張火旺，黃瀟瀟，鄧淑芳

（廣東省河源市藥品檢驗所，廣東 河源 517000）

胃痛舒片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十四冊）》[1]，由豬胃黏膜、厚樸、海螵蛸、甘草、顛茄(浸膏)5味中藥組方，具有健脾和胃、理氣止痛功效，用于脾胃虛弱引起的胃烷脹痛、嘈雜吞酸、消化性潰瘍和慢性胃炎等癥。厚樸作為主成分，對腹脹、便秘、食積、氣滯具有很好療效。目前，未對該制劑中的特定藥材進行專屬性成分含量測定。本研究中選取厚樸中的厚樸酚與和厚樸酚作為指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法測定胃痛舒片中厚樸酚與和厚樸酚的含量，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立和完善提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；CPA225D型電子分析天平（德國賽多利斯公司）；KQ-250DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純，TEDIA），水為超純水；厚樸酚對照品（批號為110729-201513，供含量測定用），和厚樸酚對照品（批號為110730-20161，供含量測定用），均由中國食品藥品檢定研究院提供；胃痛舒片（批號分別為160503，160401，160101，河北金興制藥廠，依次編號為1，2，3）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：InertSustainC18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水(78∶22)；檢測波長：294 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃。以峰面積外標(biāo)法定量[2]。

2.2 溶液制備

對照品溶液：稱取厚樸酚對照品10.06 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作為厚樸酚對照品貯備液。稱取和厚樸酚對照品10.94 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作為和厚樸酚對照品貯備液。再精密量取厚樸酚對照品貯備液與和厚樸酚對照品貯備液各2.00 mL，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，各用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

供試品溶液：取本品20片，去糖衣，研細，精密稱取1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密量取25.00 mL甲醇溶液，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（16 kHz，296 W）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液：按其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中處方比例，同法制備不含厚樸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：按2.1項下色譜條件，精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1?？梢姡駱惴优c和厚樸酚分離好，陰性無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密量取對照品溶液2，5，10，15，20，25 μL，按 2.1 項下色譜條件分別進樣，測定峰面積，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、厚樸酚與和厚樸酚對照品進樣量（C）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程，厚樸酚為 A=1 410 362.384 6 C-1 677.166 6，r=0.999 9(n=6)；和厚樸酚為 A=1 399 145.802 0C+686.7147，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，厚樸酚與和厚樸酚進樣量分別在 0.032 19～0.402 4 μg和0.035 00～0.437 6 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取同一混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，進樣量為 20 μL，測定峰面積。結(jié)果的 RSD分別為0.90%和0.80%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品，精密稱取6份，按樣品測定方法平行測定兩組分的含量。結(jié)果厚樸酚與和厚樸酚的 RSD分別為1.21%和1.14%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，每隔2 h測定1次，連續(xù)測定6次。結(jié)果厚樸酚與和厚樸酚含量的 RSD分別為1.15%和1.09%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品（批號為160503，平均每片質(zhì)量為0.312 5 g，厚樸酚含量為每片0.080 2 mg，和厚樸酚含量為每片0.083 1 mg）適量，共6份，分別精密加入混合對照品溶液1.0，2.0，3.0 mL（分別精密量取厚樸酚貯備液與和厚樸酚貯備液各3.00 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作為混合對照品溶液，厚樸酚質(zhì)量濃度為0.060 36 mg/mL，和厚樸酚質(zhì)量濃度為0.065 64 mg/mL），按供試品溶液制備方法制備。按2.1項下色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，計算厚樸酚與和厚樸酚的回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果見表2。根據(jù)3批樣品所測結(jié)果，暫訂每片胃痛舒片中厚樸酚與和厚樸酚定量限均為0.05 mg。

表2 樣品含量測定結(jié)果（mg/片，n=3）

3 討論

根據(jù)2015年版《中國藥典（一部）》厚樸藥材所載方法[3-10]，采用甲醇超聲提取，發(fā)現(xiàn)30 min內(nèi)各成分提取量隨提取時間的增加而增加，30 min后無明顯變化。故確定以甲醇為流動相超聲提取，提取時間為30 min。本研究中方法操作簡便，專屬性強，重復(fù)性好，對于提高胃痛舒片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有積極意義。