靳繼鵬，郭武君，張?bào)闫G，張昌吉，張勇，王春輝，張利平*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.西藏山南市職業(yè)技術(shù)學(xué)校，西藏 山南 856000)

甘肅高山細(xì)毛羊?qū)Ω吆赜驀?yán)酷的天然生態(tài)環(huán)境具有很好的適應(yīng)性、較高的生長(zhǎng)生產(chǎn)性和穩(wěn)定的遺傳性，在青藏高原、祁連山山脈及類(lèi)似高寒牧區(qū)的養(yǎng)羊業(yè)中有不可替代的養(yǎng)殖地位和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-2]。但因?yàn)楦拭C高山細(xì)毛羊常年以放牧為主，當(dāng)?shù)睾０巍⒌匦?、溫濕度、降水量等自然環(huán)境和人為干擾的影響，使得草場(chǎng)沙化，牧草質(zhì)量下降，同時(shí)冬春季(11月至次年5月)枯草期營(yíng)養(yǎng)缺乏和寒冷應(yīng)激，嚴(yán)重影響了高山細(xì)毛羊的生長(zhǎng)生產(chǎn)性能，導(dǎo)致羊只減重、抵抗力下降、羔羊發(fā)育不良等[3-4]。也就是說(shuō)，冬春兩季牧場(chǎng)營(yíng)養(yǎng)缺乏和寒冷應(yīng)激極大地制約了綿羊生產(chǎn)水平[5-6]。相關(guān)研究表明，補(bǔ)飼對(duì)高寒牧區(qū)綿羊生產(chǎn)有明顯的正向影響[7-9]。楊博等[10]通過(guò)分析北方草原草畜平衡，宮旭胤[11]通過(guò)調(diào)整冷季補(bǔ)飼方案、減少存欄量，來(lái)提高牧戶(hù)的養(yǎng)殖效益。因此，在冬春兩季枯草期進(jìn)行放牧和補(bǔ)飼合理結(jié)合，是實(shí)現(xiàn)放牧家畜營(yíng)養(yǎng)均衡最主要的措施[12]。近年來(lái)，“放牧+補(bǔ)飼”二者的最佳結(jié)合方式以及補(bǔ)飼的營(yíng)養(yǎng)需要量成為研究的焦點(diǎn)[13]。目前關(guān)于甘肅高山細(xì)毛羊后備母羊補(bǔ)飼對(duì)瘤胃內(nèi)環(huán)境研究較少。本試驗(yàn)參照中國(guó)美利奴25 kg后備母羊日增重150、100和50 g營(yíng)養(yǎng)需要量[14]，研究補(bǔ)飼料不同對(duì)甘肅高山細(xì)毛后備母羊(12月齡)的瘤胃內(nèi)環(huán)境的影響。找出合理的“放牧+補(bǔ)飼”方案，為改變甘肅肅南縣高寒牧區(qū)由于營(yíng)養(yǎng)供給不足后備母羊2.5歲才能配種的飼養(yǎng)方式，減輕草場(chǎng)的壓力，減短飼養(yǎng)周期，提高牧民們的養(yǎng)殖效益提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

甘肅省肅南縣屬于高寒半干旱氣候牧區(qū)，氣溫低且晝夜溫差較大，冬季寒冷而漫長(zhǎng)，夏秋季涼爽而短。海拔高(約1327～5564 m)，年均氣溫在4 ℃左右，年均降水量66～600 mm，無(wú)霜期為127 d，枯草期7個(gè)月以上，其生產(chǎn)節(jié)律見(jiàn)表1[15-20]。

表1 典型牧戶(hù)生產(chǎn)節(jié)律Table 1 Production rhythm of typical farm

注：補(bǔ)飼以玉米和燕麥青干草結(jié)合為主。

Note: The main supplement with corn and oat hay.

