黃精購自中國食品藥品檢定研究院；試驗中所用乙腈、甲醇均為色譜純，水為雙蒸水自制，其它試劑均為分析純；參黃養(yǎng)陰膠囊由吉林吉爾吉藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用島津VP-ODS色譜柱(4.6×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(32∶68)；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；ELSD參數(shù)：漂移管溫度105 ℃，氣體流量2.8 L/min。

2.2 對照品溶液制備 取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含黃芪甲苷0.2 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取本品5 g，精密稱定，加甲醇50 mL，加熱回流2 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水50 mL，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌3次，每次50 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻即得。

2.4 線性及范圍 精密吸取對照品溶液2、4、8、16、32、64 μL，按“2.1項”的方法進樣分析，測定其峰面積。以黃芪甲苷進樣量和峰面積的Log值為橫、縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進行線性回歸計算。經(jīng)計算，回歸方程為y=1.880x+4.974，相關(guān)系數(shù)r=0.999，線性范圍為0.4024～12.8768 μg。結(jié)果顯示，在線性范圍內(nèi)，其對數(shù)值和峰面積對數(shù)值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度考察 精密吸取上述同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄黃芪甲苷峰面積，計算其RSD值為2.20%，說明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察 取根據(jù)“2.3項”下方法制得的同一供試品溶液，于0、2、4、6、8h下測定，記錄黃芪甲苷峰面積，計算RSD值為1.65%，表明8 h內(nèi)黃芪甲苷穩(wěn)定性較好。

2.7 重復(fù)性考察 稱取同一批供試品6份，精密稱定，按“2.3項”下方法制成供試品溶液，按“2.1項”色譜條件進樣分析，測定其峰面積，計算黃芪甲苷的含量，得RSD值為3.90%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗 取同一批供試品6份，精密稱定，加入一定量對照品，按“2.3項”下方法制成供試品溶液，并進行分析，計算加樣回收率，黃芪甲苷的平均回收率為98.67%，RSD為0.87%，證明以上方法準(zhǔn)確度良好，符合要求。

表1 準(zhǔn)確度實驗結(jié)果

2.9 樣品含量測定 取三批樣品，每批各2份，按“2.3項”下方法制成供試品溶液，按“2.1項”的方法進樣分析，計算黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

對于參黃養(yǎng)陰膠囊處方中七味中藥進行定性鑒別后，結(jié)果顯示丹參、黃芪、苦參、人參薄層鑒別具有專屬性，麥冬、黃精、甘草薄層鑒別不具有專屬性，所以本研究建立了參黃養(yǎng)陰膠囊中所含的4味中藥材的薄層色譜鑒別方法，為參黃養(yǎng)陰膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

由于中藥復(fù)方的成分多樣且復(fù)雜，待測的目標(biāo)成分經(jīng)常會受到一些其他雜質(zhì)的干擾，使觀察到的結(jié)果不清晰，因此，應(yīng)選擇合適的處理方法，既能保證結(jié)果清晰，又能去除背景干擾，如黃芪的供試品制備時，水飽合正丁醇萃取后，又用正丁醇飽和的0.3 mol/L氫氧化鈉溶液提取3次，再以正丁醇飽和的水洗滌至中性，后又通過D101型大孔吸附樹脂柱，得到供試品溶液。

在黃芪甲苷供試品溶液的制備中，先后考察了不同的提取方法(超聲提取方法、加熱回流提取方法和索氏提取方法)發(fā)現(xiàn)加熱回流方法黃芪甲苷損失較少，方法操作簡便。供試品去除雜質(zhì)干擾的方法考察了萃取與大孔樹脂洗脫的方法，發(fā)現(xiàn)萃取方法較為適合。

《中華人民共和國藥典》中黃芪含量測定采用的流動相為乙腈-水(32∶68)，按藥典流動相色譜峰分離效果均好，無干擾，故選其作為含量測定流動相。