蒲 銳，王小婷，武 娟，毛夢(mèng)然，萬(wàn)定榮

（中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430074）

艾葉為菊科植物艾 Artemisia argyi Levl.et Van.的干燥葉，為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，也是艾灸療法的原材料。其味辛、苦，性溫，有散寒止痛、溫經(jīng)止血功效[1]。現(xiàn)代研究表明，艾葉主要含有揮發(fā)油、黃酮類、鞣質(zhì)，同時(shí)也含有三萜類、多糖等有效成分[2-4]，有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等藥理作用[5-10]。艾葉的有效物質(zhì)含量與其藥用功效直接相關(guān)，不同干燥方式可能對(duì)其有效物質(zhì)含量有顯著影響。本研究中以艾葉主要有效物質(zhì)揮發(fā)油、黃酮類、鞣質(zhì)的含量為指標(biāo)，并輔以高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜法進(jìn)行比較研究，考察常用干燥方式對(duì)艾葉質(zhì)量的影響，以提供最佳干燥方式，保障艾葉商品或其產(chǎn)品的品質(zhì)，保證其臨床應(yīng)用的有效性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate 3000型高效液相色譜儀（含二極管陣列檢測(cè)器，Chromeleon色譜工作站，美國(guó)戴安公司）；BDS Hypersil C18色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm，賽默飛世爾科技<中國(guó)>有限公司）；UV-1800PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；AB256-S型十萬(wàn)分之一電子分析天平（梅特勒-托利多<上海>有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH-4型水浴鍋（金壇市科興儀器廠）；揮發(fā)油提取器（武漢杰恒達(dá)工貿(mào)有限公司）；98-1-B型電子調(diào)溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

芹菜素對(duì)照品（批號(hào)為111901-201603，純度為99.2%），沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)為110831-201605，純度為90.8%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，美國(guó)天地有限公司）；甲醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水；其他試劑（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）均為分析純。艾葉樣品共6批，來(lái)源于湖北蘄春5批，武漢郊區(qū)1批，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定，均為菊科植物艾 Artemisia argyi Levl.et Van.及其干燥葉。樣品采收期均為2016年5月27日，每批樣品采集后分室外太陽(yáng)暴曬或室內(nèi)陰干2種方式干燥，共獲得12份試驗(yàn)樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油含量測(cè)定

供試品制備：用四分法取適量樣品，剪碎（直徑1～2 mm，下同），充分混勻，裝入潔凈的樣品袋中，即得。

樣品含量測(cè)定：取各剪碎樣品約40 g，精密稱定，參照2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則2204“揮發(fā)油測(cè)定法”進(jìn)行測(cè)定，其中燒瓶加水600 mL。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 6批12份曬干及陰干艾葉樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.2 總黃酮含量測(cè)定

溶液制備：取各剪碎樣品約1 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇溶液50 mL，稱定質(zhì)量，85℃水浴回流1 h，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；取芹菜素對(duì)照品10.05 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加70%甲醇適量使溶解，并定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密量取對(duì)照品溶液0.15，0.40，0.80，1.60，2.40，3.20，4.00 mL，分別置 25 mL 容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，以70%甲醇為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在338 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度（A）。以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)、芹菜素質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.079 6X+0.008 8，r=0.999 7（n=7）。結(jié)果表明，芹菜素質(zhì)量濃度在0.598 2～15.951 3 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

測(cè)定方法學(xué)考察：測(cè)定方法通過(guò)本課題組試驗(yàn)確定，其供試品溶液的制備、測(cè)定波長(zhǎng)、測(cè)定方法均參考文獻(xiàn)[11]。方法學(xué)考察結(jié)果表明，該方法精密度、重復(fù)性及加樣回收率均符合含量測(cè)定要求，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

樣品含量測(cè)定：取上述6批分別經(jīng)暴曬和陰干的艾葉樣品共12份，剪碎，各取約1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定。每份樣品各制成2份供試品溶液，取測(cè)定平均值作為含量測(cè)定結(jié)果。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 鞣質(zhì)含量測(cè)定

溶液制備：取各剪碎樣品約2 g，精密稱定，置250 mL棕色容量瓶中，加水150 mL，放置過(guò)夜，超聲處理10 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過(guò)，棄初濾液50mL，精密量取續(xù)濾液20 mL，置100 mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取沒(méi)食子酸對(duì)照品50 mg，精密稱定，置100 mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置50 mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密量取對(duì)照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置 25 mL 棕色容量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1 mL，再分別加水11.5，11.0，10.0，9.0，8.0，7.0 mL，用 29% 碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min，以相應(yīng)的試劑為空白溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度(Y)為縱坐標(biāo)、沒(méi)食子酸的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0.125 6X+0.038 7，r=0.999 8（n=6）。結(jié)果表明，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度在0.908～9.080 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