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)羊選擇甘肅肅南裕固族自治縣康樂(lè)鄉(xiāng)賽鼎村牧戶(hù)家健康、體型大小一致的甘肅高山細(xì)毛后備母羊(12月齡)48只，隨機(jī)分為4組(試驗(yàn)a組、b組、c組，對(duì)照組)，各組12只；在自然放牧的基礎(chǔ)上，試驗(yàn)a組補(bǔ)飼1號(hào)料、試驗(yàn)b組均補(bǔ)飼2號(hào)料、試驗(yàn)c組補(bǔ)飼3號(hào)料，對(duì)照組不補(bǔ)飼，隨大群放牧自由采食。試驗(yàn)預(yù)試期前對(duì)試驗(yàn)后備母羊進(jìn)行免疫和編號(hào)，預(yù)試期10 d，試驗(yàn)期80 d，共90 d，在甘肅肅南縣賽鼎村牧戶(hù)家于2015年2月至5月進(jìn)行。

1.3 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

在測(cè)定甘肅高山細(xì)毛羊后備羊牧草采食量的基礎(chǔ)上，參照中國(guó)美利奴羊25 kg后備母羊營(yíng)養(yǎng)需要量，根據(jù)營(yíng)養(yǎng)缺少量上配制補(bǔ)飼飼料(扣除放牧采食營(yíng)養(yǎng))配方3個(gè)，其中補(bǔ)飼料1號(hào)料為飼料場(chǎng)加工的顆粒飼料，2、3號(hào)補(bǔ)飼中的玉米為整粒玉米、干草鍘短飼喂。進(jìn)行“放牧+補(bǔ)飼”試驗(yàn)。扣除放牧采食營(yíng)養(yǎng)后，篩選和制定適宜的補(bǔ)飼料配方(表2)和應(yīng)補(bǔ)飼喂量(表3)。

表2 試驗(yàn)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平Table 2 The experimental diet composition and nutrition level

注：代謝能為計(jì)算值，其他數(shù)值為實(shí)測(cè)值。

Note: Metabolizable energy is calculated, and other values are measured.

1.4 瘤胃液采集

試驗(yàn)最后一天早晨，補(bǔ)飼3 h后，人工導(dǎo)管抽樣法采集瘤胃液50 mL，每組采集3只，采集后立刻測(cè)定pH，經(jīng)4層紗布過(guò)濾，濾液裝于經(jīng)高壓滅菌的凍存管內(nèi)，液氮罐帶回，冰箱-70 ℃實(shí)驗(yàn)室保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.5.1瘤胃液內(nèi)環(huán)境 pH用便攜式PHS-2F(雷磁型)數(shù)字酸度計(jì)直接測(cè)定；NH3-N(氨態(tài)氮)參照馮宗慈等[21](1993)的方法進(jìn)行；URN(urea nitrogen,尿素氮)采取脲酶法測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，計(jì)算公式：

表3 補(bǔ)飼喂量Table 3 Complementary feeding amount [kg·(head·d)-1]

注：每天早晨出牧前、下午歸牧后的補(bǔ)飼量分別是每天補(bǔ)飼量的50%。

Note: The supplementary feed amount before and after grazing accounts for 50% of the total amount at every day.

總氮:凱氏定氮法測(cè)定；蛋白氮:瘤胃液中蛋白氮=瘤胃液總氮-瘤胃液氨態(tài)氮-瘤胃液尿素氮；VFA(volatile fatty acids,揮發(fā)性脂肪酸):參照李勇等[22]使用安捷倫(Aglient)6890N型氣相色譜儀測(cè)定。

1.5.2瘤胃微生物數(shù)量 瘤胃液DNA的提取:后備母羊瘤胃微生物Total DNA 提取過(guò)程按照天根(北京)糞樣DNA提取試劑盒(DP328)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；DNA的檢測(cè)采用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)Total DNA，超微量分光光度計(jì)檢測(cè)OD260/280值；引物設(shè)計(jì)與合成參照張勇[23]、周瑞[24]、Muyzer等[25]和王海榮[26]的研究，結(jié)果見(jiàn)表4，由上海生物工程有限公司合成。

