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        芎歸六君子湯對大鼠急性心肌梗死的治療作用?

        2018-07-25 06:26:10鄭麗莉
        關(guān)鍵詞:丹參滴丸心梗君子

        鄭麗莉

        (山東協(xié)和學(xué)院,濟(jì)南 250109)

        心血管疾病在我國城市居民死因中位居前三位,冠心病心肌梗死是心血管疾病的第一死因[1]。心肌梗死是冠心病中病情最嚴(yán)重的一種類型,發(fā)病早期致死率極高。冠心病病位在心,然前期研究顯示,根據(jù)中醫(yī)整體觀念,冠心病與脾胃具有相關(guān)性[2]。六君子湯源于《醫(yī)學(xué)正傳》,由人參、白術(shù)、茯苓、甘草、半夏、陳皮組成,功能益氣健脾、燥濕化痰,主治脾胃氣虛兼痰濕證,癥見食少便溏、胸脘痞悶嘔逆者,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用于治療慢性胃炎、消化性潰瘍等屬于脾胃氣虛者。芎歸六君子湯在六君子湯基礎(chǔ)上,由加味補(bǔ)血活血之當(dāng)歸、川芎組成,是治療脾胃氣虛、痰瘀內(nèi)阻的常用方藥。本研究擬采用芎歸六君子湯治療大鼠冠心病心肌梗死并觀察其治療效果,探討改善脾胃功能對于冠心病治療的影響,為冠心病臨床治療提供新的思路和客觀依據(jù)。

        1 材料

        1.1 動(dòng)物

        SPF級SD雄性大鼠,體質(zhì)量(200±20) g,由山東省濟(jì)南市朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供(合格證號SCXK(魯)20140007)。

        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

        1.2.1 中藥材 芎歸六君子湯由人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草、陳皮、姜半夏、川芎、當(dāng)歸組成,購于建聯(lián)藥店,經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定。上述藥材按比例3∶3∶3∶2∶1∶2∶3∶3稱取浸泡2 h,常規(guī)煎煮3次藥液混合,60 ℃水浴箱中濃縮至每毫升制劑相當(dāng)于生藥0.63 g,滅菌4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.2.2 對照藥 消心痛,魯南貝特制藥有限公司(國藥準(zhǔn)字H19991039)。復(fù)方丹參滴丸,天津天士力制藥股份有限公司(國藥準(zhǔn)字Z10950111)。

        1.3 實(shí)驗(yàn)器材

        Power Lab 血流動(dòng)力學(xué)信號采集與分析系統(tǒng)(埃德儀器國際貿(mào)易上海有限公司),Synergy2 酶標(biāo)儀 (美國伯騰儀器有限公司),C201 型動(dòng)物呼吸機(jī)(四川成都儀器廠),精密電子天平(瑞士Precisa公司,XS-225 A)。

        1.4 實(shí)驗(yàn)試劑

        乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號20150413、20150427、20140111);肌鈣蛋白 I(cTn-1)ELISA試劑盒(江蘇卡爾文生物技術(shù)有限公司,批號20150901 A);NO試劑盒(南京建成生物有限公司,批號20151216),內(nèi)皮素(ET-1)、前列環(huán)素(PGI2)、血栓素(TXA2)ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司,批號CSB-E06979 r,CSB-E13706 r,CSB-E12689 r)。

        2 方法

        2.1 動(dòng)物分組

        將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型對照組、西藥對照組(消心痛)、中藥對照組(復(fù)方丹參滴丸)和芎歸六君子湯組5組。

        2.2 給藥方法

        以等效劑量計(jì)算,于實(shí)驗(yàn)開始即口服灌胃給藥,每日1次,持續(xù)10周。假手術(shù)組和模型對照組均給予生理鹽水10 ml/kg,西藥對照組給予消心痛4.2 mg/kg,中藥對照組給予復(fù)方丹參滴丸85 mg/kg,中藥組給予芎歸六君子湯6.3 g/kg。

        2.3 模型制備

        一次性腹腔注射維生素D3 60萬單位/kg,同時(shí)每天灌服脂肪乳10 ml/kg(脂肪乳配比,每500 ml含10%膽固醇、20%豬油、1%丙硫氧嘧啶和2%脫氧膽酸鈉),連續(xù)10周,制備動(dòng)脈硬化模型[3]。10周末麻醉,仰臥位固定,氣管插管連接動(dòng)物人工呼吸機(jī),記錄肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖。胸部備皮、消毒、鋪巾,于第2~3肋間偏左4~5 mm處開胸,剪開心包輕壓擠出心臟,迅速結(jié)扎冠脈左前降支,肉眼觀察結(jié)扎線下心肌顏色變蒼白,搏動(dòng)減弱,心電圖顯示ST段明顯弓背抬高,表示造模成功。回納心臟,迅速關(guān)閉胸腔,待大鼠出現(xiàn)自主呼吸后拔除氣管插管[4]。假手術(shù)組只穿線不接扎。

