劉瑞華，趙德強(qiáng)

1.新宇藥業(yè)股份有限公司，宿州，234000；2.宿州市獸藥飼料管理站，宿州，234000

林可霉素(Lincomycin)及其衍生物是一類(lèi)在臨床上具有重要意義的林可酰胺類(lèi)抗生素，主要用于治療革蘭氏陽(yáng)性菌引起的感染[1]。鹽酸林可霉素(Lincomycin hydrochloride)對(duì)金葡菌、鏈球菌、沙門(mén)氏菌、大腸桿菌均有顯著的抑制作用，對(duì)于支氣管炎等病癥療效顯著[2]，在臨床上多用于治療化膿性炎癥和感染以及骨質(zhì)炎癥，也可作為抗瘧疾藥物，具有重要的臨床意義和藥用價(jià)值[3]。藥品中的殘留溶劑是指在原料藥及輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過(guò)程中使用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑[4]。殘留溶劑超過(guò)安全值后會(huì)對(duì)人體造成一定損害，因此要控制生產(chǎn)過(guò)程中有機(jī)溶劑殘留的含量[5]。本文采用氣相色譜法檢測(cè)新宇藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的鹽酸林可霉素原料藥中有機(jī)溶劑殘留含量，主要溶劑殘留為丙酮和丁醇。方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與方法

1.1 儀 器

Agilent GC7890型氣相色譜儀(美國(guó)Agilent 公司)；頂空進(jìn)樣器。

1.2 試劑及藥品

丙酮、丁醇均為分析純；超純水由超純水儀制備；鹽酸林可霉素原料藥3個(gè)批次樣品(新宇藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)為:17122098-1，17122098-2，17122098-3)。

1.3 色譜條件

色譜柱：DB-624(125-1334)，30.0 m×0.53 mm×3 μm；柱溫：50 ℃(2 min， 12 ℃/min)→130 ℃(4 min)；進(jìn)樣口：分流模式，分流比1:5，汽化溫度200 ℃；載氣：N2；FID檢測(cè)器：溫度為250 ℃，氫氣流量為30 mL/min，空氣流量為300 mL/min ；進(jìn)樣體積：1.0 mL[6-7]。

DK3001頂空進(jìn)樣器檢測(cè)條件[8]：油浴溫度：90 ℃；閥箱溫度：100 ℃；管路溫度：110 ℃ 平衡時(shí)間 30 min。

1.4 試驗(yàn)樣品的制備

1.4.1 丙酮、丁醇貯備液：

準(zhǔn)確稱(chēng)取丙酮、丁醇各0.5 g至已盛有約50 mL超純水的100 mL容量瓶中，然后用超純水稀釋至刻度，混勻，備用。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液：

準(zhǔn)確吸取丙酮、丁醇貯備液各5 mL至已加50 mL超純水的100 mL容量瓶中，再用超純水定容至刻度線(xiàn)，混勻即得100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4.3 樣品溶液：

準(zhǔn)確稱(chēng)取鹽酸林可霉素原料藥1g，至10 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，混勻即得0.1 g/mL的樣品溶液。

1.5 測(cè)定方法

分別移取8.0 mL空白溶液1份、標(biāo)準(zhǔn)溶液9份、樣品溶液3份于不同的20 mL頂空樣品瓶中，立即蓋封；按檢測(cè)參數(shù)設(shè)定儀器條件，待系統(tǒng)穩(wěn)定后依次進(jìn)樣并記錄圖譜，按下式計(jì)算各殘留溶劑的量：

式中：Ai為進(jìn)樣樣品溶液所得圖譜中相應(yīng)組分峰面積響應(yīng)值；As為6次平行進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液所得圖譜中相應(yīng)組分峰面積響應(yīng)值的平均值；Cs為標(biāo)準(zhǔn)溶液中響應(yīng)組分的實(shí)際濃度；Wi為樣品質(zhì)量；V為樣品溶液的體積。

2 結(jié)果與分析

2.1 專(zhuān)屬性檢測(cè)

空白溶劑：超純水。峰定位溶液：取上述1.4.2下所配標(biāo)準(zhǔn)溶液作為丙酮峰定位溶液和丁醇峰定位溶液。混合對(duì)照樣：精密量取丙酮和丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 mL加入到10 mL容量瓶中，用超純水定容，作為混合對(duì)照溶液。分別取上述溶液適量進(jìn)樣1 μL，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 專(zhuān)屬性檢測(cè)結(jié)果