Real-time qPCR:本試驗(yàn)采用SYbR GreenⅠ染料法，以β-actin為內(nèi)參基因，反應(yīng)體系見(jiàn)表5，在Light Cycler?480型熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)參數(shù)為：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火10 s，72 ℃延伸15 s，40個(gè)循環(huán)，在延伸期收集熒光信號(hào)。全部檢測(cè)樣品均設(shè)定1個(gè)去離子水代替模板的陰性對(duì)照。

表4 瘤胃微生物qPCR的引物序列Table 4 Primer sequence of rumen microbial qPCR

1.6 試驗(yàn)主要儀器與試劑

試驗(yàn)主要儀器有瑞士Roche公司Light Cycler 480熒光定量PCR儀，超速冷凍離心機(jī)TGL-16M(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，超微量分光光度計(jì)NanoPhotometer?Pearl 360(德國(guó)Implen公司)，瓊脂糖凝膠電泳儀DYY-6C(北京六一儀器廠(chǎng))，凝膠成像儀Bio-Print 1000X-Press(法國(guó)Vilber lournat公司)等；熒光定量試劑盒SYBR?Premix Ex TaqTM等均購(gòu)自TaKaRa(大連)公司，二水乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA·2H2O)、RNA提取試劑Trizol購(gòu)自TransGen(北京)公司，瓊脂糖購(gòu)自西班牙Biowest Agarose，Gold View核酸染料購(gòu)自北京賽百盛公司。

表5 20 μL反應(yīng)體系Table 5 20 μL reaction system (μL)

1.7 數(shù)據(jù)處理

相對(duì)表達(dá)量采用2-△△ct法[27]計(jì)算，數(shù)據(jù)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用LSD法多重比較各組瘤胃代謝參數(shù)及瘤胃微生物數(shù)量，結(jié)果均用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示，有0.01和0.05兩個(gè)差異水平。

2 結(jié)果與分析

2.1冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃代謝參數(shù)的影響

2.1.1pH、NH3-N、URN、蛋白氮、總氮 由表6可知，綿羊瘤胃液pH值試驗(yàn)a和b組極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)c組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；綿羊瘤胃NH3-N濃度試驗(yàn)a、b和c組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，而試驗(yàn)b組又極顯著高于試驗(yàn)c和a組(P<0.05)。試驗(yàn)組瘤胃液總氮含量、蛋白氮含量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)a組瘤胃液總氮含量極顯著高于試驗(yàn)c組(P<0.05)，試驗(yàn)a組的瘤胃蛋白氮的含量極顯著高于試驗(yàn)b和c組(P<0.01)；瘤胃液URN濃度試驗(yàn)組與對(duì)照組各組之間差異均不顯著(P>0.05)。

2.1.2冷季補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)VFA的影響 表7顯示，綿羊瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度試驗(yàn)a組和b組均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)b組顯著高于c組(P<0.05)；乙酸摩爾比試驗(yàn)a組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)b和c組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；丙酸摩爾比試驗(yàn)a組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)a組顯著高于試驗(yàn)c組(P<0.05)，試驗(yàn)b和c組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；丁酸摩爾比試驗(yàn)a組極顯著高于試驗(yàn)c組(P<0.01)；綿羊乙/丙試驗(yàn)b組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)組之間乙/丙差異不顯著(P>0.05)。