        2.4 檢測指標(biāo)與方法

        戊巴比妥麻醉測定血流動(dòng)力學(xué);腹主動(dòng)脈取血,低溫離心10 min,轉(zhuǎn)速3000 r/min,分離血清或血漿,取左心室。

        2.4.1 血流動(dòng)力學(xué)檢測 分離右頸總動(dòng)脈,結(jié)扎遠(yuǎn)心端,近心端做切口插入充滿抗凝劑的導(dǎo)管(聯(lián)接壓力換能器分析端子),向前推行至主動(dòng)脈瓣入口處,待其開放時(shí)將導(dǎo)管插入左心室,結(jié)扎固定導(dǎo)管。連接 Power Lab 血流動(dòng)力學(xué)信號采集與分析系統(tǒng),檢測左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室上升最大速率(+dp/dtmax)和左室下降最大速率 (-dp/dtmax)[5]。

        2.4.2 心肌酶譜與肌鈣蛋白測定 檢測血清LDH、CK-MB、AST、cTn-1水平,具體操作參照試劑盒說明書。

        2.4.3 血管內(nèi)皮活性物質(zhì)檢測 硝酸還原酶法檢測血清NO,ELISA法檢測血清ET-1、PGI2、TXA2水平,具體操作參照試劑盒說明書。

        2.4.4 心梗面積測定 取心臟4 ℃ 預(yù)冷生理鹽水洗去血污,剪去心房、右心室(保留室間隔)及血管、脂肪組織,取左心室-20℃ 速凍后切片,沿心尖向基底部以2 mm為標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)切片,放入1%TTC 的磷酸緩沖液,置于恒溫 37 ℃水浴箱染色15 min。染色后梗死區(qū)呈灰白色,未梗死區(qū)呈磚紅色。手術(shù)刀片剝離非梗死區(qū)心肌,將梗死心肌與未梗死心肌分別稱重,以梗死心肌占左心室肌質(zhì)量的百分比表示梗死范圍[6]。

        2.4.5 心肌組織病理形態(tài)學(xué)觀察 心尖部心肌用預(yù)冷 0.9%NaCl 注射液沖洗、濾紙吸濕,4%多聚甲醛液中固定,石蠟包埋,按4 μm厚度連續(xù)切片, HE染色,光學(xué)顯微鏡觀察。

        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較用F檢驗(yàn)。

        3 結(jié)果

        3.1 芎歸六君子湯對心梗大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響

        表1顯示, 與假手術(shù)組比較,模型對照組LVEDP升高,LVSP、+dp/dtmax與-dp/dtmax下降(P<0.01)。經(jīng)過藥物治療均有顯著改善,其中芎歸六君子湯組效果最為顯著(P<0.01)。

        表1 芎歸六君子湯對心梗大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響( mmHg,±s)

        表1 芎歸六君子湯對心梗大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響( mmHg,±s)

        組 別例數(shù)LVSPLVEDP+dp/dtmax-dp/dtmax假手術(shù)組12145.8±5.09.8±1.3 5311±644761±86模型對照組1296.5±4.3ΔΔ20.9±1.6ΔΔ3128±122ΔΔ2640±93ΔΔ消心痛組12108.2±5.1▲▲15.1±2.5▲▲4155±121▲▲3429±92▲▲丹參滴丸組12112.4±5.1▲▲13.8±2.1▲▲4381±67▲▲★★3739±85▲▲★★芎歸六君子湯組12130.3+5.2▲▲★★●●11.1±1.7▲▲★★●●4756±107▲▲★★●●4149±86▲▲★★●●

        注:與假手術(shù)組比較:ΔΔP<0.01;與模型對照組比較:▲▲P<0.01;與消心痛組比較:★★P<0.01;與丹參滴丸組比較:●●P<0.01

        3.2 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌酶和肌鈣蛋白的影響

        表2顯示,與假手術(shù)組比較,模型對照組各項(xiàng)心肌酶指標(biāo)及肌鈣蛋白均顯著升高(P<0.01),說明心肌出現(xiàn)嚴(yán)重缺血壞死。各用藥組心肌酶較之模型對照組顯著降低(P<0.01),芎歸六君子湯組效果顯著,優(yōu)于消心痛組(P<0.05)和丹參滴丸組(P<0.01)。

        3.3 芎歸六君子湯對心梗大鼠血管內(nèi)皮活性物質(zhì)的影響

        表3顯示,與假手術(shù)組比較,模型對照組ET-1、TXA2顯著升高,NO、PGI2顯著降低(P<0.01)。與模型對照組比較, 各給藥組顯著改善(P<0.01),芎歸六君子湯組效果優(yōu)于消心痛組和丹參滴丸組(P<0.01)。