測(cè)定方法：參照2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則2202項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。

樣品含量測(cè)定：取上述6批分別經(jīng)暴曬和陰干的艾葉樣品共12份，剪碎，各取約2 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定。每份樣品各制成2份供試品溶液，取測(cè)定平均值作為含量測(cè)定結(jié)果，詳見(jiàn)表1。

2.4 含量測(cè)定結(jié)果分析

由表1（均按干燥品計(jì)）可見(jiàn)，6批陰干艾葉樣品的揮發(fā)油、總黃酮和鞣質(zhì)含量均顯著高于另6批相同產(chǎn)地環(huán)境的曬干樣品。其中，6批陰干艾葉樣品的揮發(fā)油、總黃酮和鞣質(zhì)的含量范圍分別為0.95%～1.25%，2.03% ～6.93%，1.18% ～3.82%；相同產(chǎn)地與環(huán)境的6批曬干艾葉樣品的揮發(fā)油、總黃酮和鞣質(zhì)的含量范圍分別為0.76% ～0.90%，0.93% ～5.67%，0.52% ～2.87%。6批陰干艾葉的揮發(fā)油、總黃酮和鞣質(zhì)含量的平均值比曬干艾葉分別高25.3%，31.1%和39.9%。曬干樣品中，有1批總黃酮的含量還達(dá)不到艾葉國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)（ISO 20759）對(duì)總黃酮的低限要求（不應(yīng)低于1.10%）[12]。

2.5 樣品HPLC指紋圖譜的初步比較

色譜條件：色譜柱為BDS Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.2% 磷酸溶液（B），梯度洗脫（A：0 ～15 min、10%→20%，15～30 min、20%→25%，30～40 min、25%→35%，40～45 min、35%→36% ，45～55 min、36% →65% ，55～60 min、65% →97%）；流速為0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為338 nm；柱溫為 30℃；進(jìn)樣量為10 μL。

供試品溶液制備：取剪碎的各艾葉樣品約1 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，加入70%甲醇溶液50 mL，稱定質(zhì)量，85℃水浴回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得。

HPLC指紋圖譜比較：對(duì)其中3批共6份陰干、曬干的樣品經(jīng)70%甲醇提取其主要含有黃酮類物質(zhì)的供試品溶液，采用高效液相色譜儀對(duì)其進(jìn)行初步HPLC指紋圖譜研究，比較了陰干、曬干樣品峰的種類、數(shù)目及峰面積。結(jié)果顯示，所有同批曬干樣品與陰干樣品主要色譜峰的種類和數(shù)目均基本一致。但前者多數(shù)峰的峰面積顯著低于后者，平均峰面積低于38.2%。圖1以采于湖北李時(shí)珍醫(yī)藥集團(tuán)的2份對(duì)應(yīng)的曬干和陰干艾葉樣品為例，顯示出HPLC指紋圖譜峰面積的顯著差異。

圖1 艾葉樣品高效液相色譜指紋圖譜

3 討論

研究結(jié)果表明，產(chǎn)于湖北的6批共12份艾葉樣品中，陰干樣品的有效物質(zhì)揮發(fā)油、總黃酮、鞣質(zhì)的含量均顯著高于曬干樣品。兩類樣品的甲醇提取液的HPLC色譜峰的總峰面積相比也有類似結(jié)果。表明艾葉樣品在5月底采集后的短期內(nèi)，由于干燥方式不同導(dǎo)致幾類化學(xué)成分含量產(chǎn)生顯著變化。藥材揮發(fā)油含量可因暴曬而顯著降低是普遍規(guī)律。總黃酮、鞣質(zhì)含量因曬干而明顯降低也有報(bào)道[13-16]，而在艾葉中降幅更顯著。

鑒于采取曬干的干燥方式會(huì)大幅度降低艾葉中揮發(fā)油、總黃酮和鞣質(zhì)含量，為保證艾葉有效成分的高效利用，為臨床提供高品質(zhì)的艾葉，干燥方式應(yīng)盡量采用自然陰干。建議艾葉產(chǎn)區(qū)在艾葉收獲后采取搭棚或室內(nèi)緩慢晾干的方式進(jìn)行干燥，確保艾葉應(yīng)用品質(zhì)。