2.2 冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃微生物數(shù)量的影響

冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊瘤胃微生物相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表8，綿羊瘤胃白色瘤胃球菌相對(duì)表達(dá)量試驗(yàn)a組極顯著高于試驗(yàn)b組、試驗(yàn)c組和對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)c組極顯著高于試驗(yàn)b組和對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)b組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；綿羊瘤胃產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌相對(duì)表達(dá)量試驗(yàn)b組顯著高于試驗(yàn)a組和對(duì)照組(P<0.05)；綿羊瘤胃黃色瘤胃球菌相對(duì)表達(dá)量試驗(yàn)a和b組均極顯著高于試驗(yàn)c組和對(duì)照組(P<0.01)；綿羊瘤胃原蟲(chóng)相對(duì)表達(dá)量試驗(yàn)a組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)b和c組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；綿羊瘤胃真菌相對(duì)表達(dá)量對(duì)照組極顯著低于試驗(yàn)b和c組(P<0.01)，試驗(yàn)a組極顯著低于試驗(yàn)b組(P<0.01)，試驗(yàn)a組顯著低于試驗(yàn)c組(P<0.05)。

表6 冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃pH、氨態(tài)氮、尿素氮、蛋白氮和總氮的影響Table 6 Impact of cold-season grazing and supplementary feeding on rumen pH, NH3-N, urea nitrogen (URN), protien N and total N of Gansu Alpine Fine Wool Sheep (12-month-old)

注：同列不同小寫(xiě)字母代表差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母代表差異極顯著(P<0.01)，無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。下同。

Note:Values with different lowercase within the same column are significantly different (P<0.05), values with different capital letter are extremely significantly different (P<0.01), values with no letter or the same letter are no significant difference (P>0.05). The same below.

表7 冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃VFA的影響Table 7 Impact of cold-season grazing and supplementary feeding on rumen VFA of Gansu Alpine Fine Wool Sheep (12-month-old)

表8 冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃微生物數(shù)量的影響Table 8 Impact of cold-season grazing and supplementary feeding on number of rumen microbes of Gansu Alpine Fine Wool Sheep (12-month-old)

3 討論

3.1 冷季放牧補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃代謝參數(shù)的影響

反映瘤胃發(fā)酵情況的基本指標(biāo)是pH值，瘤胃pH值的影響因素有很多，如食入飼糧性質(zhì)、唾液分泌量、瘤胃內(nèi)生成、吸收和排出VFA的速度等，但其變化的根本原因則是飼糧結(jié)構(gòu)與營(yíng)養(yǎng)水平[28]。張建勛等[29]報(bào)道，飼糧精料比例的提高可導(dǎo)致南江黃羊體外發(fā)酵培養(yǎng)液中pH的下降，與劉大程[30]的研究結(jié)果，綿羊瘤胃pH隨著粗飼料比例的增加而增加的變化相同。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃pH值低于對(duì)照組5.99%、7.01%和4.53%，原因是對(duì)照組綿羊在冬春季節(jié)內(nèi)，只采食低質(zhì)的牧草，使其瘤胃發(fā)酵不良，瘤胃液中TVFA的生成量降低。但試驗(yàn)a組的pH值高于試驗(yàn)b組，與張騰等[31]研究表明瘤胃液pH高精料組顯著高于低精料組結(jié)果不一致，是1號(hào)飼糧中胡麻餅、麩皮和磷酸氫鈣等導(dǎo)致?？梢?jiàn)，精料較多的補(bǔ)飼糧，可溶性碳水化合物含量高，瘤胃微生物會(huì)將其降解，生成大量的VFA，提供瘤胃微生物生長(zhǎng)和繁殖所需要的能量，從而提高瘤胃微生物活性，微生物蛋白產(chǎn)量增加，使綿羊體內(nèi)的能量與氮的營(yíng)養(yǎng)需要得到滿(mǎn)足，后備母羊在冬春枯草期保持較好的膘情，減少自身儲(chǔ)備能量的消耗，防止度過(guò)漫長(zhǎng)枯草期出現(xiàn)掉膘和發(fā)育不良。