2.2 線(xiàn)性關(guān)系

精確量取上述1.4.2下所配標(biāo)準(zhǔn)溶液,據(jù) ICH 指南 Q3C(R3)[9]中各殘留溶劑的最低限以超純水配置出一系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述各溶液適量，頂空進(jìn)樣1 μL，記錄色譜圖如圖1，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸。計(jì)算所得結(jié)果為表2。

圖1 樣品溶液的氣相色譜圖

溶劑線(xiàn)性方程r線(xiàn)性范圍LOQ/(ug/mL)LOD/(ug/mL)丙酮y=42.717x-30.9770.99911-2000.82.31丁醇y=41.914x-41.3540.99910.5-2000.92.72

2.3 精密度

取上述1.4.2下8 mL丙酮和丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液各3份于不同的20 mL頂空樣品瓶中，立即蓋封。放入氣相色譜中進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)其保留峰面積計(jì)算丙酮和丁醇的RSD分別為2.1%、1.8%。均小于2.5%，表明精密度良好，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。

2.4 回收率

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別移取1.4.1項(xiàng)下儲(chǔ)備溶液4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL到50 mL量瓶，用超純水定容至刻度線(xiàn)，搖勻，得到3個(gè)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為 80%、100%、120%的溶液?；厥章蕶z測(cè)液：精密稱(chēng)取200 mg 的樣品到頂空瓶 3份，分別加入2 mL 80%、100%、120%的 3個(gè)不同濃度的溶液，每個(gè)濃度各取 3份，按照前述分析方法測(cè)定。結(jié)果測(cè)得丙酮的平均回收率為 97.02%，RSD 為 1.4%；丁醇的平均回收率為 98.89%，RSD為 1.7%。

2.5 樣品測(cè)定

精密移取上述1.4.3方法下所制樣品溶液8.0 mL，按照1.5所述方法進(jìn)行樣品含量測(cè)定。通過(guò)檢測(cè)峰面積并通過(guò)上述計(jì)算公式計(jì)算可得樣品中各溶劑殘留含量。結(jié)果如表3所示。

表3 樣品中溶劑殘留檢測(cè)結(jié)果

注：“—”表示未檢測(cè)出或含量小于定量限。

3 結(jié)果與結(jié)論

3.1 色譜柱的選擇

由于藥物中的殘留溶劑丙酮和丁醇的極性差異較大，因此對(duì)色譜柱的要求比較高。色譜柱的極性過(guò)大或過(guò)小，都不能使殘留溶劑得到較好分離[10]。通過(guò)嘗試不同極性的色譜柱，經(jīng)多次試驗(yàn)并結(jié)合文獻(xiàn)最終發(fā)現(xiàn)，中等極性的DB-624色譜柱可以使藥物中殘留溶劑達(dá)到較好分離效果[11-12]。

3.2 色譜條件的選擇

殘留溶劑丁醇的沸點(diǎn)和丙酮的沸點(diǎn)相差較大[13]，因此我們采用逐漸升溫程序，先使沸點(diǎn)低的溶劑分離出來(lái)，然后再迅速升溫分離高沸點(diǎn)的溶劑，加快分離殘留溶劑的時(shí)間，縮短了分析時(shí)間。

本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜法檢測(cè)三種不同批次的鹽酸林可霉素原料藥中殘留溶劑的含量。結(jié)果表明采用頂空進(jìn)樣的方式在該色譜條件下，精確度高，操作簡(jiǎn)單，可快速準(zhǔn)確地檢測(cè)鹽酸林可霉素原料藥中殘留溶劑(丙酮，丁醇)的含量。

經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，我們所檢測(cè)的三種不同批次的鹽酸林可霉素原料藥中溶劑殘留丙酮和丁醇的回收率在97%—102%，RSD均小于2.5%，且r>0.999具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。根據(jù)鹽酸鹽酸林可霉素USP轉(zhuǎn)化及規(guī)格中對(duì)于丙酮(≤1000 μg/mL)和丁醇(≤500 μg/mL)的殘留含量規(guī)定[14]，我們所檢測(cè)的樣品中殘留溶劑含量遠(yuǎn)低于此標(biāo)準(zhǔn)，減少了藥物中有機(jī)溶劑殘留對(duì)人體的傷害，說(shuō)明新宇藥業(yè)股份有限公司對(duì)處理鹽酸林可霉素原料藥中有機(jī)溶劑殘留的方法可行，所生產(chǎn)的鹽酸林可霉素原料藥為優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。