        表2 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌酶和肌鈣蛋白的影響(±s)

        表2 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌酶和肌鈣蛋白的影響(±s)

        組 別例數(shù)LDH(U/L)CK-MB (U/L)AST(U/L)cTn-1(ng/ml)假手術(shù)組12254±24530±48516±5540±7模型對照組122380±193ΔΔ1934±96ΔΔ896±58ΔΔ314±30ΔΔ消心痛組121549±161▲▲1565±90▲▲788±43▲▲200±21▲▲丹參滴丸組121257±185▲▲★1366±83▲▲★740±50▲▲196±9▲▲芎歸六君子湯組12878±98▲▲★●●975±69▲▲★●●697±65▲▲★94±10▲▲★●●

        注:與假手術(shù)組比較:ΔΔP<0.01;與模型對照組比較:▲▲P<0.01;與消心痛組比較:★P<0.05;與丹參滴丸組比較:●●P<0.01

        表3 芎歸六君子湯對心梗大鼠血管內(nèi)皮活性物質(zhì)的影響(±s)

        表3 芎歸六君子湯對心梗大鼠血管內(nèi)皮活性物質(zhì)的影響(±s)

        組 別例數(shù)ET-1(ng/L)NO(μmol/L)PGI2(ng/L)TXA2(ng/L)假手術(shù)組125.76±1.0745.77±2.65167.98±10.9510.49±1.04模型對照組1215.30±1.00ΔΔ28.50±1.17ΔΔ115.39±11.44ΔΔ28.48±1.88ΔΔ消心痛組1211.34±1.30▲▲34.53±1.84▲▲134.65±9.48▲▲21.60±1.57▲▲丹參滴丸組1210.58±1.43▲▲35.33±1.87▲▲150.75±11.20▲▲★★18.72±1.34▲▲★★芎歸六君子湯組127.97±1.16▲▲★★●●40.28±1.37▲▲★★●●159.34±8.49▲▲★★15.49±1.00▲▲★★●●

        注:與假手術(shù)組比較:ΔΔP<0.01;與模型對照組比較:▲▲P<0.01;與消心痛組比較:★★P<0.01;與丹參滴丸組比較:●●P<0.01

        3.4 芎歸六君子湯對大鼠心梗面積的影響

        表4顯示, 與假手術(shù)組比較,模型對照組心肌梗死面積較大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。各用藥組顯著降低心肌梗死面積,其中芎歸六君子湯組效果最為顯著(P<0.01)。

        表4 芎歸六君子湯對大鼠心梗面積的影響(±s)

        表4 芎歸六君子湯對大鼠心梗面積的影響(±s)

        組 別例數(shù)左室重(mg)梗死心肌重(mg)梗死范圍(%)假手術(shù)組12616.58±9.4900模型對照組12625.50±5.76 126.33±6.9320.19±0.95ΔΔ 消心痛組12640.00±5.6195.25±3.5514.96±0.44▲▲丹參滴丸組12636.67±6.5890.58±4.3814.39±0.60▲▲芎歸六君子湯組12629.62±10.8375.83±3.4911.85±0.51▲▲★★●●

        注:與假手術(shù)組比較:ΔΔP<0.01;與模型對照組比較:▲▲P<0.01;與消心痛組比較:★★P<0.01;與丹參滴丸組比較:●●P<0.01

        圖1 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌組織病理改變的影響(光鏡×400)

        3.5 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌組織病理改變的影響

        圖1顯示,HE染色顯示,假手術(shù)組心肌結(jié)構(gòu)正常,肌原纖維排列整齊,無腫脹變性壞死;模型對照組發(fā)生大面積局灶性病變,變性壞死明顯,心肌纖維呈長波浪形,排列紊亂、斷裂,心肌間質(zhì)大量炎細(xì)胞浸潤;消心痛組部分纖維斷裂,細(xì)胞水腫變性,間質(zhì)增寬,大量炎細(xì)胞浸潤;丹參滴丸組心肌細(xì)胞部分腫脹,心肌纖維排列較為整齊,較多炎細(xì)胞浸潤;芎歸六君子湯組心肌細(xì)胞輕度腫脹變性,心肌纖維排列基本整齊,少量炎細(xì)胞浸潤。

        4 討論

        脾胃主運(yùn)化水谷和水液,是后天之本,氣血生化之源。心主血脈,心之氣血來源于中焦脾胃?!秱H山堂類辯》曰:“血乃中焦之汁,流溢于中以為精,奉心化赤而為血?!逼⑽附∵\(yùn)則心氣充足,心血充沛,心血管功能才能正常。脾失健運(yùn)一則水谷不化,氣血乏源,心無所倚,神無所主;二則水液不化,助濕生痰,阻于血脈,流于經(jīng)絡(luò),氣血停滯,聚而為瘀;三則脾胃居于中焦,斡旋氣機(jī),脾胃氣滯,上逆于心。由此,脾胃失常累及于心,心之氣血不足或瘀滯則發(fā)為胸痹。