研究表明，瘤胃中碳水化合物發(fā)酵的主要產(chǎn)物是VFA，有乙酸、丙酸、丁酸等，其中乙酸數(shù)量是最多的，當(dāng)飼喂飼糧纖維素含量高時(shí)，會(huì)降低瘤胃中脂肪酸混合物總產(chǎn)量，但乙酸的產(chǎn)量會(huì)提高。當(dāng)反芻動(dòng)物食入的飼糧易發(fā)酵時(shí)，會(huì)增加微生物活動(dòng)，從而VFA濃度增加。VFA的含量及組成比例進(jìn)一步影響機(jī)體代謝和生產(chǎn)性能。劉敏雄[32]研究報(bào)道，當(dāng)粗飼料含量增高時(shí)，纖維素分解菌占優(yōu)勢(shì)，乙酸含量就上升，而飼糧中淀粉含量高時(shí)，分解淀粉的微生物占優(yōu)勢(shì)，丙酸含量顯著增多。Kang等[33]研究報(bào)道，沼澤型水牛飼糧中添加精料可以提高瘤胃的總VFA、乙酸、丙酸和丁酸的濃度。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃總VFA濃度比對(duì)照組高42.71%、52.05%和20.77%，試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃乙酸和丙酸摩爾比分別比對(duì)照組高44.31%、34.26%、26.59%和69.61%、49.26%、31.25%，乙/丙隨著補(bǔ)飼料中粗料的增加呈現(xiàn)升高態(tài)勢(shì)，這與前人研究一致，可能原因是精飼料降解快于粗飼料，精飼料的降解會(huì)導(dǎo)致丙酸摩爾比升高，導(dǎo)致乙酸摩爾比相對(duì)降低而使試驗(yàn)組乙/丙比對(duì)照組相對(duì)降低?？梢?jiàn)，放牧綿羊在冬春季節(jié)營(yíng)養(yǎng)不足，不良瘤胃內(nèi)環(huán)境，微生物活性受到抑制，放牧綿羊體內(nèi)能量與氮的營(yíng)養(yǎng)狀況導(dǎo)致惡化，這是放牧綿羊在冬春季節(jié)內(nèi)掉膘的主要原因。因此，牧區(qū)綿羊在冬春季節(jié)傳統(tǒng)放牧的基礎(chǔ)上，要根據(jù)后備母羊生理狀況和營(yíng)養(yǎng)需要量進(jìn)行合理補(bǔ)飼，來(lái)達(dá)到改善瘤胃內(nèi)環(huán)境和提高牧民經(jīng)濟(jì)收入的目的[34]。

衡量瘤胃發(fā)酵狀況的另一個(gè)重要指標(biāo)是NH3-N含量。在瘤胃中瘤胃微生物生長(zhǎng)緩慢，碳水化合物的分解利用也受阻時(shí)，是由于家畜食入了蛋白質(zhì)含量不足或蛋白質(zhì)難以降解時(shí)，瘤胃液NH3-N濃度很低[35]。劉大程[30]研究報(bào)道，綿羊瘤胃NH3-N濃度隨著粗飼料比例的增加逐漸增加。王雅倩等[36]研究報(bào)道，以粗飼料為主的飼糧中，提高蛋白質(zhì)水平會(huì)顯著提高湖羊瘤胃NH3-N水平。本試驗(yàn)中，放牧補(bǔ)飼組和自然放牧組的NH3-N濃度均在適宜范圍之內(nèi)，但試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃NH3-N濃度高于對(duì)照組12.32%、36.36%和23.01%，這可能是由于“放牧+補(bǔ)飼”組補(bǔ)飼糧蛋白質(zhì)含量較高，蛋白質(zhì)的降解使NH3-N 濃度升高，在適宜范圍內(nèi)，NH3-N濃度與微生物蛋白質(zhì)的合成呈正相關(guān)，從而微生物蛋白質(zhì)含量提高。

瘤胃液總氮主要包括唾液蛋白氮、飼料中可溶解蛋白氮、NH3-N、URN和菌體蛋白氮等，飼料蛋白質(zhì)的含量及降解率直接影響其含量，也與飼糧在瘤胃中滯留時(shí)間的長(zhǎng)短有緊密關(guān)系[37]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組瘤胃總氮含量極顯著高于對(duì)照組，原因是補(bǔ)飼糧中有玉米、胡麻餅、苜蓿干草等原料，其中可溶性蛋白質(zhì)、易消化碳水化合物和非蛋白含氮物含量高，且降解速率緩慢，有利于瘤胃微生物的生長(zhǎng)和繁殖，使之對(duì)氮的合成強(qiáng)度大，菌體蛋白產(chǎn)量多，對(duì)瘤胃總氮貢獻(xiàn)較大。對(duì)照組綿羊采食牧草，咀嚼和反芻時(shí)間較長(zhǎng)，因而唾液蛋白氮濃度對(duì)瘤胃總氮貢獻(xiàn)較大。NH3-N和URN的濃度處于較低水平，對(duì)總氮的貢獻(xiàn)率較小。由此認(rèn)為，試驗(yàn)組綿羊瘤胃液總氮的濃度主要由可溶解蛋白和菌體蛋白組成，而對(duì)照組試驗(yàn)組綿羊瘤胃液總氮的濃度主要由菌體蛋白組成。決定瘤胃微生物合成強(qiáng)度的關(guān)鍵因素是瘤胃內(nèi)容物中速效能源及氮的濃度，當(dāng)飼糧中蛋白質(zhì)含量不足時(shí)，就可能降低氨的濃度，導(dǎo)致微生物得不到充足的氮源而降低合成作用，同時(shí)能量與氨釋放的同步性也是影響微生物合成強(qiáng)度的重要因素。

瘤胃液URN主要來(lái)自飼糧和瘤胃氮素再循環(huán)，飼料采食速度，飼料內(nèi)尿素氮濃度及其溶解速度和唾液分泌量都影響URN濃度。瘤胃中脲酶活性很高，是微生物利用NH3合成蛋白質(zhì)的4倍，故瘤胃中URN濃度一般很低。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組瘤胃中URN濃度變化為0.64～1.63 mg·dL-1，對(duì)照組瘤胃中URN濃度變化為0.43～1.65 mg·dL-1，符合上述規(guī)律。試驗(yàn)組綿羊瘤胃尿素氮濃度顯著低于對(duì)照組綿羊瘤胃液URN濃度，原因是對(duì)照組綿羊采食天然牧草，咀嚼、反芻次數(shù)多及分泌的唾液量大，進(jìn)入瘤胃的再循環(huán)尿素增多[38]。較低的尿素對(duì)氮的利用有利，過(guò)高會(huì)導(dǎo)致血漿及尿中URN升高而造成氮浪費(fèi)。從這點(diǎn)考慮，補(bǔ)飼日糧的組合是合理的。

瘤胃蛋白氮飼料可降解蛋白氮和微生物蛋白氮，在一定程度上可反映微生物蛋白合成狀況。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組瘤胃蛋白氮濃度極顯著高于對(duì)照組，可能是補(bǔ)飼日糧中能量、蛋白質(zhì)水平及飼料組成合理，其速效能源豐富，因而使可降解氮能被充分利用于蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致瘤胃液中蛋白氮含量上升。瘤胃液蛋白氮的動(dòng)態(tài)變化和瘤胃總氮、pH值呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了較理想的瘤胃液pH環(huán)境有利于飼料蛋白質(zhì)的降解和微生物合成的診斷[39]。

3.2 冷季補(bǔ)飼對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊(12月齡)瘤胃微生物數(shù)量的影響