        《金匱要略·胸痹心痛短氣病脈證治》指出,胸痹,心中痞,枳實(shí)薤白桂枝湯主之,人參湯亦主之。鄧鐵濤和沈紹功等專家均提出采用補(bǔ)氣活血或補(bǔ)氣祛痰法治療冠心病。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明,高脂血癥是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,脂質(zhì)代謝異常源于消化系統(tǒng),屬于中醫(yī)脾胃腸范疇。胃腸與心血管系統(tǒng)均受植物神經(jīng)支配,胃腸壁在化學(xué)或機(jī)械性刺激下促進(jìn)兒茶酚胺分泌,誘導(dǎo)冠脈痙攣缺血。因此,冠心病與脾胃具有相關(guān)性,從脾胃論治冠心病具有歷史淵源和現(xiàn)代研究基礎(chǔ)。

        冠心病心肌梗死后,肌原纖維變性、溶解、斷裂、壞死,肌絲增寬,肌節(jié)斷裂,血流動(dòng)力學(xué)改變,心室舒縮功能下降。LVSP、LVEDP、+dP/dtmax、-dP/dtmax是反映血流動(dòng)力學(xué)的重要指標(biāo)。LVSP、+dp/dtmax代表左室收縮功能,LVEDP、-dp/dtmax反映舒張功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,心梗造模后,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax顯著下降,LVEDP顯著上升,提示左心室收縮和舒張功能出現(xiàn)障礙。芎歸六君子湯能顯著改善血流動(dòng)力學(xué)和心室舒縮功能,調(diào)整心肌順應(yīng)性。

        心肌酶廣泛存在于心肌細(xì)胞中,在心肌能量代謝中具有重要價(jià)值。肌鈣蛋白是肌肉的主要調(diào)節(jié)蛋

        白,心梗后心肌細(xì)胞缺血缺氧,細(xì)胞膜通透性升高,心肌酶和肌鈣蛋白復(fù)合物釋放入血,導(dǎo)致血液中含量升高。心肌損傷程度和范圍不同,升高幅度也不同。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組心肌酶譜和肌鈣蛋白含量顯著升高,表明心肌損傷使通透性增加。各給藥組尤其是芎歸六君子湯組能顯著降低其含量,提示芎歸六君子湯能維持心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性,減輕心肌損傷。

        血管內(nèi)皮功能不僅是冠心病的基礎(chǔ)起始步驟,還是該病發(fā)展過程中的關(guān)鍵步驟[7]。血管內(nèi)皮能夠產(chǎn)生和釋放血管活性物質(zhì),調(diào)節(jié)血凝和纖溶,參與炎癥和免疫反應(yīng),調(diào)節(jié)白細(xì)胞、血小板對內(nèi)皮表面黏附、脂質(zhì)氧化和血管通透性,維持心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。心梗后心肌缺血誘發(fā)血管內(nèi)皮損傷,促使細(xì)胞因子釋放,導(dǎo)致微循環(huán)障礙和心肌細(xì)胞增殖。該研究顯示,芎歸六君子湯能調(diào)節(jié)內(nèi)皮活性物質(zhì)釋放,緩解血管痙攣,降低血液高凝,抑制血栓,促進(jìn)微血管內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。

        心梗患者廣泛存在氣虛痰濁血瘀病機(jī),芎歸六君子湯以黨參、白術(shù)、茯苓、甘草健脾補(bǔ)氣,促進(jìn)脾胃運(yùn)化和氣血化生;半夏、陳皮化痰理氣,消除痰脂;川芎、當(dāng)歸活血祛瘀,理氣行滯,8藥和參共奏補(bǔ)氣生血、化痰祛瘀之效,不僅能改善脾胃功能,還能促進(jìn)心肌供血,消除痰濁瘀滯。該研究結(jié)果顯示,芎歸六君子湯能改善心肌梗死大鼠心室舒縮功能和順應(yīng)性,降低心肌梗死面積,改善心肌酶、血管內(nèi)皮功能和組織病理學(xué)變化,對于心肌梗死具有良好的治療作用。該結(jié)果表明,改善脾胃功能、促進(jìn)運(yùn)化,能夠化生氣血、消除痰瘀,促進(jìn)心肌供血和細(xì)胞穩(wěn)定,緩解血管痙攣、血液高凝,減輕心肌損傷,對于治療心肌梗死大有裨益。關(guān)于其治療機(jī)制,尚有待下一步研究予以深入闡釋。

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