原蟲(chóng)是瘤胃中存在個(gè)體較大、數(shù)目較多的微生物，參與宿主的消化代謝，其發(fā)酵底物主要為顆粒性淀粉和可溶性糖，產(chǎn)物有VFA，CO2等。原蟲(chóng)能夠?qū)⑻妓衔镛D(zhuǎn)變成支鏈淀粉并藏于其體內(nèi)，從而避免了其他細(xì)菌對(duì)淀粉和可溶性糖的快速發(fā)酵，保證了瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，而且內(nèi)纖毛蟲(chóng)還會(huì)在消化過(guò)程中產(chǎn)生氫，所以原蟲(chóng)對(duì)于瘤胃微生態(tài)系統(tǒng)很重要[40]。Grubb等[41]研究表明，當(dāng)綿羊的日糧由100%粗料轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ň直葧r(shí)，原蟲(chóng)數(shù)目增加，但種屬上變化小。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)a組瘤胃原蟲(chóng)數(shù)目極顯著高于對(duì)照組，這是因?yàn)樵囼?yàn)a組高營(yíng)養(yǎng)水平日糧使瘤胃原蟲(chóng)活性增強(qiáng)、數(shù)量增多，這對(duì)于高精料補(bǔ)飼日糧下穩(wěn)定pH值具有重要意義。

反芻動(dòng)物可以消化其他動(dòng)物無(wú)法消化的纖維含量高的粗飼料，主要?dú)w功于反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)的纖維降解菌對(duì)粗飼料的有效分解[40]。Fernando等[42]研究指出當(dāng)高粗日糧轉(zhuǎn)換成高精日糧時(shí)，瘤胃中的牛鏈球菌、乳酸桿菌、嗜淀粉瘤胃桿菌、反芻月形單胞菌和埃氏巨型球菌的數(shù)目增加，但黃色瘤胃球菌、琥珀酸絲狀桿菌和丁酸弧桿菌等一些纖維降解菌的數(shù)目減少。Tajima等[43]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)瘤胃中的纖維素含量增加時(shí)，纖維降解菌的數(shù)目也相應(yīng)增加；而飼喂纖維素含量低、淀粉含量高的日糧時(shí)，纖維降解菌的數(shù)量相對(duì)減少乃至缺乏。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃白色瘤胃球菌比對(duì)照組高362.16%、140.54%、252.52%，試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌比對(duì)照組高60.00%、248.00%、169.60%，試驗(yàn)a、b和c組綿羊瘤胃黃色瘤胃球菌比對(duì)照組高153.06%、120.41%、40.82%，表明放牧補(bǔ)飼有利于綿羊瘤胃纖維降解菌的生長(zhǎng)繁殖，提高了纖維物質(zhì)的降解效率，從而促進(jìn)甘肅高山細(xì)毛羊?qū)ρa(bǔ)飼日糧的消化利用。無(wú)論“放牧+補(bǔ)飼”組還是自然放牧組，綿羊瘤胃內(nèi)白色瘤胃球菌數(shù)目都比黃色瘤胃球菌數(shù)目高，這與馮仰廉[44]研究指出白色瘤胃球菌會(huì)產(chǎn)生對(duì)黃色瘤胃球菌有抑制作用的細(xì)菌素，從而影響黃色瘤胃球菌數(shù)量的結(jié)論相同。

4 結(jié)論

試驗(yàn)組綿羊瘤胃pH值極顯著或顯著低于對(duì)照組，瘤胃纖維降解菌、原蟲(chóng)數(shù)目較高。a組蛋白氮、總氮濃度最高，乙酸、丙酸、丁酸摩爾比均最高，b組氨態(tài)氮、總VFA濃度最高，乙/丙最小，對(duì)照組乙/丙最大。補(bǔ)飼有利于瘤胃微生物的活性，增加微生物蛋白質(zhì)產(chǎn)量，瘤胃纖維降解菌的生長(zhǎng)繁殖。

綜上所述，在冬春枯草期，甘肅高山細(xì)毛羊采用“放牧+補(bǔ)飼”的飼養(yǎng)方式，補(bǔ)飼日糧中能量、蛋白質(zhì)水平及原料組成合理，均能正向影響其后備母羊其瘤胃代謝參數(shù)及微生物數(shù)量，以1號(hào)料補(bǔ)飼效果最優(yōu)，2號(hào)料也能起到理想效果。